ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
«НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЭКСПЕРТИЗЫ СРЕДСТВ МЕДИЦИНСКОГО
ПРИМЕНЕНИЯ» РОСЗДРАВНАДЗОРА
XII
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ЧАСТЬ 1
Москва 2007

Двенадцатому изданию Государственной Фармакопеи Российской Федерации предшествовали
следующие издания Фармакопеи на русском языке: первое - 1866 г., второе
- 1871 г., третье - 1880 г., четвертое - 1891 г., пятое - 1902г., шестое - 1910 г.,
седьмое - 1925 г., восьмое - 1946 г., девятое - 1961 г., десятое - 1968 г., одиннадцатое
- 1987 г. (первый выпуск) и 1990 г. - (второй выпуск).
После выпуска одиннадцатого издания вводились в действие общие фармакопейные
статьи, фармакопейные статьи и изменения, имеющие юридическую силу, равную
Государственной Фармакопее.
Первая часть Государственной Фармакопеи Российской Федерации XII издания подготовлена
Институтом стандартизации и контроля лекарственных средств Федерального
государственного учреждения «Научный центр экспертизы средств медицинского
применения» Росздравнадзора при участии Научно-исследовательского института
фармации Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, фармацевтического
факультета Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, Государственного
научного центра «Институт биофизики» и специалистов ведущих научных Центров и
промышленныхпредприятий.
Общие фармакопейные и фармакопейные статьи, включенные в настоящее издание,
утверждены приказом Минздравсоцразвития России от 15 октября 2007 г. № 641.
Р85 Государственная фармакопея российской федерации / «Издательство «Научный
центр экспертизы средств медицинского применения», 2008.- 704 с: ил.
ISBN 978-5-9901447-1-2
ББК 52.8
ISBN 978-5-9901447-1-2 © Коллектив авторов
Все права авторов защищены. Ни одна часть этого издания не может быть занесена в память
компьютера либо воспроизведена любым способом без предварительного письменного разрешения
издателя.

СОДЕРЖАНИЕ
I. РЕДАКЦИОННЫЙ СОВЕТ РОСЗДРАВНАДЗОРА
ПО ОРГАНИЗАЦИИ РАБОТЫ НАД ГОСУДАРСТВЕННОЙ
ФАРМАКОПЕЕЙ 7
II. ПРЕДИСЛОВИЕ 9
III. ОРГАНИЗАЦИИ, УЧРЕЖДЕНИЯ РОССИИ И СПЕЦИАЛИСТЫ,
ПРИНЯВШИЕ УЧАСТИЕ В ПОДГОТОВКЕ 1 ЧАСТИ
ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАКОПЕИ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ XII ИЗДАНИЯ 10
IV. ВВЕДЕНИЕ 13
ОБЩИЕ ФАРМАКОПЕЙНЫЕ СТАТЬИ
1. Правила пользования фармакопейными статьями (ОФС 42-0031-07) 17
2. Единицы международной системы (СИ), используемые в фармакопее,
и их соответствие другим единицам (ОФС 42-0032-07) 22
МЕТОДЫ АНАЛИЗА 26
3. Оборудование (ОФС42-0033-07) 26
ФИЗИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
АНАЛИЗА 29
4. Температура плавления (ОФС 42-0034-07) 29
5. Температура затвердевания (ОФС 42-0035-07) 34
6. Температурные пределы перегонки
и точка кипения (ОФС 42-0036-07) 36
7. Плотность (ОФС 42-0037-07) 38
8. Вязкость (ОФС 42-0038-07) 41
9. Определение спирта этилового в жидких фармацевтических
препаратах (ОФС 42-0039-07) 49
10. Рефрактометрия (ОФС 42-0040-07) 52
11. Поляриметрия (ОФС 42-0041 -07) 54
12. Спектроскопические методы 56
12.1. Спектрофотометрия в ультрафиолетовой
и видимой областях (ОФС 42-0042-07) 56
12.2. Спектрометрия в инфракрасной области (ОФС 42-0043-07) 62
12.3. Атомно-эмиссионная и атомно-абсорбционная
спектрометрия (ОФС 42-0044-07) 66
12.4. Флуориметрия (ОФС 42-0045-07) 70
12.5. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ОФС42-0046-07) 73
13. Осмолярность (ОФС 42-0047-07) 78
14. Иоиом&трт (ОФС 42-0048-07) 85
15. Растворимость (ОФС 42-0049-07) 92
16. Степень окраски жидкостей (ОФС 42-0050-07) 93
17. Прозрачность и степень мутности жидкостей
(ОФС 42-0051-07) 98

ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА 101
18. Определение азота в органических соединениях
методом Къельдаля (ОФС 42-0052-0 7) 101
19. Определение белка (ОФС 42-0053-07) 105
20. Нитритометрия СОФС 42-0054-0 7) 114
ИСПЫТАНИЕ НА ПРЕДЕЛЬНОЕ СОДЕРЖАНИЕ
ПРИМЕСЕЙ 115
21. Общая зола (ОФС 42-0055-07) 115
22. Сульфатная зола (ОФС 42-0056-07) 115
23. Остаточные органические растворители (ОФС 42-0057-07) 115
24. Испытание на чистоту и допустимые пределы примесей 118
24.1. Железо (ОФС 42-0058-07) 119
24.2. Тяжелые металлы (ОФС 42-0059-07) 121
БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ 124
25. Аномальная токсичность (ОФС 42-0060-07) 124
26. Пирогенность (ОФС 42-0061-07) 125
27. Бактериальные эндотоксины (ОФС 42-0062-07) 128
28. Испытание на гистамин ("ОФС 42-0063-07) 136
29. Испытание на депрессорные вещества (ОФС 42-0064-07) 140
30. Биологические методы оценки активности лекарственного
растительного сырья и лекарственных препаратов, содержащих
сердечные гликозиды (ОФС 42-0065-07) 141
31. Стерильность (ОФС 42-0066-0 7) 150
32. Микробиологическая чистота (ОФС 42-0067-07) 160
33. Определение антимикробной активности антибиотиков
методом диффузии в агар (ОФС 42-0068-0 7) 194
34. Определение эффективности антимикробных консервантов лекарственных
средств (ОФС 42-0069-07) 216
РЕАКТИВЫ 220
35. Реактивы. Индикаторы (ОФС 42-0070-07) 220
36. Титрованные растворы (ОФС 42-0071-07) 425
37. Буферные растворы (ОФС 42-0072-07) 443
38. Радиофармацевтические препараты (ОФС 42-0073-07) 456
39. Фармацевтические субстанции (ОФС 42-0074-07) 484
40. Сроки годности лекарственных средств (ОФС 42-0075-07) 488
ФАРМАКОПЕЙНЫЕ СТАТЬИ 493
Азитромицин^ФС^2-0273-07) 493
Амлодипина бесилат (ФС 42-0214-07) 496
Анальгин (ФС 42-0215-07) 498
Арбидол (^ФС 42-0216-07) 502
Артикаина гидрохлорид (ФС 42-0217-07) 503
Аскорбиновая кислота (ФС 42-0218-07) 506
Атенолол (ФС 42-0219-0 7) 509
Ацетилсалициловая кислота (ФС 42-0220-0 7) 511

Ацикловир (ФС 42-0221-07) 513
Бария сульфат (ФС 42-0222-07) 516
Бромгексина гидрохлорид (ФС 42-0223-07) 517
Верапамила гидрохлорид (ФС 42-0224-07) 519
Галоперидол (ФС 42-0225-07) 522
Гвайфенезин (ФС 42-0226-07) 524
Гидрокортизона ацетат (ФС 42-0227-07) 527
Гликлазид (ФС 42-0228-07) 529
Глутаминовая кислота (ФС 42-0229-07) 531
Диазепам (ФС 42-0230-07) 533
Диазолин (ФС 42-0231-07) 534
Димедрол (ФС 42-0232-07) 536
Доксазозина мезилат (ФС 42-0233-07) 539
Дроперидол (ФС 42-0234-07) 541
Дротаверина гидрохлорид (ФС 42-0235-07) 543
Изониазид (ФС 42-0236-07) 546
Итраконазол (ФС 42-023 7-07) 548
Кальция глюконат (ФС 42-0238-07) 550
Каптоприл (ФС 42-0239-07) 552
Карбамазепин (ФС 42-0240-07) 553
Кетамина гидрохлорид (ФС 42-0241-07) 557
Кеторолак трометамин (ФС 42-0242-07) 558
Клемастина фумарат (ФС 42-0243-0 7) 561
Клотримазол (ФС 42-0244-07) 563
Клофелина гидрохлорид (ФС 42-0245-07) 565
Кодеин (ФС 42-0246-07) 567
Кодеина фосфат (ФС 42-0247-07) 569
Кофеин (ФС 42-0248-07) 571
Кофеин безводный (ФС 42-0249-07) 573
Левомицетин (ФС 42-0250-07) 576
Лидокаина гидрохлорид (ФС 42-0251-07) 578
Лизиноприл (ФС 42-0252-07) 579
Магния сульфат (ФС 42-0253-07) 582
Мелоксикам (ФС 42-0254-07) 583
Мельдоний (ФС 42-0255-07) 585
Метилурацил (ФС 42-0256-07) 588
Метронидазол (ФС 42-025 7-07) 590
Метформина гидрохлорид (ФС 42-0258-07) 592
Напроксен (ФС 42-0259-07) 593
Натрия диклофенак (ФС 42-0260-07) 595
Натрия кромогликат (ФС 42-0261-07) 597
Никотинамид (ФС 42-0262-07) 599
Никотиновая кислота (ФС 42-0263-07) 600
Нитразепам (ФС 42-0264-07) 602
Новокаина гидрохлорид (ФС 42-0265-07) 603

Ондансетрона гидрохлорид (ФС 42-0266-07) 605
Папаверина гидрохлорид (ФС 42-0267-07) 609
Парацетамол (ФС 42-0268-07) 611
Пирацетам (ФС 42-0269-07) 613
Пиридоксина гидрохлорид (ФС 42-0270-07) 615
Пироксикам (ФС 42-0271-07) 617
Питофенона гидрохлорид (ФС 42-02 72-0 7) 619
Пропранолола гидрохлорид (ФС 42-0273-07) 621
Ранитидина гидрохлорид (ФС 42-0274-07) 622
Рибоксин (ФС 42-0275-07) 624
Симвастатин (ФС 42-02 76-0 7) 627
Спиронолактон (ФС42-0277-07) 630
Сульфадпметоксин (ФС 42-0278-07) 633
Теофиллин (ФС 42-0279-07) 635
Тиамина хлорид (ФС 42-0280-07) 637
Тинидазол (ФС 42-0281 -07) 639
Тиоридазин (ФС 42-0282-07) 641
Тиоридазина гидрохлорид (ФС 42-0283-07) 642
а-Токоферола ацетат (ФС 42-0284-07) 644
Феназепам (ФС 42-0285-07) 647
Фенпивериния бромид (ФС 42-0286-0 7) 648
Фуразолидон (ФС 42-0287-07) 650
Фуросемид (ФС 42-0288-07) 652
Хлоропирамина гидрохлорид (ФС 42-0289-07) 654
ПРИЛОЖЕНИЯ 657
Приложение 1.ИК-спектры 659
Приложение 2. Таблицы 681
Наименования, символы и относительные атомные массы
элементов 682
Соотношение между плотностью водно-спиртового раствора
и содержанием безводного спирта в растворе 684

I. РЕДАКЦИОННЫЙ СОВЕТ
ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ
ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ
ПО ОРГАНИЗАЦИИ РАБОТЫ
НАД ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАКОПЕЕЙ
Председатель
Юргель
Николай Викторович
Заместители председателя
Багирова
Валерия Леонидовна
Младенцев
Андрей Леонидович
- руководитель Федеральной службы по надзору
в сфере здравоохранения и социального развития
(Ро с здравнадзора)
- директор Института стандартизации и контроля
лекарственных средств (ИСКЛС) ФГУ «Научный
центр экспертизы средств медицинского применения
» Федеральной службы по надзору в сфере
здравоохранения и социального развития (ФГУ
НЦЭСМП Росздравнадзора)
- заместитель руководителя Росздравнадзора
Ответственный секретарь
Митькина -руководитель аналитической лаборатории
Лидия Ивановна научно-методического отдела ИСКЛС ФГУ
НЦЭСМП Росздравнадзора
Члены Совета
Беленков
Юрий Никитич
Володин
Николай Николаевич
- руководитель Федерального агентства по здравоохранению
и социальному развитию (Росздрав)
- заместитель руководителя Росздрава
Гильдеева
Гелия Назыфовна
Ковалева
Елена Леонардовна
Косенко
Валентина Владимировна
Рейхарт
Дмитрий Владимирович
- заместитель директора Департамента развития
медицинской помощи и курортного дела Мин-
здравсоцразвития России
- заместитель директора ИСКЛС ФГУ НЦЭСМП
Росздравнадзора
- начальник Управления организации государственного
контроля обращения медицинской продукции
и средств реабилитации инвалидов
Росздравнадзора
- и.о. директора Федерального фонда обязательного
медицинского страхования

Сакаев - заместитель директора Департамента фарма-
Марат Рустамович цевтической деятельности, региональной и информационной
политики по вопросам
здравоохранения и социального развития Мин-
здравсоцразвития России
Сокольская - заместитель директора ГУ «ВНИИ лекарствен-
Татьяна Александровна ных и ароматических растений»
Стародубов - заместитель Министра здравоохранения и со-
Владимир Иванович циального развития Российской Федерации
Тельнова - заместитель руководителя Росздравнадзора
Елена Алексеевна
Хабриев - заместитель директора Департамента социаль-
Рамил Усманович ного развития и охраны окружающей среды Правительства
Российской Федерации
Шаназаров - руководитель лаборатории экспертизы и стан-
Карим Сагамбаевич дартизации ИСКЛС ФГУ НЦЭСМП Росздравнадзора

II. ПРЕДИСЛОВИЕ
Двенадцатому изданию Государственной фармакопеи Российской Федерации
предшествовали следующие издания Фармакопеи на русском языке: первое
- 1866 г., второе - 1871 г., третье - 1880 г., четвертое - 1891 г., пятое - 1902 г.,
шестое - 1910 г., седьмое - 1925 г., восьмое - 1946 г., девятое - 1961 г., десятое
- 1968 г., одиннадцатое - 1987 г. (первый выпуск) и 1990 г. (второй выпуск).
После выпуска одиннадцатого издания вводились в действие Общие фармакопейные
статьи, Фармакопейные статьи и Изменения, имеющие юридическую
силу, равную Государственной фармакопее.
Первая часть Государственной фармакопеи Российской Федерации XII издания
подготовлена Институтом стандартизации и контроля лекарственных
средств Федерального государственного учреждения «Научный центр экспертизы
средств медицинского применения» Росздравнадзора при участии Научно-
исследовательского института фармации Московской медицинской академии им.
И.М. Сеченова, фармацевтического факультета Московской медицинской академии
им. И.М. Сеченова, Государственного научного центра «Институт биофизики
» и специалистов ведущих научных центров и промышленных
предприятий.
Общие фармакопейные и фармакопейные статьи, включенные в настоящее
издание, утверждены приказом Минздравсоцразвития России от 15 октября
2007 г. №641.

III. ОРГАНИЗАЦИИ, УЧРЕЖДЕНИЯ РОССИИ И
СПЕЦИАЛИСТЫ, ПРИНЯВШИЕ УЧАСТИЕ
В ПОДГОТОВКЕ ЧАСТИ 1
ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАКОПЕИ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ XII ИЗДАНИЯ
.. Институт стандартизации и контроля лекарственных средств Феде-
[ьного государственного учреждения «Научный центр экспертизы
дств медицинского применения» Федеральной службы по надзору в
;ре здравоохранения и социального развития (ФГУ НЦЭСМП Росздрав-
(зора):
Багирова В.Л. - директор, доктор фармацевтических наук, профессор
Ю, ФС);
Ковалева Е.Л. - заместитель директора, кандидат биологических наук (39.
ФС);
Митькина Л.И. -руководитель аналитической лаборатории научно-методи-
кого отдела, доктор фармацевтических наук (1-12.4, 14-24, 35-37).
Шаназаров К.С. - руководитель лаборатории экспертизы и стандартизации
/бежных лекарственных средств отдела экспертизы и стандартизации ле-
ственных средств, кандидат химических наук (16, 17, 23, 35-37, 39, 40, ФС);
Полиевктов М.К. - старший научный сотрудник аналитической лаборато-
научно-методического отдела, доктор фармацевтических наук (ФС);
Нечаева Е.Б. - руководитель лаборатории экспертизы химико-фармацевти-
ких препаратов отдела экспертизы и стандартизации лекарственных средств.
дидат фармацевтических наук (35);
Милкина СЕ. - старший научный сотрудник лаборатории экспертизы хи-
:о-фармацевтических препаратов отдела экспертизы и стандартизации ле-
ственных средств (35);
Петрищев Д.С. - научный сотрудник лаборатории хроматографии отдела
1ертизы и стандартизации лекарственных средств (35);
Титова А.В. - ведущий научный сотрудник лаборатории по организации экс-
гизы лекарственных средств научно-методического отдела, кандидат фарма-
гических наук (24, ФС);
Исаева И.В.[- руководитель лаборатории контроля качества органопрепара-
, доктор фармацевтических наук (18);
Ковалева СВ. - ведущий научный сотрудник лаборатории контроля каче-
i органопрепаратов, кандидат биологических наук (18, 19);
Антонова Н.П. - ведущий научный сотрудник лаборатории контроля фито-
паратов отдела контроля качества, кандидат биологических наук (16, 17, 21,
Суранова А.В. - старший научный сотрудник лаборатории по организации
гроля качества лекарственных средств научно-методического отдела, канди-
фармацевтических наук (24.2);
Краюшкина Т.Я. - научный сотрудник лаборатории по организации контроля
гства лекарственных средств научно-методического отдела (24.2);
пи

- Терещенко Е.В. - младший научный сотрудник лаборатории контроля качества
химико-фармацевтических препаратов отдела контроля качества лекарственных
средств (24.2);
- Неугодова Н.П. - руководитель лаборатории фармакологии отдела биологических
методов исследования, кандидат биологических наук (25-30);
- Батуашвили Т. А. - ведущий научный сотрудник лаборатории фармакологии
отдела биологических методов исследования (28, 29);
- Симутенко Л.В. - старший научный сотрудник лаборатории фармакологии
отдела биологических методов исследования (28, 29);
- Сапожникова Г.А. - научный сотрудник лаборатории фармакологии отдела
биологических методов исследования (30);
- Быстрова Л.В. - руководитель отдела биологических методов исследования,
кандидат биологических наук (33);
- Гунар О.В. - руководитель лаборатории микробиологии отдела биологических
методов исследования лекарственных средств, кандидат биологических
наук (31, 32, 34);
- Каграманова К. А. - ведущий научный сотрудник лаборатории микробиологии
отдела биологических методов исследования лекарственных средств, кандидат
биологических наук (31, 32, 34);
- Денисова СВ. - старший научный сотрудник лаборатории микробиологии
отдела биологических методов исследования лекарственных средств, кандидат
биологических наук (31, 34);
- Колбикова А.С. - научный сотрудник лаборатории микробиологии отдела
биологических методов исследования лекарственных средств (31).
2. Научно-исследовательский институт фармации Московской медицинской
академии им. И.М. Сеченова:
- Рудакова И.П. - заведующая лабораторией фармакопеи, доктор химических
наук (4-7, 10, 12.5, 14, 16-19, 21, 22, 24, 30, 35);
- Мелентьева Т.А. - главный научный сотрудник лаборатории фармакопеи,
доктор химических наук (4-7, 9-11, 21-22, 24);
- Дементьева Н.Н. - и.о. заведующей лабораторией фармацевтической химии,
доктор фармацевтических наук, профессор (35);
- Завражная Т.А. - ведущий научный сотрудник лаборатории фармацевтической
химии, кандидат фармацевтических наук (8, 20);
- Сегуру Н.В. - старший научный сотрудник лаборатории фармакопеи, кандидат
фармацевтических наук (9, 14);
- Ильина И.Г. - старший научный сотрудник лаборатории фармакопеи, кандидат
химических наук (11, 14).
3. Фармацевтический факультет Московской медицинской академии
им. И.М. Сеченова:
- Грачев СВ. - проректор по научной работе ММА им. И.М. Сеченова, академик
РАМН (13);
- Садчикова Н.П. - профессор кафедры фармацевтической химии с курсом
токсикологической химии фармацевтического факультета, доктор фармацевтических
наук (20, 23, 24).
«О

4. Государственный научный центр «Институт биофизики», отдел радиофармацевтических
препаратов:
- Кодина Г.Е. - заведующая лабораторией технологии и методов контроля радиофармацевтических
препаратов, кандидат химических наук (38).
Специалисты других организаций:
- Краснова М.А. - ведущий научный сотрудник отделения изучения новых
противоопухолевых лекарств НИИКО РОНЦ им. Н.Н. Блохина, кандидат фармацевтических
наук (35-37);
- Львова М.Ш. - заведующая сектором ФГУП НИИ витаминов, кандидат химических
наук (12.1-12.4);
- Шейченко В.И. - ведущий научный сотрудник ГУ «ВНИИ лекарственных и
ароматических растений», кандидат физико-математических наук (12.5);
- Березовская И.В. - заведующая отделом лекарственной безопасности ОАО
«ВНЦБАВ», доктор медицинских наук, профессор (25);
- Долгова Г.В. - заведующая отделом доклинических исследований и готовых
лекарственных препаратов ГНЦА, кандидат биологических наук (25-27);
- Ситников А.Г. - генеральный директор ООО «ЛАЛ-Центр» (27);
- Титова Л.В. - руководитель лаборатории стандартов ИСКЛС ФГУ
«НЦЭСМП» Росздравнадзора (ФС);
- Чибиляев Т.Х. - заместитель генерального директора, директор по развитию
ОАО «Верофарм», кандидат фармацевтических наук (ФС);
- Зайцев С.А. - ведущий научный сотрудник отдела медицинской химии
ГНЦА, кандидат химических наук (ФС);
- Локшин Б.В. - заведующий лабораторией молекулярной спектроскопии
ИНЭОС РАН, доктор химических наук, профессор (ФС).
шг

IV. ВВЕДЕНИЕ
Государственная фармакопея (ГФ) является сборником основных стандартов,
применяемых в фармакопейном анализе и производстве лекарственных средств.
Государственная фармакопея имеет законодательный характер. Основу Государственной
фармакопеи составляют общие фармакопейные статьи (ОФС) и
фармакопейные статьи (ФС). ОФС описывает принятые в фармакопейном анализе
общие положения, методы анализа или включает в себя перечень нормируемых
показателей и методов испытаний определенной лекарственной формы.
ФС определяет уровень требований к конкретным лекарственным средствам.
Особенностью современного этапа стандартизации лекарственных средств
является необходимость гармонизации требований к качеству лекарственных
средств и методам их испытаний, предъявляемых фармакопеей России и ведущими
зарубежными фармакопеями.
XII издание Государственной фармакопеи Российской Федерации будет включать
пять частей.
В первой части описаны общие положения, методы анализа, требования,
предъявляемые к фармацевтическим субстанциям, и фармакопейные статьи на
субстанции.
Последующие части будут посвящены:
- продолжению описания физических, физико-химических и химических методов
анализа. В эту часть войдут статьи «Статистическая обработка результатов
химического эксперимента и биологических испытаний», «Валидация
аналитических методик», а также фармако-технологические и другие испытания;
- описанию общих требований к лекарственным формам, перечень которых по
сравнению с ГФ XI будет расширен;
- лекарственному растительному сырью и препаратам на его основе: методам
анализа и предъявляемым требованиям.
Впервые в Государственную фармакопею предполагается включить стандарты
качества на гомеопатические лекарственные препараты, которым будет
посвящена одна из частей.
1 часть ГФ XII содержит 45 ОФС и в отличие от ГФ XI издания - 77 фармакопейных
статей (ФС) на фармацевтические субстанции, наиболее часто используемые
в России, в том числе входящие в Перечень жизненно необходимых
и важнейших лекарственных средств.
По сравнению с ГФ XI в первую часть включены новые ОФС: «Оборудование
», «Осмолярность», «Ионометрия», «Остаточные органические растворители
», «Бактериальные эндотоксины», «Определение эффективности
антимикробных консервантов лекарственных средств», «Радиофармацевтические
препараты», «Фармацевтические субстанции», «Сроки годности лекарственных
средств».
Остальные ОФС переработаны и дополнены с учетом современных требований
и достижений в области фармацевтического анализа.
В «Правилах пользования фармакопейными статьями» в отличие от ГФ XI

приведены рекомендации по описанию веществ, предусматривающие указание
структуры (крупнокристаллический, кристаллический, мелкокристаллический
или аморфный) и цвета. Определение степени кристалличности порошков соотнесено
с определением кристалличности ситовым анализом и размером отверстий
применяемых сит. Приведены условия определения цвета порошка,
унифицированные с зарубежными фармакопеями термины для используемых в
фармакопейном анализе температурных интервалов и расшифровка рекомендуемых
температурных условий хранения препаратов, точность измерений и вычисление
результатов испытания, даны рекомендации по фильтрованию,
использованию стандартных образцов, применяемых в фармакопейном анализе.
Вместо единиц измерений и сокращений, применяемых в Государственной
фармакопее XI издания, в настоящем издании приведены единицы международной
системы СИ, используемые в фармакопее, и их соответствие другим единицам.
В ОФС «Оборудование», составленную по аналогии с зарубежными фармакопеями,
включены рекомендации по применению фильтров различной пористости,
диаметр их пор и характеристика сит, применяемых в производстве и
контроле лекарственных средств, что необходимо для гармонизации требований
по определению измельченности порошков.
В отличие от ГФ XI температура плавления в капиллярном методе означает не
интервал между началом и концом плавления, а температуру конца плавления,
что согласуется с определением по Европейской фармакопее.
ОФС ГФ XI «Определение температурных пределов перегонки» дополнена
определением точки кипения.
Для определения плотности предусмотрен дополнительный метод, основанный
на измерении частоты колебаний трубки, заполненной испытуемым образцом.
ОФС «Определение спирта этилового в жидких фармацевтических препаратах
» содержит кроме метода дистилляции метод газовой хроматографии.
ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях», «Спектрометрия
в инфракрасной области», «Атомно-эмиссионная и атомно-абсорб-
ционная спектрометрия», «Спектроскопия ядерного магнитного резонанса» и
«Флуориметрия» разработаны с учетом современных возможностей спектроскопических
методов, а также опыта использования методов, описанных в ГФ
XI. По аналогии с зарубежными фармакопеями ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой
и видимой областях» содержит описание многокомпонентного
спектрофотометрического анализа и производной спектрофотометрии.
В ОФС «Ионометрия» описано определение концентрации ионов в растворе
с помощью ионоселективных электродов, при этом потенциометрическое определение
рН является частным случаем определения концентрации ионов.
Общая фармакопейная статья «Растворимость» дополнена описанием методик
определения растворимости веществ с неизвестной и известной растворимостью.
Для определения степени окраски, прозрачности и степени мутности жидкостей
предусмотрена возможность использования инструментальных методов.
Эталоны цветности унифицированы с эталонами Европейской фармакопеи.
ЕЕ*

В соответствии с дополнительными данными по токсичности в ОФС «Остаточные
органические растворители» откорректированы таблицы классов органических
растворителей.
В испытаниях на допустимые пределы примесей тяжелых металлов и железа
предусмотрено, наряду с описанными в ГФ XI реактивами, использование других
реактивов: тиоацетамидного - при определении тяжелых металлов и тио-
гликолевой кислоты и аммония роданида - при определении железа.
Включенные в ГФ XII статьи, описывающие биологические методы контроля
качества лекарственных средств, соответствуют современному подходу к биологическим
испытаниям.
Вместо статьи «Испытание на токсичность» в ГФ XII введена статья «Аномальная
токсичность», поскольку данный показатель отражает не собственно
токсичность, а токсичность, которая превышает уровень, установленный на стадии
доклинических испытаний.
В статье «Пирогенность» указаны лекарственные препараты, для которых
контроль по данному показателю является обязательным. Разработан новый уровень
требований к проведению испытания и к величине максимального повышения
температуры тела у животных.
В статье «Бактериальные эндотоксины» впервые введено правило расчета их
предельного содержания, пороговая пирогенная доза и формула для расчета предельного
содержания эндотоксинов в препаратах для парентерального введения,
вводимых интратекально, и для радиофармацевтических препаратов.
Впервые в государственную фармакопею введена статья «Испытание на ги-
стамин» с использованием изолированного органа. В ней подробно описана подготовка
и проведение опыта, а также интерпретация его результатов.
Из статьи «Биологические методы оценки активности лекарственного растительного
сырья и лекарственных препаратов, содержащих сердечные гликозиды»
исключено испытание на голубях, которое проводят для гликозидов наперстянки
пурпуровой, получаемых в настоящее время не из лекарственного растительного
сырья, а синтетическим путем.
Впервые введены дифференцированные нормы микробиологической чистоты
на готовые лекарственные формы (в том числе лекарственное растительное
сырье и препараты из лекарственного растительного сырья), на
субстанции и вспомогательные вещества. Дополнен список используемых
питательных сред отечественного и зарубежного производства для определения
стерильности и микробиологической чистоты. Введены критерии
оценки качества микробиологических сред: ростовые и селективные свойства.
В ОФС «Реактивы. Индикаторы» и «Титрованные растворы» приведен значительно
расширенный перечень применяемых в фармакопейном анализе реактивов
и титрованных растворов.
Вместо статей ГФ XI «Радиоактивность» и «Определение примесей химических
элементов в радиофармацевтических препаратах» в ГФ XII включена статья
«Радиофармацевтические препараты», описывающая определение радиоактивности
и показатели качества радиофармацевтических препаратов и

предусматривающая использование широкого спектра современной аппаратуры
и приемов измерений.
В ОФС «Фармацевтические субстанции» приведены основные требования,
распространяющиеся прежде всего на индивидуальные органические вещества,
а также на вспомогательные вещества, используемые для приготовления готовых
лекарственных форм.
При подготовке ФС на фармацевтические субстанции учитывались не только
международные требования, но и опыт, накопленный в процессе регистрации
субстанций, используемых отечественными производителями.
Химические названия лекарственных веществ даны в соответствии с требованиями
Международного союза теоретической и прикладной химии (ШРАС).
Изложение фармакопейных статей гармонизировано с ведущими зарубежными
фармакопеями. Основным методом идентификации является метод инфракрасной
спектрометрии.
При количественном определении предпочтение отдается классическим ти-
триметрическим методам анализа. Наряду с этим широко используются и современные
физико-химические методы - такие, как спектроскопия в
ультрафиолетовой области, газовая и высокоэффективная жидкостная хроматография,
предполагающие использование стандартных образцов. В таких случаях
указанные методы, а также метод тонкослойной хроматографии,
используются и для идентификации субстанций наряду с классическими химическими
методами.
Содержание активного вещества приведено в пересчете на сухое (если определяется
потеря в массе при высушивании), на безводное (если определяется
вода) или на безводное, не содержащее остаточных органических растворителей
вещество.
Для ряда субстанций в Приложении приведены рисунки ИК-спектров.
ОФС «Сроки годности лекарственных средств» подготовлена на основе ОСТ
42-2-72 «Средства лекарственные. Порядок установления сроков годности».
В ней сохранены основные положения работ по установлению сроков годности
лекарственных средств при хранении в обычных условиях, но в отличие от ОСТ
согласно сложившейся мировой практике ОФС допускает использование субстанции
в течение всего срока годности.
В первой части Государственной фармакопеи содержатся также табличные
данные, при этом таблица наименования, символов и относительных масс элементов
значительно расширена.
Общие статьи ГФ XI «Метод фазовой растворимости» и «Полярография» исключены
как не нашедшие широкого применения.

ОБЩИЕ ФАРМАКОПЕЙНЫЕ СТАТЬИ
1. ПРАВИЛА ПОЛЬЗОВАНИЯ ФАРМАКОПЕЙНЫМИ СТАТЬЯМИ
(ОФС 42-0031-07)
Описание. Указывают характеристики физического состояния и цвет лекарственного
средства; если необходимо, приводят информацию о запахе и гигроскопичности.
Твердые субстанции могут быть крупнокристаллическими, кристаллическими,
мелкокристаллическими или аморфными.
Крупнокристаллический порошок. Не более 40 % частиц порошка должно
быть размером менее 0,4 мм.
Кристаллический порошок. Не менее 95 % частиц порошка должно быть
размером менее 0,4 мм и не более 40 % - размером менее 0,2 мм.
Мелкокристаллический порошок. Не менее 95 % частиц порошка должно
быть размером менее 0,2 мм.
Вещество называют аморфным, если при вращении столика микроскопа не
наблюдается отражения света.
Характеристики кристалличности и гигроскопичности в описании приводятся
для информации и испытанию не подлежат. При необходимости нормирования
величины частиц в частной фармакопейной статье приводят специальный раздел.
Цвет следует характеризовать названиями: белый, синий, зеленый, желтый,
оранжевый, красный и т.п. При оттеночных цветах на первом месте указывают
тот цвет, который содержится в меньшей доле, а затем через дефис - преобладающий
цвет (например, красно-коричневый).
Слабоокрашенные образцы имеют оттенок цвета, название которого характеризуют
суффиксом «-оват» (например, «желтоватый») или указывают «светло-»
(например, «светло-желтый»).
Цвет твердых веществ следует определять на матово-белом фоне (белая плотная
или фильтровальная бумага) при рассеянном дневном свете в условиях минимального
проявления тени. Небольшое количество вещества помещают на
белую бумагу и без нажима равномерно распределяют по поверхности бумаги
(осторожно разравнивают шпателем или другим приспособлением) так, чтобы
поверхность оставалась плоской.
Запах. Запах следует характеризовать терминами: «без запаха», «с характерным
запахом», «со слабым характерным запахом».
Испытание проводят сразу после вскрытия упаковки. 0,5-2,0 г препарата равномерно
распределяют на часовом стекле диаметром 6-8 см; через 15 мин определяют
запах на расстоянии 4-6 см или делают вывод о его отсутствии. В случае
легко летучих жидкостей наносят 0,5 мл на фильтровальную бумагу и запах
определяют сразу же после нанесения, если нет других указаний в частной фармакопейной
статье.
Масса. «Взвешивание по разности» (например, до и после высушивания/прокаливания
при определении потери в массе при высушивании или при определении
золы) проводят при одинаковых условиях (температура, давление, влажность),
используя одни и те же средства измерения и лабораторную посуду. Интервал
2. Зак. 2768 ¦В

времени между двумя взвешиваниями определяется свойствами и количеством высушиваемого/
прокаливаемого остатка.
После прокаливания/высушивания тигель или бюкс следует охлаждать в эксикаторе
до температуры окружающей среды. Промежутки времени с момента
извлечения тигля или стаканчика для взвешивания из эксикатора до момента
взвешивания должны быть одинаковыми.
Массу следует считать постоянной, если разность результатов двух последующих
взвешиваний не превышает 0,0005 г.
Термин «невесомый» означает, что масса не превышает 0,0005 г.
Объем. Для обеспечения требуемой точности измерений стеклянная мерная
посуда должна соответствовать требованиям класса А Международного стандарта
(ISO). Допускается использование стеклянной мерной посуды по ГОСТам.
Понятие «капля» означает объем от 0,02 до 0,05 мл в зависимости от растворителя;
для водных растворов объем капли равен приблизительно 0,05 мл
(в 1 мл содержится примерно 20 капель).
Температура. Помимо конкретного указания температуры используют также
следующие термины:
Глубокое охлаждение Ниже -15 °С
В холодильнике От +2 до +8 °С
В холодном или прохладном месте От +8 до +15 °С
При комнатной температуре От +15 до +25 °С
Теплый От +40 до +50 °С
Горячий От +80 до +90 °С
Температура водяной бани От +98 до +100 °С
Температура ледяной бани 0 °С
Под «водяной баней» понимают кипящую водяную баню, если в частной фармакопейной
статье не указана температура нагревания.
Испытания следует проводить при комнатной температуре, если в частной фармакопейной
статье нет других указаний.
Если при проведении испытания, когда имеет значение температура, она не указана,
то подразумевают температуру 20 °С.
Если в тесте «Потеря в массе при высушивании» температурный интервал не указан,
то подразумевается, что он равен ± 2 °С от указанного значения.
Ниже приводится расшифровка рекомендуемых температурных условий хранения
препаратов:
Рекомендуемые условия
Хранить при температуре не выше 30 °С
Хранить при температуре не выше 25 °С
Хранить при температуре не выше 15 °С
Хранить при температуре не выше 8 °С
Хранить при температуре не ниже 8 °С
Расшифровка рекомендуемых условий
От 2 до 30 °С
От 2 до 25 °С
От 2 до 15 °С
От 2 до 8 °С
От 8 до 25 °С
Вакуум. Термин «вакуум» означает, что давление не превышает 20 мм рт. ст.
(2,66 кПа), если нет других указаний в частной фармакопейной статье.

Для высушивания в вакууме используют вакуумный сушильный шкаф, вакуумный
пистолет или другие подобные приборы.
Точность измерения. При описании количественного определения или испытания
с численно заданными пределами количества вещества, необходимое для проведения
испытания количество указывают приблизительно; в действительности оно может отклоняться
в пределах ± 10 % от указанного. Необходимо взять точную навеску анализируемого
вещества (или отмерить его каким-либо другим способом) и все вычисления
производить для этого точного количества. Если пределы испытания заданы не численно,
а определяются путем сравнения со стандартом при тех же условиях, для испытания
берут строго указанное количество вещества. Реактивы всегда берут в строго
указанных количествах.
Если значения массы навесок или объемов не используют для дальнейших расчетов,
то точность их взятия (отмеривания, отвешивания) должна согласовываться с указанной
в частной фармакопейной статье точностью.
Точность измерений следует обозначать числом десятичных знаков после запятой
данного числового значения. Точность взвешивания должна быть ± 5 единиц после последней
указанной цифры; например, навеску 0,25 г следует понимать как лежащую в
интервале от 0,245 до 0,255 г. Объемы отмеряют следующим образом. Если после запятой
стоит 0 или число, заканчивающееся 0 (например, 10,0 мл или 0,50 мл), требуемый
объем отмеряют с помощью пипетки, мерной колбы или бюретки. В остальных
случаях можно использовать градуированный мерный цилиндр или градуированную
пипетку. Микролитры отмеряют с помощью микропипетки или микрошприца.
Точная навеска. «Точная навеска» означает взвешивание на аналитических весах с
погрешностью ± 0,0002 г. Если не указано «точная навеска» и точность взвешивания не
задана числом десятичных знаков, то навеску следует брать с погрешностью ± 0,01 г.
При определении массы в граммах с точностью более четырех десятичных знаков
следует пользоваться весами типа ВЛР-20 г или другими весами с аналогичными метрологическими
или техническими характеристиками.
Время. Понятие «сразу» означает отрезок времени не более 30 с.
Понятие «свежеприготовленный раствор» означает раствор, приготовленный не
более чем за 8 ч до его применения, если в частной фармакопейной статье нет других
указаний.
Растворители. Если для растворов не указан растворитель, то подразумевают водные
растворы.
Под названием «вода», если нет особых указаний, следует понимать воду, соответствующую
требованиям фармакопейной статьи «Вода очищенная». Термин «вода
дистиллированная» распространяется на «воду очищенную», полученную путем дистилляции.
Под названием «спирт», если нет особых указаний, следует понимать этиловый
спирт, «этанол» - абсолютированный спирт; под названием «эфир» - диэтиловый
эфир.
Если для проведения испытания требуется использовать растворитель с растворенным
в нем индикатором и контрольный опыт не предусмотрен, то растворитель
предварительно нейтрализуют по этому индикатору.
Если указано, что при приготовлении смеси растворителей их берут в соотношении
«О

(а:в), то имеется в виду соотношение объемов. Например, соотношение гексан - бензол
(1:3) означает, что смешивают 1 объем гексана с 3 объемами бензола.
Реактивы. Для испытаний применяют реактивы квалификации «чистый для анализа
». В этом случае квалификация реактива не указывается. При применении реактивов
другой квалификации в частной фармакопейной статье следует приводить
соответствующее указание.
Индикаторы. При титриметрических определениях раствор индикатора добавляют
в количестве 0,2 мл или 3 капель, если нет других указаний в частной фармакопейной
статье.
Растворы. Под принятым способом обозначения концентрации растворов твердых
веществ в различных растворителях 1:10,1:2 и т.д. следует подразумевать содержание
весовой части вещества в указанном объеме раствора, т.е. при приготовлении раствора
1:10 следует брать 1 г вещества и растворителя до получения 10 мл раствора; при приготовлении
раствора 1:2 следует брать 1 г вещества и растворителя до получения 2 мл
раствора и т.д.
Под обозначением «ч» подразумевают массовые части.
Обозначение «ррт» (частей на миллион) подразумевает массовое соотношение.
Процентная концентрация раствора может иметь одно из трех значений:
- массовый процент - % (м/м) - число граммов вещества в 100 граммах раствора;
- массо-объемный процент - % (м/о) - число граммов вещества в 100 мл раствора;
- объемный процент - % (о/о) - число миллилитров жидкого вещества в 100 мл
раствора.
Если «%» используется без обозначения (м/м, м/о или о/о), то подразумевается массовый
процент для смесей твердых веществ, массо-объемный процент для растворов
или суспензий твердых веществ в жидкостях, объемный процент для растворов жидкостей
в жидкостях и массо-объемный процент для растворов газов в жидкостях. Например,
1 % раствор приготавливают растворением 1 г твердого вещества или 1 мл
жидкости в 100 мл раствора.
Молекулярная масса. Молекулярные массы описанных в фармакопее соединений
рассчитаны по таблице относительных атомных масс 1997 г., принятой Международным
союзом по теоретической и прикладной химии (ШРАС) и основанной на шкале углерода-
12.
Если молекулярная масса вещества меньше 400, приводят два десятичных знака,
если больше 400 - один десятичный знак.
Пределы количественного содержания. Указываемые пределы основываются на
результатах, полученных в рамках обычной аналитической практики; в них уже учтены
обычные аналитические погрешности, допустимый разброс при производстве и приготовлении,
а также ухудшение качества в процессе хранения в пределах, которые считаются
приемлемыми. При определении соответствия препарата требованиям
фармакопейной статьи к указанным пределам не должны добавляться никакие дополнительные
допуски.
Если в разделе «Количественное определение» для индивидуальных веществ не указан
верхний предел содержания, следует считать, что последний составляет не более
100,5 % определяемого вещества.
В тех случаях, когда содержание вещества в препарате выражается в пересчете на
ЕМ

сухое или безводное вещество, следует понимать, что потеря в массе при высушивании
или содержание воды определены тем методом, который описан в соответствующей
частной фармакопейной статье.
При определении действующих веществ в лекарственном растительном сырье расчет
производят на абсолютно сухое сырье.
Контрольный опыт. Под контрольным опытом подразумевают определение, проводимое
с теми же количествами реактивов и в тех же условиях, но без испытуемого
препарата.
Методы испытаний. Как правило, в Общей фармакопейной статье (ОФС) на методы
контроля описано несколько методов анализа. Если в частной фармакопейной
статье не указано, какой из методов используется, то применяют первый метод, описанный
в ОФС.
Защищенное от света место. Если указано, что испытание проводят «в защищенном
от света месте», то это означает, что следует принять меры для избежания попадания
прямого солнечного света, любого другого яркого света, а также ультрафиолетовых
лучей, например, путем использования посуды из специального стекла, работы в затемненной
комнате и т.д.
Сухое место. Термин «сухое место» подразумевает место с относительной влажностью
не более 40 % при комнатной температуре или эквивалентном давлении паров
при другой температуре.
Фильтрование. Если для определения содержания примеси используют фильтрат,
то перед фильтрованием фильтр промывают соответствующим растворителем до тех
пор, пока не будет установлено, что определяемая примесь не обнаруживается. При
промывании подкисленной водой следует для подкисления применять ту кислоту, которая
применяется для определения. Если часть фильтрата применяют для дальнейших
определений, то для фильтрования применяют сухой фильтр и первую порцию
фильтрата отбрасывают.
Если не указана марка фильтра, то подразумевают любой бумажный фильтр.
Вычисление результатов испытания. При всех количественных определениях результат
вычисляют с точностью на два десятичных знака большей, чем число десятичных
знаков, указанное в частной фармакопейной статье, если это допустимо с точки
зрения точности метода. Затем цифры округляют до указанного в пределе количества
значащих цифр (если нет других указаний). При этом последнюю цифру увеличивают
на единицу, если цифра, отбрасываемая при округлении, больше или равна пяти. Если
цифра, отбрасываемая при округлении, меньше пяти, последнюю цифру оставляют неизменной.
Стандартные образцы. Современные методы анализа предусматривают использование
стандартных образцов. В качестве стандартных образцов в нормативном документе
должны быть предусмотрены Фармакопейные стандартные образцы, введенные
в действие уполномоченным фармакопейным органом (ЕР CRS, ВР CRS, USP RS, государственные
стандартные образцы ГСО и др.).
В ряде случаев для проведения текущих анализов могут использоваться стандартные
образцы серийных субстанций при условии, что они удовлетворяют требованиям нормативной
документации и откалиброваны по Фармакопейным стандартным образцам.
Ш1

2. ЕДИНИЦЫ МЕЖДУНАРОДНОЙ СИСТЕМЫ (СИ),
ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ФАРМАКОПЕЕ, И ИХ
СООТВЕТСТВИЕ ДРУГИМ ЕДИНИЦАМ (ОФС 42-0032-07)
МЕЖДУНАРОДНАЯ СИСТЕМА ЕДИНИЦ (СИ)
Международная система единиц в настоящее время включает в себя два
класса единиц физических величин: основные единицы и производные единицы*.
Класс основных единиц состоит из семи независимых единиц, определения
которых приведены в табл. 2.1.
Производными единицами системы называются единицы физических величин,
которые могут быть получены через основные единицы посредством алгебраических
отношений. Единицы таких величин, используемых фармакопеей,
приведены в табл. 2.2.
Таблица 2.1
Основные единицы СИ
Величина
Наименование
Длина
Масса
Время
Сила
электрического
тока
Абсолютная
температура
Количество
Сила света
Символ
/
m
t
I
Т
п
'v
Единица
Наименование
метр
килограмм
секунда
ампер
кельвин
моль
кандела
Символ
м
кг
с
А
К
М
кд
Определение
Один метр представляет собой длину пути, который
проходит свет в вакууме за 1/299792458
долю секунды
Один килограмм равен массе международного
эталона - килограмм
Одна секунда представляет собой суммарную
продолжительность 9 192 631 770 периодов излучения,
соответствующих переходу между
двумя сверхтонкими уровнями основного состояния
атома цезия - 133
Один ампер представляет собой такой постоянный
ток, который, проходя в двух строго параллельных
проводниках бесконечной длины
и пренебрежимо малого кругового сечения,
расположенных на расстоянии 1 метра в вакууме,
вызывает между этими проводниками
силу взаимодействия, равную 2x10-7 ньютона
на один метр длины
Один кельвин представляет собой 1/273.16
часть от абсолютной температуры тройной
точки воды
Один моль представляет собой количество вещества,
содержащего такое же количество простейших
частиц, которое содержится в 0,012
килограммах углерода-12"
Кандела представляет собой интенсивность
свечения в данном направлении от источника,
излучающего монохроматическое излучение с
частотой 540* 10п герц и такого источника, интенсивность
которого в этом направлении составляет
1/683 ватта на один стереорадиан
* Используемые определения единиц Международной системы (СИ) приняты Международным комитетом мер и весов.
20-и Конференцией (1995 г.) Международного комитега мер и весов существующий ранее отдельный класс вспомогательных
единиц, содержащий две единицы: угол на плоскости и пространственный угол, - включен в класс производных единиц.
Если использованы моли, то следует указывать, к чему они относятся, например, атомы, молекулы, ионы, электроны, иные
частицы или определенные группы таких объектов.
УВШ

В табл. 2.3 приведены единицы, не входящие в систему СИ, но используемые
наряду с Международной системой единиц.
Множительные приставки для образования десятичных дольных и кратных
единиц приведены в табл. 2.4.
Таблица 2.2
Единицы СИ и их соответствие другим единицам
Величина
Наименование
Волновое
число
Длина волны
Площадь
Объем
Частота
Плотность
Скорость
Сила
Давление
Динамическая
вязкость
Символ
V
X
A,S
V
V
Р
V
F
Р
п
Единица
Наименование
единица на
один метр
микрометр
нанометр
квадратный
метр
кубический
метр
герц
килограмм на
кубический
метр
метр в секунду
ньютон
паскаль
паскаль-секунда
Символ
1/м
мкм
нм
м2
м3
Гц
кг/м3
м/с
н
Па
Пахе
Выражение
в основных
единицах
СИ
м-1
10"6м
10-9м
м2
м3
С"1
КГХМ"3
МХС"1
МХКГХС"2
М-'ХКГХС"2
М-'ХКГХС-1
Выражение
в
иных
единицах
СИ
Нхм"2
Нхсхм"2
Преобразование иных
единиц в единицы СИ
1 мл = 1 см3=
=10"6м3
1 г/мл = 1г/см3=
=103 кгхм"3
1 дин= 1гхсмхс2=
=ю-5н
1 кр = 9,80665 Н
1 дин/см2 =10'Па =
=10"' Нхм"2
1 атм=101 325 Па=
=101,325 кПа
1бар=105Па = 0,1Мпа
1 мм рт.ст. =
=133,322387 Па
1Торр=133,322368Па
1 psi = 6,894757 кПа
1 П=10'Пахс=
= Ю-'Нхсхм"2
1 сП= 1мПахс

Продолжение таблицы 2.2
Кинематическая
вязкость
Энергия
Поток электромагнитного
излучения
Поглощенная
доза ионизирующего
излучения
Электрический
потенциал, электродвижущая
сила
Электрическое
сопротивление
Количество электричества
Радиоактивность
вещества
Молярная концентрация
Массовая концентрация
V
W
Р
D
и
R
Q
А
с
Р
квадратный
метр на секунду
джоуль
ватт
грэй
вольт
ом
кулон
беккерель
моль на кубический
метр
килограмм на
кубический
метр
М2/с
Дж
Вт
Гр
В
Ом
Кл
Бк
моль/м3
кг/м3
м2хс'
М2ХКГХС"2
М2ХКГХС"3
М2ХС"2
м2хкгхс-3хА_1
м2хкгх
хс"3хА"2
Ахс
С"1
моль хм3
КГХМ"3
Пахсхм3хкг]
Нхмхсхкг-1
Нхм
Нхмхс1
Джхс-1
ВтхА-1
BxA-i
1 Ст=1см2хс1=
= 10'4хм2хс-1
1эрг=1см2хгхс2=
=1динхсм =
=10'Дж
1 кал = 4,1868 Дж
1 эрг/с =
=1 динхсмхс"1 =
=10-7BT=10-7HXMXC-'=
^О-'Джхс"1
1 рад = 10"2 Гр
1Ки = 37хЮ9Бк =
=37x10'с-1
1 моль/л = 1М=
=1 моль/дм3=
=103 моль хм3
1 г/л = 1 г/дм3 =
= 1 КГХМ"3
Таблица 2.3
Единицы, используемые наряду с Международной системой единиц
Величина
Время
Угол на плоскости
Объем
Масса
Частота вращения
Единица
минута
час
сутки
градус
литр
тонна
оборот в минуту
мин
ч
сут
о
л
т
об/мин
Значение в единицах СИ
1 мин = 60 с
1 ч = 60 мин = 3600 с
1 сут = 24 ч = 86400 с
1= (я/180) рад
1 л=1дм3 = 10-3м3
1т=103кг
1 об/мин = (1/60) с"1

Таблица 2.4
Множители и приставки для образования десятичных кратных и дольных единиц
Множитель
1018
1015
ю12
10»
106
103
W
10'
Приставка
экза
пета
тера
гига
мега
кило
гекто
дека
Обозначение
э
п
т
г
м
к
г
да
Множитель
ю-1
ю-2
ю-3
ю-6
ю-9
ю12
ю15
ю18
Приставка
деци
санти
МИЛЛИ
микро
нано
пико
фемто
атто
Обозначение
д
с
м
мк
н
п
ф
а
Примечания
1. Радиан представляет собой плоский угол, вырезающий на окружности дугу,
равную по длине радиусу.
2. В фармакопее условия центрифугирования определяются центробежным
ускорением по отношению к ускорению свободного падения (g), которое принимается
равным g = 9,80665 мхе2.
ШИ

МЕТОДЫ АНАЛИЗА
3. ОБОРУДОВАНИЕ (ОФС 42-0033-07)
В настоящей статье описана характеристика оборудования, применяемого в
фармакопейном анализе, не описанная в других общих фармакопейных статьях.
ФИЛЬТРЫ
В зависимости от диаметра пор фильтры используются для следующих целей
(табл. 3.1):
Таблица 3.1
Область применения фильтра в зависимости от диаметра пор
Диаметр пор, мкм
<2,5
4-Ю
10-40
40-100
100-160
160-500
Область применения фильтра
Бактериологическая фильтрация
Ультратонкая фильтрация, отделение микроорганизмов
большого диаметра
Аналитическая фильтрация
Тонкая фильтрация
Фильтрация крупных частиц, использование в качестве
подложки для других фильтрующих материалов
Фильтрация очень крупных частиц
В табл. 3.2 приведен максимальный диаметр пор стеклянных фильтров различной
пористости.
Таблица 3.2
Максимальный диаметр пор стеклянных фильтров различной пористости
Пористость фильтра
ПОР 1,0
ПОР 1,6
ПОР 3,0
ПОРЮ
ПОР 16
ПОР 40
ПОР 100
ПОР 160
ПОР 250
ПОР 500
Приблизительный максимальный диаметр пор в микрометрах
менее 1,0
менее 1,6
1-2,5
1,6-3
1,6-4
4-6
3-10
4-10
10-16
16-40
40-50
40-100
100-120
100-160
150-200
160-250
200-500
250-500
иж

СИТА
Материал сита должен быть индифферентным по отношению к просеиваемому
веществу.
Для аналитических процедур используют сита с квадратными отверстиями.
Для неаналитических процедур могут быть использованы также сита с круглыми
отверстиями, диаметр которых в 1,25 раза превышает размер стороны
квадратного отверстия сита соответствующего номера. Измельченностъ указывают
в частной фармакопейной статье, используя номер сита, соответствующий
номинальному размеру стороны отверстия в микрометрах, который приводится
в скобках после названия вещества.
Максимальный допуск для размера отверстия (+Х) вычисляют по формуле:
v 2xL0J5) ( 0 2 5ч
где со - номинальный размер отверстия.
При этом не должно быть отверстий, размер которых превышает номинальный
размер более, чем на величину X.
Допуск для среднего значения размера отверстия (± У) вычисляют по формуле:
^,0,98 Y= V + 1'6 •
27
При этом средний размер отверстия не должен отклоняться от номинального
размера более чем на величину ± Y.
Промежуточный допуск (+ Z) вычисляют по формуле:
X + Y
z = — •
При этом не более чем 6 % общего числа отверстий могут иметь размеры
между «номинальный + X» и «номинальный + Z».
Диаметр d проволоки, применяемой для плетения металлической проволочной
ткани, вставленной в раму, должен находиться в пределах от dmin до dmax,
что соответствует допускам (± 75 %) от рекомендованного номинального диаметра.
Диаметр проволоки в ситах должен быть одинаковым по всему ситу.
Номер сита (номинальный размер отверстий в мкм), допуски для отверстий,
диаметр проволоки и допустимые пределы от ее номинального диаметра представлены
в табл. 3.3.

Таблица 3.3
Характеристика сит, применяемых в производстве и контроле
лекарственных средств
Номер сита
(номинальный
размер
отверстия,
мкм)
11200
8000
5600
4000
2800
2000
1400
1000
710
500
355
250
180
125
90
63
45
38
Допуск для отверстия, мкм
Максимальный
допуск
для отверстия
+ х
770
600
470
370
290
230
180
140
112
89
72
58
47
38
32
26
22
-
Допуск для
среднего значения
размера
отверстия
±Y
350
250
180
130
90
70
50
30
25
18
13
9,9
7,6
5,8
4,6
3,7
зд
-
Промежуточный
допуск
+ Z
560
430
320
250
190
150
110
90
69
54
43
34
27
22
18
15
13
-
Диаметр проволоки, мкм
Рекомендованный
номинальный
диаметр
d
2500
2000
1600
1400
1120
900
710
560
450
315
224
160
125
90
63
45
32
30
Допустимый
предел
^max
2900
2300
1900
1700
1300
1040
820
640
520
360
260
190
150
104
72
52
37
35
"¦min
2100
1700
1300
1200
950
770
600
480
380
270
190
130
106
77
54
38
27
24

ФИЗИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ
МЕТОДЫ АНАЛИЗА
4. ТЕМПЕРАТУРА ПЛАВЛЕНИЯ (ОФС 42-0034-07)
Температурой плавления называют температуру, при которой происходит переход
вещества из твердого состояния в жидкое.
Для определения температуры плавления в зависимости от физических
свойств вещества применяют капиллярный метод, открытый капиллярный
метод, метод мгновенного плавления и метод каплепадения. Для твердых веществ,
легко превращаемых в порошок, применяют методы 1 и 3. Для аморфных
веществ, не растирающихся в порошок и плавящихся ниже температуры кипения
воды (таких как жиры, воск, парафин, вазелин, смолы) - методы 2 и 4.
Для веществ, неустойчивых при нагревании, определяют температуру разложения.
Температурой разложения называют температуру, при которой происходит
резкое изменение физического состояния вещества (вспенивание) при
нагревании.
Для определения температуры плавления используют описанные ниже приборы.
Для калибровки приборов используют подходящие для этих целей стандартные
вещества, имеющие температуру плавления, близкую к температуре
плавления испытуемого вещества.
1. Капиллярный метод
Температура плавления, определенная капиллярным методом, представляет
собой температуру, при которой последняя твердая частичка уплотненного столбика
вещества в капиллярной трубке переходит в жидкую фазу.
Прибор 1. Составными частями прибора являются:
- стеклянный сосуд, содержащий жидкость (например, воду, вазелиновое
или силиконовое масло), используемый в качестве бани и оснащенный подходящим
устройством для нагрева. Жидкость в бане следует выбирать в зависимости
от требуемой температуры;
- устройство для перемешивания, обеспечивающее однородность температуры
внутри бани;
- подходящий термометр с ценой деления не более 0,5 °С. Разность между
верхним и нижним делениями термометра в области измеряемой температуры
- не более 100 °С;
- запаянные с одного конца капиллярные трубки из нейтрального
прочного стекла диаметром от 0,9 до 1,1 мм и толщиной стенок от 0,10
до 0,15 мм.
Прибор 2. Составными частями прибора являются:
- круглодонная колба из термостойкого стекла вместимостью от 100 до
150 мл; длина горла колбы 20 см; диаметр горла - от 3 до 4 см;
- пробирка из термостойкого стекла, вставленная в колбу и отстоящая от
дна колбы на расстоянии 1 см; диаметр пробирки - от 2 до 2,5 см;
- термометр ртутный стеклянный укороченный с ценой деления 0,5 °С,
Щ1

вставленный во внутреннюю пробирку так, чтобы конец его отстоял от дна
пробирки на 1 см;
- источник нагрева (газовая горелка, электрический обогрев);
- капиллярные трубки.
Колбу наполняют на % объема соответствующей жидкостью: вазелиновое
масло или жидкие силиконы; серная кислота концентрированная для веществ с
температурой плавления от 80 до 260 °С; раствор калия сульфата в серной кислоте
концентрированной 3:7 (по массе) - для веществ с температурой плавления
выше 260 °С; дистиллированная вода - для веществ с температурой плавления
ниже 80 °С.
Примечания
1. Стеклянные трубки, из которых вытягивают капилляры, должны быть вымыты
и высушены.
2. При приготовлении раствора калия сульфата в серной кислоте концентрированной
смесь кипятят в течение 5 мин при энергичном перемешивании. При
недостаточном перемешивании могут образоваться два слоя, в результате чего
может произойти закипание смеси, приводящее к взрыву.
Прибор 3. Прибор для определения температуры плавления с диапазоном измерений
в пределах от 20 до 360 °С с электрическим обогревом (ПТП).
Составными частями прибора являются:
- основание с щитком управления и номограммой;
- стеклянный блок-нагреватель, обогрев которого осуществляется константа-
новой проволокой, навитой бифилярно;
- оптическое приспособление;
- приспособление для установки термометра;
- приспособление для установки капилляров;
- термометр укороченный с ценой деления 0,5 °С;
- источник нагрева (электрический обогрев);
- капиллярные трубки длиной 20 см.
Допускается применение других приборов, использующих капиллярный
метод, если точность и правильность измерений будут не хуже, чем в случае
применения приборов, описанных выше.
Методика. Если нет других указаний в частной фармакопейной статье, тон-
коизмельченное в порошок вещество сушат при температуре от 100 до 105 °С
в течение 2 ч, или в эксикаторе над серной кислотой в течение 24 ч, или в вакууме
над безводным силикагелем в течение 24 ч.
Достаточное количество вещества помещают в капиллярную трубку до
получения уплотненного столбика высотой от 4 до 6 мм. Необходимое уплотнение
вещества при заполнении капиллярной трубки можно получить,
если ее несколько раз бросить запаянным концом вниз в стеклянную трубку
длиной не менее 1 м, поставленную вертикально на твердую поверхность.
Капиллярную трубку с веществом сохраняют до начала определения в
эксикаторе.
Повышают температуру в бане (приборе) приблизительно на 10 °С ниже
предполагаемой температуры плавления и затем продолжают нагревание со
скоростью около 1 °С в мин. Когда температура достигнет значения на
5-10 °С ниже предполагаемой температуры плавления, помещают

капиллярную трубку в прибор так, чтобы ее запаянный конец находился на
уровне центра шарика термометра.
Продолжают нагревание со скоростью:
- для устойчивых при нагревании веществ при определении температуры
плавления ниже 100 °С - со скоростью от 0,5 до 1 °С в 1 мин;
- при определении температуры плавления от 100 до 150 °С - от 1 до
1,5 °С в 1 мин;
- при определении температуры плавления выше 150 °С - от 1,5 до 2 °С
в 1 мин;
- для неустойчивых при нагревании веществ - от 2,5 до 3,5 °С в 1 мин.
Отмечают температуру, при которой последняя твердая частичка перейдет в
жидкую фазу.
Проводят не менее двух определений. За температуру плавления принимают
среднее значение. Расхождение между определениями не должно превышать
1 °С.
Примечание. Во время определения температуры плавления колба и пробирка
должны быть открыты.
2. Открытый капиллярный метод
Используют стеклянную капиллярную трубку, открытую с обоих концов, длиной
около 80 мм, наружным диаметром от 1,4 до 1,5 мм и внутренним диаметром
от 1,0 до 1,2 мм.
Вещество, предварительно обработанное, как указано в частной фармакопейной
статье, помещают и каждую из пяти капиллярных трубок в количестве,
достаточном для формирования в каждой трубке столбика высотой около 10 мм.
Трубки оставляют на определенное время при температуре, указанной в частной
фармакопейной статье.
Прикрепляют одну из капиллярных трубок к термометру с ценой деления
0,2 °С таким образом, чтобы вещество находилось в непосредственной близости
к шарику термометра.
Термометр с прикрепленной капиллярной трубкой помещают в стакан так,
чтобы расстояние между дном стакана и нижней частью шарика термометра составляло
1 см. Стакан наполняют водой до высоты слоя 5 см.
Повышают температуру воды со скоростью 1 °С в мин.
За температуру плавления принимают температуру, при которой вещество
начинает подниматься по капиллярной трубке. В тех случаях, когда столбик
вещества не поднимается в капилляре, за температуру плавления принимают
температуру, при которой столбик вещества в капилляре становится прозрачным.
Повторяют эту операцию с четырьмя другими капиллярными трубками и
рассчитывают результат как среднее из пяти показаний.
шп

должна быть плоской и тщательно отполированной. Блок равномерно нагревают
по всей массе газовой горелкой с микрорегулировкой или электрическим нагревателем
с тонкой регулировкой. Блок имеет достаточно широкую цилиндрическую
полость для размещения термометра, столбик ртути которого должен
находиться в одном и том же положении как при калибровке, так и при определении
температуры плавления испытуемого вещества. Цилиндрическая полость
размещена параллельно отполированной верхней поверхности блока на расстоянии
около 3 мм от нее.
Методика. Блок быстро нагревают до температуры на 10 °С ниже предполагаемой
температуры плавления и затем устанавливают скорость нагрева около
1 °С в мин. Несколько частичек тонкоизмельченного в порошок вещества, высушенного
в вакууме над безводным силикагелем в течение 24 ч, бросают через
равные промежутки времени на поверхность блока в непосредственной близости
от шарика термометра, очищая поверхность после каждого испытания. Записывают
температуру t{, при которой вещество плавится мгновенно при
соприкосновении с металлом. Останавливают нагрев. Во время охлаждения
через равные промежутки времени бросают несколько частичек вещества на поверхность
блока, очищая ее после каждого испытания. Записывают температуру
t2, при которой вещество прекращает мгновенно плавиться при соприкосновении
с металлом.
Температуру плавления (Гпл) рассчитывают по формуле:
h + h т =
2
где: t-y - первое значение температуры;
t2 - второе значение температуры.
4. Метод каплепадения
В данном методе определяют температуру, при которой в условиях, приведенных
ниже, первая капля расплавленного испытуемого вещества падает из
чашечки.
Прибор. Прибор состоит из двух металлических гильз (А и Б), соединенных
посредством резьбы. Гильза (А) прикреплена к ртутному термометру.
В нижней части гильзы (Б) с помощью двух уплотнителей (Г) свободно закреплена
металлическая чашечка (Д). Точное положение чашечки определяется
фиксаторами (Е) длиной 2 мм, которые используются также для центровки
термометра. Отверстие (В) в стенке гильзы (Б) предназначено для выравнивания
давления. Отводящая поверхность чашечки должна быть плоской, а края
выходного отверстия - под прямым углом к поверхности. Нижняя часть ртутного
термометра имеет форму и размер, как показано на рис. 4.1; термометр
градуирован от 0 до ПО °С и расстояние на шкале в 1 мм соответствует разности
температур в 1 °С. Ртутный шарик термометра имеет диаметр
(3,5 ± 0,2) мм и высоту (6,0 ± 0,3) мм.
ЕШ

Прибор устанавливают по оси пробирки длиной около 200 мм и наружным
диаметром около 40 мм.
Рис. 4 . 1 . Прибор для определения температуры каплепадения
Размеры приведены в миллиметрах
Прибор прикрепляют к пробирке с помощью пробки, в которую вставлен термометр
и которая имеет боковую прорезь. Отверстие чашечки должно находиться
на расстоянии около 15 мм от дна пробирки. Все устройство погружают
в стакан вместимостью около 1 л, заполненный водой. Дно пробирки должно
находиться на расстоянии около 25 мм от дна стакана. Уровень воды должен достигать
верхней части гильзы (А). Для равномерного распределения температуры
в стакане используют мешалку.
Методика. Заполняют чашечку до краев нерасплавленным испытуемым веществом,
если нет других указаний в частной фармакопейной статье. Избыток
вещества удаляют с обеих сторон шпателем. После соединения гильз (А) и (Б)
проталкивают чашечку внутрь на ее место в гильзе (Б) до упора. Удаляют шпателем
вещество, выдавленное термометром. Прибор помещают в водяную баню,
как описано выше. Водяную баню нагревают до температуры примерно на 10 °С
ниже предполагаемой температуры плавления и устанавливают скорость нагрева
около 1 °С в минуту. Отмечают температуру падения первой капли. Проводят не
менее трех определений, каждый раз с новым образцом вещества. Разность
между показаниями не должна превышать 3 °С. Рассчитывают среднее из полученных
значений.
— ~" ИЕН

5. ТЕМПЕРАТУРА ЗАТВЕРДЕВАНИЯ (ОФС 42-0035-07)
Температурой затвердевания называют температуру, при которой вещество
переходит из жидкого состояния в твердое при охлаждении.
Прибор 1. Прибор (рис. 5.1) состоит из внутренней толстостенной пробирки
с внутренним диаметром около 25 мм и длиной около 150 мм, помещенной внутри
другой пробирки диаметром около 40 мм и длиной около
160 мм. Внутренняя пробирка закрыта пробкой, снабженной термометром длиной
около 175 мм с ценой деления 0,2 °С, который закреплен таким образом,
чтобы ртутный шарик находился на расстоянии около 15 мм от дна пробирки.
В пробирке имеется отверстие, через которое проходит вал мешалки, изготовленный
из стеклянного стержня или другого подходящего материала, согнутый
на конце под прямым углом в виде петли, внешний диаметр которой около 18 мм.
Внутреннюю пробирку вместе с внешней пробиркой располагают в центре стакана
вместимостью 1 л, содержащего подходящую охлаждающую жидкость,
уровень которой находится на расстоянии около 20 мм от верхнего края стакана.
Охлаждающая баня также должна быть снабжена термометром.
Прибор 2 (прибор Жукова) - дьюаровский сосуд из прозрачного стекла
(рис. 5.2), снабженный пробкой, в которой укреплен укороченный термометр с
диапазоном температур от +30 до +100 °С и ценой деления 0,2 °С, помещенный
в водяную баню.
Методика 1. Во внутреннюю пробирку помещают достаточное количество
(около 10 г) испытуемого вещества, находящегося в жидком состоянии (твердое
вещество предварительно расплавляют при температуре не выше 20 °С ожидаемой
температуры затвердевания), чтобы ртутный шарик находился посередине
слоя испытуемого вещества, и при быстром охлаждении определяют
приблизительную температуру затвердевания. Внутреннюю пробирку помещают
в водяную баню с температурой на 5 °С выше определенной
Рис. 5.1. Прибор для определения температуры затвердевания
Размеры указаны в миллиметрах
ЕШ

Рис. 5.2. Прибор Жукова
приблизительно температуры затвердевания до полного расплавления кристаллов.
Затем заполняют стакан водой или насыщенным раствором натрия хлорида
с температурой на 5 °С ниже ожидаемой температуры затвердевания. Внутреннюю
пробирку вместе с внешней помещают в стакан. При постоянном перемешивании
испытуемого вещества отмечают температуру каждые 30 с. Вначале
происходит постепенное понижение температуры, затем при появлении твердой
фазы она остается некоторое время постоянной или повышается перед тем, как
стать постоянной (в этот момент прекращают перемешивание), а затем снова падает.
Отмечают наиболее высокую температуру, остающуюся короткое время
постоянной при переходе вещества из жидкого состояния в твердое. Эту температуру
и принимают за температуру затвердевания.
Если вещество остается жидким при ожидаемой температуре затвердевания,
его охлаждают на 1-2 °С ниже ожидаемой температуры затвердевания и вызывают
затвердевание введением малых количеств (нескольких кристаллов) испытуемого
вещества или потиранием стенок внутренней пробирки термометром.
Методика 2. Для твердых веществ, имеющих высокую температуру затвердевания
с диапазоном от +30 до +100 °С (парафины и высокоплавкие кристаллические
вещества).
Испытуемое вещество, расплавленное на водяной бане или в термостате при
температуре на 15-20 °С выше ожидаемой температуры затвердевания, тщательно
перемешивают и заливают в подогретый прибор на % его высоты. Температура
испытуемого вещества после залива в прибор должна превышать
ожидаемую температуру затвердевания не менее, чем на 8 °С. В отверстие прибора
вставляют термометр на пробке по оси прибора так, чтобы ртутный шарик
термометра находился приблизительно на половине высоты слоя расплавленного
вещества. Оставляют прибор до достижения температуры на 3-4 °С выше
температуры затвердевания. По достижении этой температуры записывают

температуру через каждую минуту. Сначала температура понижается быстро,
затем понижение замедляется и в течение нескольких минут сохраняется постоянной
или снижается очень медленно, после чего происходит снова быстрое
понижение температуры. За температуру затвердевания вещества принимают то
показание термометра, при котором температура оставалась постоянной или
снижалась наиболее медленно.
Рассчитывают среднее арифметическое трех определений. Расхождение
между определениями не должно превышать 0,2 °С.
6. ТЕМПЕРАТУРНЫЕ ПРЕДЕЛЫ ПЕРЕГОНКИ И
ТОЧКА КИПЕНИЯ (ОФС 42-0036-07)
Под температурными пределами перегонки подразумевают интервал между
начальной и конечной температурой кипения при нормальном давлении
101,3 кПа (760 мм рт. ст.).
Начальной температурой кипения считают температуру, при которой в приемник
перегнались первые 5 капель жидкости. Конечной температурой кипения
считают температуру, при которой в приемник перешло 95% жидкости.
Точка кипения - скорректированная температура, при которой давление пара
жидкости достигает 101,3 кПа.
Определение температурных пределов перегонки
Прибор. Прибор (рис. 6.1) состоит из перегонной колбы (А), прямого холодильника
(В) и аллонжа (С); допускается использовать холодильник с изогнутым
нижним концом. Колбу снабжают термометром, конец ртутного шарика которого
должен находиться на 5 мм ниже от нижнего края отводной
Рис. 6.1 ¦ Прибор для определения температурных пределов перегонки
Размеры указаны в миллиметрах
трубки перегонной колбы. Применяют укороченный термометр с диапазоном
шкалы около 50 °С и ценой деления 0,2 °С.
Во время испытания колбу защищают от охлаждения соответствующим экраном.
ЕШ

Для жидкостей, кипящих при температуре ниже 150 °С, применяют водяное
охлаждение; для жидкостей, кипящих при температуре выше 150 °С, достаточно
воздушного охлаждения.
Методика. В колбу помещают 50 мл исследуемой жидкости и несколько тонких
запаянных с одного конца капилляров или кусочков пористого материала.
Начинают нагревание колбы, отмечают начальную температуру кипения и
продолжают нагревание таким образом, чтобы в минуту перегонялось 2-3 мл
жидкости. Перегоняют требуемый объем жидкости, отмечая конечную температуру
кипения. Отгон собирают в приемник (цилиндр вместимостью 50 мл с
ценой деления 1 мл). Приемник помещают так, чтобы аллонж входил в него на
2,5 см.
Наблюдаемую температуру перегонки (t{) приводят к нормальному давлению
101,3 кПа (760 мм рт. ст.) по формуле:
t2 =r,+Kx(P-P1 ) , (1)
где: t2 - исправленная температура, в градусах Цельсия;
tx - наблюдаемая температура, в градусах Цельсия;
Р - нормальное барометрическое давление, в кПа или мм рт. ст.;
Pj- барометрическое давление во время опыта, наблюдаемое по ртутному
барометру или анероиду, в кПа или мм рт. ст., с учетом поправок,
указанных в поверочном свидетельстве и в инструкции по эксплуатации;
К - поправочный коэффициент. Значения К зависят от температуры кипения
перегоняемой жидкости и приведены в табл. 6.1.
Таблица 6.1
Поправочный коэффициент для приведения к нормальному значению
Наблюдаемая
температура
кипения, °С
до 100
100-140
141-190
191-240
выше 240
Поправочный коэффициент К
при давлении, выраженном
в мм рт. ст.
0,040
0,045
0,050
0,055
0,060
в кПа
0,30
0,34
0,38
0,41
0,45
Примечания
1. Если во время опыта давление измеряют ртутным барометром, то после
внесения поправок, указанных в поверочном свидетельстве и в инструкции по
эксплуатации, оно должно быть приведено к показаниям при температуре 0 °С,
для чего вычитают из показаний барометра:
0,27 кПа (2 мм рт. ст.) при температуре окружающей среды 13-20 °С;
0,4 кПа (3 мм рт. ст.) при температуре окружающей среды 21-28 °С;
0,53 кПа (4 мм рт. ст.) при температуре окружающей среды 29-35 °С.
2. Перегонку эфира следует проводить на предварительно нагретой водяной
бане при температуре от 54 до 58 °С.
Шй

Допустимое расхождение между результатами двух параллельных определений
температуры кипения не должно превышать 1 °С.
Определение точки кипения
Испытание проводят в приборе для определения температурных пределов перегонки,
за исключением того, что термометр вводят в горло колбы так, чтобы
нижний конец ртутного шарика находился на уровне нижнего конца горла колбы.
В колбу помещают 20 мл испытуемой жидкости и несколько кусочков пористого
материала и быстро нагревают до кипения. Отмечают температуру, при
которой жидкость начинает поступать по отводной трубке колбы в холодильник.
Отмеченную температуру кипения приводят к нормальному давлению по формуле
(1).
Микрометод определения температуры кипения обычно используется для
идентификации веществ.
В тонкостенную стеклянную запаянную с одного конца трубочку диаметром
3 мм и длиной около 8 см помещают несколько капель исследуемой жидкости,
чтобы образовался слой от 1 до 1,5 см высоты. В трубочку вставляют открытым
концом вниз запаянный с одного конца капилляр длиной около 10 см и диаметром
около 1 мм. Трубочку прикрепляют с помощью резинового колечка или тонкой
проволоки к укороченному термометру так, чтобы нижний конец трубочки
находился на уровне середины ртутного шарика, и термометр помещают в прибор
для определения температуры плавления. Нагревание ведут таким образом,
чтобы температура поднималась на 2-3 °С в минуту до того момента, когда из капилляра
вместо отдельных воздушных пузырьков начнет выделяться непрерывная
цепочка пузырьков пара, после чего прекращают или уменьшают нагрев.
Момент, когда прекратится выделение пузырьков и жидкость начнет подниматься
в капилляр, принимают за температуру кипения.
Наблюдаемую температуру кипения приводят к показаниям при нормальном
давлении, как указано выше.
7. ПЛОТНОСТЬ (ОФС 42-0037-07)
т
Плотностью называют массу единицы объема вещества: р ="р . Если массу m
измеряют в граммах, а объем V - в кубических сантиметрах, то плотность представляет
собой массу 1 см3 вещества: р г/см3. Плотность вещества р2о является
отношением массы вещества к его объему при температуре 20 °С.
Относительная плотность вещества df0 является отношением массы определенного
объема вещества к массе равного объема воды при температуре 20 °С.
Относительная плотность вещества df является отношением массы определенного
объема вещества при температуре 20 °С к массе равного объема воды
при температуре 4 °С.
Формулы пересчета между относительной плотностью (d) и плотностью (/>),
выраженной в кг/м3, следующие:
/>20 = 998,202*^° и л и < = l.OOieOxKH^o;

p2o = 999,972xdf или df = 1,00003*103/>20;
df = 0,998230xJ^ .
Определение плотности проводят с помощью пикнометра, ареометра или
плотномера.
Метод 1
Применяют для определения плотности жидкостей с точностью до
± 0,001 г/см3 с помощью пикнометра.
Чистый сухой пикнометр взвешивают с точностью до 0,0002 г, заполняют с
помощью маленькой воронки дистиллированной водой немного выше метки,
закрывают пробкой и выдерживают в течение 20 мин в термостате при температуре
(20 ±0,1) °С. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят
до метки, отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку
полоски фильтровальной бумаги. Пикнометр снова закрывают пробкой и выдерживают
в термостате еще 10 мин. Затем пикнометр вынимают из термостата
и вытирают фильтровальной бумагой внутреннюю поверхность горлышка и весь
пикнометр снаружи, проверяют положение мениска воды, который должен находиться
на уровне метки, оставляют под стеклом аналитических весов в течение
10 мин и взвешивают с той же точностью.

Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая последовательно
спиртом и эфиром (сушить пикнометр нагреванием не допускается), удаляют
остатки эфира продуванием воздуха, заполняют пикнометр испытуемой
жидкостью и проводят те же операции, что и с водой.
Плотность />2о (г/см3) вычисляют по формуле:
(тп — 7fi\ р20 = 0,99703*^ ^ + 0,0012,
(WJ., - т)
где: т - масса пустого пикнометра, в граммах;
Wj - масса пикнометра с дистиллированной водой, в граммах;
т.2 - масса пикнометра с испытуемой жидкостью, в граммах;
0,99703 - значение плотности воды при 20 °С, в г/см3 (с учетом плотности
воздуха);
0,0012 - значение плотности воздуха при 20 °С и барометрическом давлении
101,1 кПа (760 мм рт. ст.).
Метод 2
Применяют для определения плотности твердых жиров и воска.
Проводят все операции с дистиллированной водой и высушивают пикнометр,
как описано в методе 1. При помощи пипетки или небольшой воронки с
КЕ1

оттянутым концом вносят в пикнометр расплавленный жир или воск в таком количестве,
чтобы он занимал 1/3-1/2 объема пикнометра. Пикнометр без пробки
ставят на один час в горячую воду, затем охлаждают до температуры 20 °С и
взвешивают. Содержимое пикнометра доводят до метки дистиллированной
водой при температуре 20 °С, вытирают пикнометр и снова взвешивают. В обеих
фазах и на поверхности их раздела не должно быть пузырьков воздуха.
Величину плотности/?2о вычисляют по формуле:
р20 = 0 , 9 9 7 0 3 x - ( W ; ^ - + 0,0012,
где: т - масса пустого пикнометра, в граммах;
mj - масса пикнометра с дистиллированной водой, в граммах;
т2 - масса пикнометра с жиром, в граммах;
тъ - масса пикнометра с жиром и водой, в граммах.
Метод 3
Применяют для определения плотности жидкостей с точностью до
± 0,01 г/см3 с помощью ареометра.
Испытуемую жидкость помещают в цилиндр и при температуре 20 °С осторожно
опускают в нее чистый сухой ареометр, на шкале которого предусмотрена
ожидаемая величина плотности. Ареометр не должен касаться стенок и дна
цилиндра. Через 3-4 мин после погружения ареометра производят отсчет по делению
шкалы ареометра, соответствующему нижнему мениску жидкости (глаз
должен быть на уровне мениска).
Примечания
1. Определение плотности сильнолетучих веществ ареометром не допускается.
2. В случае определения плотности в темноокрашенных жидкостях отсчет
производят по верхнему мениску.
ЕМ

8. ВЯЗКОСТЬ (ОФС 42-0038-07)
Вязкость (внутреннее трение) - свойство текучих тел оказывать сопротивление
перемещению одной их части относительно другой.
Основными кинематическими переменными для жидкостей служат деформация
и ее скорость. Поэтому для изучения реологических характеристик жидких
сред устанавливают связь между приложенными внешними нагрузками и
кинематическими параметрами.
Жидкости, вязкость которых не зависит от напряжения сдвига и при определенной
концентрации и температуре является постоянной величиной в соответствии
с законом Ньютона, называются ньютоновскими. Неньютоновские
жидкости не следуют закону Ньютона, их вязкость зависит от напряжения
сдвига.
Различают динамическую, кинематическую, относительную, удельную, приведенную
и характеристическую вязкости. Для неньютоновских жидкостей,
главным образом, характерна структурная вязкость. Структурная (эффективная
или кажущаяся) вязкость - вязкость при данном напряжении сдвига.
Динамическая вязкость или коэффициент вязкости (п) - это приходящаяся
на единицу поверхности тангенциальная сила, называемая также напряжением
сдвига (г), выраженная в паскалях (Па), которую необходимо приложить для
того, чтобы переместить слой жидкости площадью 1 м2 со скоростью (v) 1 метр
в секунду (мхе1), находящийся на расстоянии (х) 1 метр относительно другого
слоя, параллельно плоскости скольжения.
Величина dvldx представляет собой градиент скорости и определяет скорость
сдвига D, выраженную в обратных секундах (с-1). Таким образом,
n=z/D. (1)
Динамическую вязкость (ц) обычно выражают в пуазах (пз) или сантипуазах
(1 спз = 0,01 пз). Жидкость имеет вязкость 1 пз, если напряжение сдвига
1 дин/см2 создает скорость сдвига 1 с1. В системе СИ динамическая вязкость
выражается в паскаль-секундах (Пахе) или миллипаскаль-секундах (мПахс).
1 сП = 1 мПахс.
Кинематическую вязкость (v), выраженную в метрах квадратных на секунду
(м2хс'), получают делением величины динамической вязкости п на плотность
жидкости р, выраженную в килограммах на метр кубический
(кгхм3), измеренную при той же температуре:
v=n/p. (2)
Кинематическую вязкость обычно выражают в стоксах (ст) или сантистоксах
(1 ест = 0,01 ст), в системе СИ - в метрах квадратных на секунду (м2хс -1) или
миллиметрах квадратных на секунду (мм2хс _1).
1 ст= 10-4м2хс1.
В ряде случаев требуется определить вязкость одной жидкости относительно
другой - относительную вязкость ( потн).

Часто вязкость выражают как удельную вязкость (пуд), которая показывает,
какая часть вязкости раствора обусловлена присутствием в нем растворенного
вещества:
^ = ^ ^ = - - 1 = ^ - 1 , (3)
Щ 7о
где: п - вязкость раствора;
п0 - вязкость растворителя.
Удельная вязкость, отнесенная к единице концентрации раствора, называется
приведенной вязкостью (цпртУ-
ri^^-f , (4)
где: с - концентрация раствора.
Для растворов полимеров вязкость является функцией молекулярных масс,
формы, размеров и гибкости макромолекул. Чтобы определить структурные характеристики
полимеров, приведенную вязкость экстраполируют к нулевой концентрации.
В этом случае вводится понятие характеристической вязкости [п] :
Пуд foblimi^^m-^ • (5)
С->0 И С->0 Q
Характеристическая вязкость выражается в единицах, обратных единицам
концентрации.
Для определения вязкости применяются капиллярные, ротационные вискозиметры
и вискозиметры с падающим шариком.
Капиллярные вискозиметры обычно используются для определения вязкости
при одном значении скорости сдвига, поэтому применяются в основном для исследования
ньютоновских жидкостей. Они просты и удобны в обращении.
Ротационные вискозиметры позволяют определять реологические свойства
жидкостей в широком диапазоне скоростей сдвига, что особенно важно для
неньютоновских жидкостей.
Вискозиметр с падающим шариком (вискозиметр Гепплера) предназначен для
измерения вязкости прозрачных ньютоновских жидкостей.
Допускается использование других вискозиметров при условии, что точность
и правильность измерений будет не хуже, чем в случае использования вискозиметров,
описанных ниже.
Измерение вязкости на капиллярных вискозиметрах
Для измерения кинематической вязкости применяются капиллярные вискозиметры
типа Оствальда и Уббелоде с различными модификациями.
Стеклянные капиллярные вискозиметры предназначены: 1) серии ВПЖ и

ВПЖТ - для определения вязкости прозрачных жидкостей; 2) серии ВПЖМ и
ВПЖТМ - для определения вязкости малых объемов прозрачных жидкостей;
3) серии ВНЖ и ВНЖТ - для определения вязкости непрозрачных жидкостей.
На рис. 8.1 и 8.2 представлен общий вид вискозиметров серии ВПЖ.
2- Л л
Рис. 8.1. Вискозиметр стеклянный капиллярный ВПЖ-1
1, 2,4 - трубки; 3 - измерительный резервуар;
Mj, M2 - отметки измерительного резервуара
Рис. 8.2. Вискозиметр стеклянный капиллярный ВПЖ-2
1,2- трубки; 3 - измерительный резервуар;
М |, М2 - отметки измерительного резервуара
Вискозиметр состоит из капилляра с радиусом R и длиной L, через который
под действием силы тяжести протекает жидкость объема V.

Если Я - средняя высота жидкости, g - ускорение силы тяжести, то кинематическая
вязкость О) в миллиметрах квадратных на секунду (мм2хс-') равна:
р SxLxV ' W
TtxR xgxH c ,-
где: К = - постоянная прибора, обычно выражаемая в миллиметрах
квадратных на секунду квадратную
(ММ2ХС"2).
Если известна плотность испытуемой жидкости р, то, зная v, можно вычислить
динамическую вязкость ц:
q^pxv = pxK*t, (7)
гаг

Таблица 8.1
Характеристики капиллярных вискозиметров серии ВПЖ-1
Номинальное
значение
постоянной
К, мм2/с2
0,003
0,01
0,03
од
0,3
1
3
10
30
100
Диапазон измерения
вязкости, мм2/с
От 0,6 до 3 включ.
От 2 до 10 включ.
От 6 до 30 включ.
От 20 до 100 включ.
От 60 до 300 включ.
От 200 до 1000 включ.
От 600 до 3000 включ.
От 2000 до 10 000 включ.
От 6000 до 30 000 включ.
От 20 000 до 100 000 включ.
Диаметр капилляра, мм
ВПЖ-1
Номинальный
0,34
0,54
0,86
1,16
1,52
2,10
2,75
3,75
5,10
6,85
Предельное
отклонение
±0,02
±0,03
±0,04
±0,05
±0,06
ВПЖТ-1
Номинальный
0,34
0,54
0,86
1,16
1,52
—
—
—
—
—
Предельное
отклонение
+0,007
±0,01
±0,02
±0,03
—
—
—
—
—
Объем измерительного
резервуара V, см3
ВПЖ-1
1,5±0,2
3±0,3
6,2±0,3
ВПЖТ-1
1,5±0,08
3,0±0,15
6,2±0,30
—

Характеристики капиллярных вискозиметров серии ВПЖ-2
Таблица 8.2
Номинальное
значение
постоянной
К, мм2/с2
0,003
0,005
0,01
0,03
0,1
0,3
1
3
10
30
Диапазон измерения
вязкости, мм2/с
От 0,6 до 3 включ.
От 1 до 5 включ.
От 2 до 10 включ.
От 6 до 30 включ.
От 20 до 100 включ.
От 60 до 300 включ.
От 200 до 1000 включ.
От 600 до 3000 включ.
От 2000 до 10 000 включ.
От 6000 до 30 000 включ.
Диаметр капилляра, мм
ВПЖ-2
Номинальный
0,34
0,39
0,56
0,73
0,99
1,31
1,77
2,37
3,35
4,66
Предельное
отклонение
±0,02
±0,03
±0,04
±0,05
ВПЖТ-2
Номинальный
0,34
0,39
0,56
0,73
0,99
1,31
1,77
—
—
—
Предельное
отклонение
±0,007
±0,008
±0,01
±0,02
±0,03
—
—
—
Объем
измерительного
резервуара V, см3
ВПЖ-2
1,5±0,2
3,8±0,3
ВПЖТ-2
1,5±0,08
3,8±0,2
—

р0нр пикнометрическим методом и рассчитывают относительную вязкость
по формуле:
/отн.
tcp.XP
оср. хРо (8)
Для измерения характеристической вязкости готовят не менее пяти различных
концентраций испытуемого раствора. При этом должно выполняться условие
возможности линейной экстраполяции приведенной вязкости к нулевой
концентрации, т.е. концентрации раствора следует выбирать минимальными в
пределах чувствительности и точности метода измерения. Для каждой концентрации
раствора определяют t и рассчитывают приведенную вязкость. Затем
строят зависимость цпрт от концентрации с и графически или линейным методом
наименьших квадратов экстраполируют приведенную вязкость к нулевой
концентрации, т.е. находят характеристическую вязкость.
Измерение вязкости на ротационных вискозиметрах
Ротационные вискозиметры обычно используют для измерения динамической
вязкости. Они представляют собой системы с жесткими соосно расположенными
цилиндрами, конусами или дисками, в которых осуществляется сдвиговое
течение (рис. 8.3).
б
\ci'^ ::
Рис. 8.3. Геометрия ротационных вискозиметров
а: М - момент сопротивления; R - радиус внутреннего цилиндра; 5 - внешний цилиндр; L - высота
испытуемой жидкости; со - угловая скорость вращения внешнего цилиндра;
б: М - момент сопротивления; R - радиус внутреннего конуса; ср - угол внутреннего конуса; L -
высота цилиндрической части внутреннего конуса; 8 - внешний цилиндр; со - угловая скорость вращения
внешнего цилиндра
Принцип действия наиболее часто используемых ротационных вискозиметров
заключается в измерении силы сдвига в жидкой среде, расположенной между
двумя коаксиальными цилиндрами, один из которых вращается двигателем, а
второй приводится во вращение первым. Вязкость (структурная, эффективная
или кажущаяся) характеризуется углом (М), на который поворачивается второй
цилиндр; этот угол пропорционален моменту силы, выраженному в ньютон-метрах
(Нхм).
В случае ламинарного потока, динамическую вязкость п, выраженную в

паскаль-секундах (Пахе), рассчитывают по формуле:
где: h - глубина погружения второго цилиндра в жидкую среду, в метрах;
RA - радиус меньшего из цилиндров, в метрах;
RB - радиус большего из цилиндров, в метрах;
со - угловая скорость, в радианах на секунду;
К- постоянная вискозиметра.
Постоянная вискозиметра К может быть определена при разных скоростях
вращения с использованием градуировочных жидкостей для калибровки вискозиметров.
Выпускаемые приборы сопровождаются таблицами, в которых приведена
постоянная вискозиметра в зависимости от площади поверхности
используемого цилиндра и скорости его вращения.
Вязкость измеряют в соответствии с инструкцией по применению ротационного
вискозиметра. Температуру, при которой измеряют вязкость, указывают в
частной фармакопейной статье. Для неньютоновских жидкостей в частной фармакопейной
статье указывают тип вискозиметра и угловую скорость или скорость
сдвига, при которых проводят измерения.
Измерение вязкости на вискозиметре с падающим шариком
Измерение вязкости на вискозиметрах Гепплера с падающим шариком основано
на определении скорости падения шарика в жидкости.
На рис. 8.4 показан общий вид вискозиметра с падающим шариком. В комплект
вискозиметра входят шарики с диаметром от 10,00 до 15,80 мм, что обеспечивает
измерение динамической вязкости градуировочных жидкостей в
диапазоне от 0,6 до 8х 104 мПахс.
Рис. 8.4. Вискозиметр с падающим шариком
1 - калибровочные отметки; 2 - шарик
Методика. Для измерения вязкости испытуемую жидкость заливают в трубку,
опускают шарик и термостатируют вискозиметр при температуре (20 ±0,1) °С,
если не указано иначе в частной фармакопейной статье, в течение примерно
ЕЖ

30 мин. Далее шарик ставят в исходное положение и включают секундомер,
когда нижняя часть шарика коснется верхней метки, и останавливают, когда
шарик достигнет нижней метки. Время движения шарика измеряют не менее
5-7 раз. При этом разность между наибольшим и наименьшим значениями времени
движения шарика не должна превышать 0,5 % от его среднего значения.
Динамическую вязкость испытуемой жидкости вычисляют по формуле:
П = КХ(Рш.-Рж)Х*ср.> (Ю)
где: ц - динамическая вязкость;
К - постоянная вискозиметра;
Рш и Рж. ~ плотности шарика и жидкости соответственно;
tcp - среднее время движения шарика между крайними метками.
Постоянная вискозиметра К определяется по формуле:
По
К = (Рш - Рож) х tocp
(11)
где: г/о - динамическая вязкость градуировочнои жидкости;
Рш и Рож ~~ плотности шарика и градуировочнои жидкости соответственно;
t - среднее значение времени движения данного шарика в градуировочнои
жидкости.
Число постоянных вискозиметра соответствует числу шариков, входящих в
комплект вискозиметра.
При необходимости постоянные прибора могут быть проверены по вышеуказанной
формуле с помощью градуировочных жидкостей с известными значениями
динамической вязкости. Плотность шариков рш вычисляют по формуле:
6 хт
р-- чъ-- (12)
где: т - масса шарика, определяемая взвешиванием;
d - диаметр шарика.
Перед проведением измерений вискозиметр следует тщательно промыть и высушить.
9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПИРТА ЭТИЛОВОГО
В ЖИДКИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТАХ
(ОФС 42-0039-07)
Спирт этиловый в жидких фармацевтических препаратах в зависимости от
состава и физико-химических свойств присутствующих в препарате компонентов
может быть определен одним из методов: дистилляцией или газовой хроматографией.
Метод количественного определения спирта должен быть указан в
частной фармакопейной статье.
4. Зак. 2768 ши

Метод дистилляции
Данный метод заключается в отгонке спирта этилового от растворенных в нем
веществ.
В круглодонную колбу (1) вместимостью 200-250 мл вносят точно отмеренное
количество препарата. При содержании спирта в препарате до 20 % для
определения берут 75 мл препарата, при содержании от 20 до 50 % - 50 мл, при
содержании от 50 % и выше - 25 мл; перед перегонкой препарат разбавляют
водой до 75 мл.
Колбу присоединяют через каплеотбойник (2) к вертикально расположенному
шариковому холодильнику с отводной трубкой (3), направляющей дистиллят в
приемник - мерную колбу вместимостью 50 мл (4), помещенный в стакан с
водой (5) (рис. 9.1).
Нагревают перегонную колбу с помощью электроплитки с сеткой. Для равномерного
кипения в колбу с раствором препарата помещают капилляры, пемзу
или кусочки прокаленного фарфора. Если раствор препарата при перегонке
сильно пенится, то прибавляют 2-3 мл концентрированных фосфорной или серной
кислот, кальция хлорид, парафин, воск (2-3 г).
Собирают около 48 мл отгона, охлаждают его до температуры 20 °С, доводят
объем раствора водой до метки и перемешивают. Отгон может быть прозрачным
или слегка мутным.
Определяют плотность отгона пикнометром и по алкоголеметрическим таблицам
находят содержание спирта в процентах объемных.
Содержание спирта в препарате в процентах объемных (X) вычисляют по
формуле:
где: 50 - объем отгона, в миллилитрах;
а - содержание спирта в отгоне, в процентах объемных;
Ъ - объем испытуемого препарата, взятый для перегонки, в миллилитрах.
ЕЖ

При содержании в препарате летучих кислот их нейтрализуют раствором щелочи,
а при содержании летучих оснований - фосфорной или серной кислотами.
Рис. 9.1. Прибор для определения содержания спирта этилового
Размеры указаны в миллиметрах
1 - перегонная колба; 2 - каплеотбойник; 3 - холодильник;
4 - приемник; 5 - сосуд с холодной водой
Препараты, содержащие свободный йод, перед дистилляцией обрабатывают
до обесцвечивания цинковой пылью или рассчитанным количеством сухого натрия
тиосульфата. Для связывания летучих сернистых соединений к препарату
прибавляют несколько капель 10 % раствора натрия гидроксида.
Метод газовой хроматографии
Данный метод основан на сорбционном хроматографическом отделении
спирта от растворенных в нем веществ.
Для проведения анализа используют газовый хроматограф с пламенно-ионизационным
детектором и с хроматографической колонкой размером
150x0,4 см, заполненной полимерным сорбентом Рогарак Q с размером частиц
100-120 меш.
Температура КОЛОНКИ - 150 °С; температура испарителя - 170 °С; температура
детектора - 170 °С. Скорость газа-носителя (азот или гелий) - 30 мл/мин.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
точно отмеренное количество испытуемого препарата, достаточное для получения
раствора, содержащего 4-6 % этанола по объему, прибавляют 5,0 мл
пропанола (внутренний стандарт), перемешивают, доводят объем раствора водой
шп

до метки и перемешивают. 10 мл полученного раствора помещают в мерную
колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Раствор стандартного образца. В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят
5,0 мл спирта этилового 95 % (стандартный образец) и 5,0 мл
пропанола (внутренний стандарт), доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью
100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
В испаритель газового хроматографа, выведенного на рабочий режим, вводят
последовательно по 1-2 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца
и регистрируют хроматограммы.
Содержание спирта этилового в препарате в процентах объемных (X)
рассчитывают по формуле:
SxS'cmx5,0xP
Л = ; >
S xS'xV
cm np
где: S и S' - площади пика спирта этилового на хроматограммах анализируемого
раствора и раствора стандартного образца соответственно;
Scm vi.S/
cm- площади пика пропанола на хроматограммах испытуемого
раствора и раствора стандартного образца соответственно;
Vnp - объем препарата, взятый для анализа, в миллилитрах;
Р - содержание спирта этилового в стандартном образце, в процентах.
Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования
теста «Проверка пригодности хроматографической системы».
Проверка пригодности хроматографической системы. Система считается
пригодной, если:
- разрешение (R) пиков спирта этилового и пропанола не менее 2,0;
- коэффициент асимметрии (Т) пика спирта этилового не превышает 1,5;
- относительное стандартное отклонение (RSD) не превышает 2,0 %.
10. РЕФРАКТОМЕТРИЯ (ОФС 42-0040-07)
Показателем преломления (индексом рефракции) называют отношение скорости
света в вакууме к скорости света в испытуемом веществе (абсолютный
показатель преломления). На практике определяют так называемый относительный
показатель преломления («), который является отношением скорости
света в воздухе к скорости света в испытуемом веществе.
Показатель преломления зависит от температуры и длины волны света, при
которой проводят определение. В растворах показатель преломления зависит
также от концентрации вещества и природы растворителя.
Рефрактометрию применяют для установления подлинности и чистоты вещества.
Метод применяют также для определения концентрации вещества в растворе,
которую находят по графику зависимости показателя преломления
раствора от концентрации. На графике выбирают интервал концентраций,
ш

в котором наблюдается линейная зависимость между показателем преломления
и концентрацией. В этом интервале концентрацию вычисляют по формуле:
X={n-n0)IF,
где: Х- концентрация, в процентах;
п - показатель преломления раствора;
п0 - показатель преломления растворителя при той же температуре;
F— фактор, равный величине прироста показателя преломления при увеличении
концентрации на 1 % (устанавливается экспериментально).
Для определения показателя преломления применяют рефрактометры. Определение
проводят при температуре (20 ± 0,5) °С и длине волны линии D спектра
натрия (589,3 нм). Показатель преломления, определенный при таких условиях,
обозначается индексом nD.
Современные приборы откалиброваны таким образом, что отсчеты, полученные
по их шкалам, соответствуют показателям преломления для D линии спектра
натрия. При проведении измерений следует соблюдать указания в
отношении соответствующего источника света, приведенные в инструкции к
прибору. Если используют белый свет, то рефрактометр снабжен компенсирующей
системой.
Цена деления термометра не должна превышать 0,5 °С.
Обычно измерения показателя преломления проводят на рефрактометрах
Аббе, в основу которых положено явление полного внутреннего отражения при
прохождении светом границы раздела двух сред с разными показателями преломления.
Диапазон измеряемых показателей преломления при измерении в проходящем
свете 1,3-1,7. Точность измерения показателя преломления должна
быть не ниже ± 2х 10'4.
Могут быть использованы рефрактометры других типов с такой же
или большей точностью.
Рефрактометры юстируют по эталонным жидкостям, приведенным в
табл. 10.1, значения показателей преломления которых обозначены на
этикетке, или по дистиллированной воде, для которой nD = 1,3330 и
п» = 1,3325 (Дя/Дг - -0,000085).
Таблица 10.1
Температурные коэффициенты эталонных жидкостей
Эталонная жидкость
2,2,4-триметилпентан
четыреххлористый углерод
толуол
а-метилнафталин
A/i/А* (температурный коэффициент)
-0,00049
-0,00057
-0,00056
-0,00048

11. ПОЛЯРИМЕТРИЯ (ОФС 42-0041-07)
Оптическое вращение - свойство вещества вращать плоскость поляризации
при прохождении через него поляризованного света.
В зависимости от природы оптически активного вещества вращение плоскости
поляризации может иметь различное направление и величину. Если от наблюдателя,
к которому направлен свет, проходящий через оптически активное
вещество, плоскость поляризации вращается по часовой стрелке, то вещество
называют правовращающим и перед его названием ставят знак (+); если же плоскость
поляризации вращается против часовой стрелки, то вещество называют
левовращающим и перед его названием ставят знак (—).
Величину отклонения плоскости поляризации от начального положения, выраженную
в угловых градусах, называют углом вращения и обозначают греческой
буквой а. Величина угла вращения зависит от природы оптически
активного вещества, длины пути поляризованного света в оптически активной
среде (чистом веществе или растворе) и длины волны света. Для растворов величина
угла вращения зависит от природы растворителя и концентрации оптически
активного вещества. Величина угла вращения прямо пропорциональна
длине пути света, т. е. толщине слоя оптически активного вещества или его раствора.
Влияние температуры в большинстве случаев незначительно.
Для сравнительной оценки способности различных веществ вращать плоскость
поляризации света вычисляют величину удельного вращении [а]. Удельное
оптическое вращение [а]2. представляет собой угол вращения а плоскости
поляризации монохроматического света при длине волны линии D спектра натрия
(589,3 нм), выраженный в градусах, измеренный при температуре 20 °С,
рассчитанный для толщины слоя испытуемого вещества 1 дм и приведенный к
концентрации вещества, равной 1 г/мл. Выражается в градус-миллилитрах на
дециметр-грамм [(°) х мл х дм-1 х г1].
Иногда для измерения используют зеленую линию спектра ртути с длиной
волны 546,1 нм.
При определении [а] в растворах оптически активного вещества необходимо
иметь в виду, что найденная величина может зависеть от природы растворителя
и концентрации оптически активного вещества.
Замена растворителя может привести к изменению [а] не только по величине,
но и по знаку. Поэтому, приводя величину удельного вращения, необходимо указывать
растворитель и выбранную для измерения концентрацию раствора.
Удельное вращение определяют либо в пересчете на сухое вещество, либо из
высушенной навески, что должно быть указано в частной фармакопейной статье.
Измерение угла вращения проводят на поляриметре, позволяющем определить
величину угла вращения с точностью ± 0,02 °С, при температуре
(20 ± 0,5) °С. Измерения оптического вращения могут проводиться и при других
значениях температуры, но в таких случаях в частной фармакопейной статье
должен быть указан способ учета температуры. Шкалу обычно проверяют при
помощи сертифицированных кварцевых пластинок. Линейность шкалы может
быть проверена при помощи растворов сахарозы.
Оптическое вращение растворов должно быть измерено в течение
ш

30 мин с момента их приготовления; растворы или жидкие вещества должны
быть прозрачными. При измерении, прежде всего, следует установить нулевую
точку прибора или определить величину поправки с трубкой, заполненной чистым
растворителем (при работе с растворами), или с пустой трубкой (при работе
с жидкими веществами). После установки прибора на нулевую точку или
определения величины поправки проводят основное измерение, которое повторяют
не менее 3 раз.
Для получения величины угла вращения а показания прибора, полученные
при измерениях, алгебраически суммируют с ранее найденной величиной поправки.
Величину удельного вращения [а] рассчитывают по одной из следующих
формул.
Для веществ, находящихся в растворе:
ах 100
[«]= > О)
/х с
где: а - измеренный угол вращения, в градусах;
/ - толщина слоя, в дециметрах;
с - концентрация раствора, в граммах вещества на 100 мл раствора.
Для жидких веществ:
а
[о]= , (2)
где: а - измеренный угол вращения, в градусах;
/ - толщина слоя, в дециметрах;
р - плотность жидкого вещества, в граммах на 1 мл.
Измерение величины угла вращения проводят либо для оценки чистоты оптически
активного вещества, либо для определения его концентрации в растворе.
Для оценки чистоты вещества по уравнению (1) или (2) рассчитывают величину
его удельного вращения [а]. Концентрацию оптически активного вещества в растворе
находят по формуле:
«х ЮО
С = . (3)
[о]х/
Поскольку величина [а] постоянна только в определенном интервале концентраций,
возможность использования формулы (3) ограничивается этим интервалом.

12. СПЕКТРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Спектроскопические методы анализа основаны на избирательном поглощении
электромагнитного излучения анализируемым веществом и служат для исследования
строения, идентификации и количественного определения
светопоглощающих соединений.
В зависимости от используемой аппаратуры в фармацевтическом анализе различают
следующие методы анализа, основанные на поглощении электромагнитного
излучения и испускании света:
- спектрофотометрия в ультрафиолетовой (УФ) и видимой областях;
- спектрофотометрия в инфракрасной (ИК) области;
- атомно-эмиссионная и атомно-абсорбционная спектроскопия (АЭС и ААС);
- флуориметрия;
- спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР).
Ряд длин волн, для которых проводятся измерения методами абсорбционной
спектрофотометрии, охватывает спектральную область от коротких длин волн в
УФ-области до ИК-области. Для удобства отнесений этот спектральный ряд делится
на следующие диапазоны длин волн: УФ (от 190 до 380 нм), видимый (от
380 до 780 нм), ИК (от 0,78 до 400 мкм).
12.1. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ В УЛЬТРАФИОЛЕТОВОЙ
И ВИДИМОЙ ОБЛАСТЯХ (ОФС 42-0042-07)
Уменьшение величины монохроматического излучения, проходящего через
гомогенную поглощающую среду, количественно описывается законом Бугера-
Ламберта-Бера:
logl0(l/T)~A = exc*b, (1)
где: Т - пропускание; Т = 1/10;
I - интенсивность прошедшего монохроматического излучения;
10 - интенсивность падающего монохроматического излучения;
е - молярный показатель поглощения;
с - молярная концентрация вещества в растворе;
Ъ - длина оптического пути или толщина слоя, в сантиметрах.
Величина logio(l/T) носит название оптической плотности, обозначается буквой
А и является измеряемой величиной. В отсутствии других физико-химических
факторов измеренная оптическая плотность (А) пропорциональна
концентрации вещества в растворе (с) и толщине слоя (Ь).
1%
Величина А\а. представляет собой удельный показатель поглощения, т.е. оптическую
плотность раствора вещества с концентрацией 10 г/л
(1 г/100 мл) в кювете с толщиной слоя 1 см. Величины А* и е связаны соотношением:
10 хе
А1= , (2)
М.м.
где М.м. - молекулярная масса исследуемого вещества.
ЕЯ

Измерение оптической плотности. Если нет других указаний в частной
статье, измерение оптической плотности проводят при указанной длине волны
с использованием кювет с толщиной слоя 1 см и при температуре (20 ± 1) °С по
сравнению с тем же растворителем или той же смесью растворителей, в которой
растворено вещество. При измерении оптической плотности раствора при данной
длине волны оптическая плотность кюветы с растворителем, измеренная
против воздуха при той же длине волны, не должна превышать 0,4 и желательно,
чтобы она была менее 0,2. Для снижения величины ошибки при определении
оптической плотности концентрация раствора (а иногда и толщина слоя) подбираются
таким образом, чтобы оптическая плотность в исследуемой спектральной
области находилась в пределах от 0,2 до 0,8.
Спектр поглощения представляют таким образом, чтобы оптическая плотность
или ее некоторая функция были приведены по оси ординат, а длина волны
или некоторая функция длины волны - по оси абсцисс.
Если в частной статье для максимума поглощения указывается только одна
длина волны, то это означает, что полученное значение максимума не должно
отличаться от указанного более чем на ± 2 нм.
Приборы. Спектрофотометры, предназначенные для измерений в ультрафиолетовой
и видимой областях спектра, состоят из оптической системы, выделяющей
монохроматическое излучение в области от 190 до 780 нм и
обеспечивающей его прохождение через образец, и устройства для измерения
оптической плотности.
Основными частями этих приборов являются: источник излучения, диспергирующий
прибор (призма или решетка), щель для выделения полосы длин волн,
кюветы для образцов, детектор излучаемой энергии, встроенные усилители и
измерительные приборы.
Проверка шкалы длин волн в УФ и видимой области. Точность калибровки
прибора по шкале длин волн в спектральном ряду проверяют по приведенным
в табл. 12.1.1 спектральным линиям водородной (HP) или дейтериевой (Dp) разрядной
лампы, линиям паров ртути (Hg) кварцево-ртутной дуговой лампы, а
также по максимумам поглощения раствора гольмия перхлората (Но) (готовый
реактив для калибровки спектрофотометра представляет собой 4 % раствор
гольмия оксида в 1,4 М растворе хлорной кислоты). Допустимое отклонение составляет
± 1 нм для ультрафиолетовой и ± 3 нм для видимой области.
Таблица 12.1.1
Спектральные линии для проверки шкалы длин волн
241,15 нм (Но)
253,7 нм (Hg)
287,15 нм (Но)
302,25 нм (Hg)
313,16 HM(Hg)
334,15 HM(Hg)
361,5 нм (Но)
365,48 нм (Hg)
404,66 нм (Hg)
435,83 нм (Hg)
486,0 нм (Dp)
486,1 нм(НР)
536,3 нм (Но)
546,07 нм (Hg)
576,96 нм (Hg)
579,07 нм (Hg)
шь

Шкала длин волн может быть калибрована также при помощи подходящих
стеклянных фильтров, которые имеют фиксированные полосы поглощения в видимой
и УФ-областях, а также стандартных стекол, содержащих дидим (смесь
празеодима и неодима), и стекол, содержащих гольмий.
Проверка шкалы оптической плотности. Для проверки шкалы оптической
плотности используют стандартные неорганические стеклянные фильтры или
раствор калия дихромата при длинах волн, указанных в табл. 12.1.2, где для каждой
длины волны приведено точное значение удельного показателя поглощения
А\см и допустимые пределы.
Раствор калия дихромата готовят следующим образом:
от 57,0 до 63,0 мг (точная навеска) калия дихромата, предварительно высушенного
до постоянной массы при температуре 130 °С, растворяют в
0,005 М растворе серной кислоты и доводят объем раствора тем же растворителем
до 1000 мл.
Таблица 12.1.2
Удельный показатель поглощения стандартов при различных длинах волн
Длина волны,
в нанометрах
235
257
313
350
Удельный показатель
поглощения
S±\CM
124,5
144,5
48,6
107,3
Допустимые
пределы
. 1%
для Ale*
От 122,9 до 126,2
От 142,8 до 146,2
От 47,0 до 50,3
От 105,6 до 109,0
Предельный уровень рассеянного света. Рассеянный свет может быть обнаружен
при данной длине волны с использованием соответствующих фильтров
или растворов: например, оптическая плотность раствора 12 г/л калия хлорида
в кювете с толщиной слоя 1 см при 200 нм при использовании воды в качестве
раствора сравнения должна быть больше 2.
Разрешающая способность (для качественного анализа). Если есть указание
в частной статье, определяют разрешающую способность спектрофотометра
следующим образом. Записывают спектр 0,02 % (об/об) раствора толуола в гек-
сане. Минимально допустимое значение отношения оптической плотности в максимуме
поглощения при 269 нм к оптической плотности в минимуме
поглощения при 266 нм указывают в частной статье.
Ширина спектральной щели (для количественного анализа). В случае использования
спектрофотометра с изменяемой шириной спектральной щели при
выбранной длине волны возможны погрешности, связанные с шириной этой
щели. Для их исключения ширина щели должна быть малой по сравнению с полушириной
полосы поглощения (шириной на половине оптической плотности)
и в то же время должна быть максимально велика для получения высокого значения
интенсивности падающего монохроматического излучения (10). Таким образом,
ширина щели должна быть такой, чтобы дальнейшее ее уменьшение не
изменяло величину измеряемой оптической плотности.
ЕЯ

Кюветы. Допустимые отклонения в толщине слоя используемых кювет
должны быть не более ±0,005 см. Кюветы, предназначенные для испытуемого
раствора и раствора сравнения, должны иметь одинаковое пропускание (или оптическую
плотность) при заполнении одним и тем же растворителем. В противном
случае это различие следует учитывать.
Требования к растворителям. Для определений, производимых в ультрафиолетовой
и видимой областях, образец анализируемого вещества растворяют в
соответствующем растворителе, который должен быть оптически прозрачным в
используемой области длин волн. Для этих областей длин волн пригодны многие
растворители, в том числе вода, спирты, хлороформ, низшие углеводороды,
эфиры и разбавленные растворы сильных кислот и щелочей.
Идентификация
Абсорбционную спектрофотометрию в ультрафиолетовой и видимой областях
спектра применяют для определения подлинности лекарственных средств
путем:
- сравнения спектров поглощения испытуемого раствора и раствора стандартного
образца; в указанной области спектра должно наблюдаться совпадение
положений максимумов, минимумов, плеч и точек перегиба;
- указания положений максимумов, минимумов, плеч и точек перегиба; расхождение
между наблюдаемыми и указанными длинами волн в максимумах и
минимумах поглощения не должно обычно превышать ± 2 нм.
Возможны и другие варианты применения, оговоренные в частных фармакопейных
статьях.
Количественное определение
Определение концентрации веществ спектрофотометрическим методом основано
на использовании закона Бугера-Ламберта-Бера в форме:
А
где: С - концентрация вещества в г/100 мл;
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
Ail, - удельный показатель поглощения вещества;
Ъ - толщина поглощающего слоя, в сантиметрах.
В ряде случаев даже при использовании монохроматического излучения
могут наблюдаться отклонения от закона Бугера-Ламберта-Бера, обусловленные
процессами диссоциации, ассоциации и комплексообразования. Поэтому предварительно
следует проверить линейность зависимости оптической плотности
раствора от концентрации в аналитической области. При наличии отклонений от
линейной зависимости следует пользоваться не формулой (3), а экспериментально
найденной зависимостью.
Обычно определение концентрации спектрофотометрическим методом проводят
с использованием стандартного образца. Расчет концентрации основан на
использовании уравнения:
ша

— = JLt (4)
где: С и С0 - концентрации испытуемого раствора и раствора стандартного
образца соответственно;
АиА - оптические плотности испытуемого раствора и раствора стандартного
образца соответственно.
Вначале измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца,
приготовленного, как указано в частной фармакопейной статье, затем проводят
измерение оптической плотности испытуемого раствора. Второе измерение проводят
сразу после первого, с использованием той же кюветы, в тех же экспериментальных
условиях.
Метод с использованием стандартного образца является более точным и надежным.
Возможность применения значения удельного показателя поглощения
в каждом конкретном случае следует обосновывать. Обычно метод с использованием
значения удельного показателя поглощения применим при допусках содержания
анализируемого вещества не менее ±10 % от номинального
содержания.
Многокомпонентный спектрофотометрический анализ
Многокомпонентный спектрофотометрический анализ (анализ смесей) применяют
для одновременного количественного определения нескольких компонентов
лекарственных средств, каждое из которых подчиняется закону
Бугера-Ламберта-Бера.
Количественное определение в многокомпонентном спектрофотометрическом
анализе основывается обычно на использовании уравнения:
т
4=Z.ijXCj *=1,...п, (5)
j=i
где: Ау - оптическая плотность испытуемого раствора при г'-ой длине волны;
Ец - показатели поглощения (зависящие от способа выражения концентрации)
у'-го компонента образца при г'-ой аналитической длине волны;
с: - концентрация у'-го компонента образца.
Соответствующие методики проведения анализа и расчетные формулы указываются
в частных фармакопейных статьях.
Производная спектрофотометрия
В производной спектрофотометрии исходные спектры поглощения (нулевого
порядка) преобразуются в спектры производных первого, второго и более высокого
порядков.
Спектр первой производной представляет собой график зависимости градиента
кривой поглощения (скорость изменения оптической плотности с длиной
волны, dAldk) от длины волны.
Спектр второй производной представляет собой график зависимости

кривизны спектра поглощения (сРА/аЛ2) от длины волны. Вторая производная
при любой длине волны связана с концентрацией следующим соотношением:
(РА сРА\?° 1см
dl2 dX2
х e x /, (6)
где: А - оптическая плотность при длине волны X;
¦^1см ~ удельный показатель поглощения при длине волны X;
с - концентрация вещества в растворе, в граммах/100 мл;
/ - толщина слоя, в сантиметрах.
Производная спектрофотометрия может быть использована как для целей
идентификации веществ, так и их количественного определения в многокомпонентных
смесях, а также в тех случаях, когда имеется фоновое поглощение, вызванное
присутствием веществ, содержание которых не регламентируется.
Приборы. Используют спектрофотометры, отвечающие указанным выше требованиям
и оснащенные аналоговым резистентно-емкостным дифференцирующим
модулем или цифровым дифференциатором, или другими средствами
получения производных спектров, в соответствии с инструкцией к прибору. Некоторые
методы получения спектров второй производной приводят к смещению
длин волн относительно исходного спектра, что следует учитывать там, где это
необходимо.
Разрешающая способность. Если указано в частных фармакопейных
статьях, записывают спектр второй производной для раствора 0,2 г/л толуола в
метаноле, используя метанол в качестве раствора сравнения. На спектре должен
присутствовать небольшой отрицательный
экстремум, расположенный между tfWdx*
двумя большими отрицательными экстремумами
при 261 нм и 268 нм, в соответствии
с рис. 12.1.1. Если нет
других указаний в частных фармакопейных
статьях, отношение А/В
должно быть не менее 0,2.
Методика. Процедура анализа аналогична
применяемой в обычной спек-
трофотометрии, но вместо оптических
плотностей используют производные.
Готовят раствор испытуемого образца,
настраивают прибор в соответствии с
инструкцией производителя и рассчитывают
количество определяемого вещества,
как указано в частной
фармакопейной статье.
Рис. 12.1.1. Спектр второй производной
раствора толуола (0,2 г/л) в метаноле
¦ +

12.2. СПЕКТРОМЕТРИЯ В ИНФРАКРАСНОЙ ОБЛАСТИ
(ОФС 42-0043-07)
Инфракрасные (ИК) спектры (колебательные спектры) возникают вследствие
поглощения электромагнитной энергии при колебаниях ядер атомов в молекулах
или ионах, которые сопровождаются изменением дипольных моментов, и
представляют собой зависимость пропускания от длины волны (Я) или частоты
колебаний (v).
Под ИК-областью подразумевают электромагнитное излучение в области
длин волн от 0,78 до 400 мкм. Область от 780 до 2500 нм (от 0,78 до
2,5 мкм) рассматривается как ближняя ИК-область, область от 2,5 до 25 мкм
(от 4000 до 400 см1) относится к средней ИК-области спектра и область от
25 до 400 мкм относится к дальней ИК-области. Наиболее часто используется
средняя ИК-область.
Длину волны (X) в ИК-спектрах обычно измеряют в микрометрах
(микронах), мкм.
Поскольку частота колебаний в ИК-спектрах имеет большие числовые
значения, обычно используют не частоты (v), а волновые числа (v), которые измеряются
в см-1 и связаны с частотой (п) уравнением:
V = V /С ,
где: v - частота, в герцах (с1);
с -скорость света в вакууме, в смхс1.
Волновое число (у) связано с длиной волны (Я, в мкм) соотношением:
v = 104/Я .
Приборы. Могут быть использованы инфракрасные спектрофотометры,
снабженные оптической системой (призмы или дифракционные решетки),
выделяющей монохроматическое излучение в измеряемой области, или
спектрофотометры с Фурье-преобразованием. В последних используется
полихроматическое излучение и рассчитывается спектр в заданной области
частот путем Фурье-преобразования исходных данных. В таких приборах вместо
диспергирующего прибора используется интерферометр, а обработка
спектральных данных производится с помощью компьютера.
Подготовка образца. Для записи спектра пропускания или поглощения
готовят образец субстанции по одной из следующих методик.
Жидкости. Жидкости исследуют в форме пленки между двумя
пластинками, прозрачными для инфракрасного излучения, или в кювете с
малой (обычно 0,01-0,05 мм) толщиной слоя, также прозрачной для
инфракрасного излучения.
Жидкости или твердые вещества в растворе. Готовят раствор испытуемой
субстанции в подходящем растворителе. Выбирают концентрацию вещества и
толщину слоя кюветы, позволяющие получить удовлетворительный спектр.

Обычно хорошие результаты получают при концентрациях от 5 до 15 г/л при
толщине слоя от 0,1 до 1 мм.
Поглощение растворителя компенсируют путем помещения в канал сравнения
аналогичной кюветы, содержащей выбранный растворитель.
Кюветы. Если кюветы, заполненные растворителем, обладают разным поглощением
при выбранной длине волны, то вносят поправку на измеренное поглощение
испытуемого раствора. При использовании спектрофотометров с
Фурье-преобразованием коррекция кювет не требуется, поскольку одна и та же
кювета может быть использована и для растворителя и для испытуемого раствора.
Кюветы для ИК-спектрометрии изготавливают из солевых материалов
(NaCl, КВг, CaF2, LiF и др.). Область прозрачности кюветы в ИК-области зависит
от использованного материала.
Растворители. Не существует растворителей, которые при значительной толщине
слоя были бы полностью прозрачными для ИК-спектров. Четыреххло-
ристый углерод (при толщине слоя до 5 мм) практически прозрачен до 6 мкм
(1666 см1). Углерода дисульфид (толщиной 1 мм) подходит как растворитель до
40 мкм (250 см1) за исключением областей от 4,2 до 5,0 мкм (от 2381 до
2000 см-1) и от 5,5 до 7,5 мкм (от 1819 до 1333 см1), где он имеет сильное поглощение.
Другие растворители прозрачны в относительно узкой области. Растворители,
применяемые в ИК-спектрометрии, должны быть инертны к
материалу, из которого сделана кювета.
Твердые вещества. Твердые вещества исследуют в твердом состоянии (диски
из галогенидов щелочных металлов), диспергированными в подходящей жидкости
в виде суспензии или формируют пленку из расплавленной массы между
двумя пластинами, прозрачными для инфракрасного излучения. Подготовку образца
описывают в частной фармакопейной статье.
Диски. 1-3 мг вещества, предназначенного для испытания, растирают с
150-200 мг, если не указано иначе в частной фармакопейной статье, тщательно
измельченного и высушенного калия бромида или калия хлорида
(обычно используют калия бромид). Типичные условия высушивания калия
бромида: при 105 °С в вакууме, в течение 12 ч. Обычно такого количества достаточно
для приготовления диска диаметром 13 мм и получения спектра подходящей
интенсивности. Смесь тщательно перетирают, добиваясь необходимой
однородности, и прессуют диск при давлении около 800 МПа (8 т/см2) в вакууме
(2-3 мм рт. ст.) в течение 2-5 мин. Причиной образования некачественных дисков
могут быть такие факторы, как недостаточное или чрезмерное растирание, влага
или иные примеси в дисперсионной среде и недостаточное измельчение частиц.
Диск непригоден для испытания, если при визуальном осмотре он неоднороден
по прозрачности или если его пропускание при 2000 см-' (5 мкм) составляет
менее 75 % без компенсации при отсутствии специфической
полосы поглощения.
Суспензии. Небольшое количество вещества, предназначенного для испытания,
растирают с минимальным количеством вазелинового масла или
другой подходящей жидкости (смешивают 5-20 мг твердого вещества с
1-2 каплями иммерсионной жидкости). Полученную суспензию сжимают
ШАЛ

между двумя пластинками (NaCl или КВг), прозрачными для инфракрасного
излучения.
Газы. Газы исследуют в кювете, прозрачной для инфракрасного излучения, с
длиной оптического пути около 100 мм. Откачивают воздух из кюветы и заполняют
анализируемым газом через кран или при помощи игольчатого клапана.
Если необходимо, доводят давление в кювете до атмосферного, используя газ,
прозрачный для инфракрасного излучения (например, азот или аргон). Для исключения
помех, связанных с поглощением воды, углерода диоксида или других
атмосферных газов, в канал сравнения помещают идентичную кювету, которая
либо вакуумирована, либо заполнена газом, прозрачным для инфракрасного излучения.
Для записи спектра по методу нарушенного полного внутреннего отражения
(МНПВО) подготовку образца проводят одним из способов.
Растворы. Вещество растворяют в соответствующем растворителе, соблюдая
условия, приведенные в частной фармакопейной статье. Раствор испаряют
на поверхности элемента МНПВО, который обычно изготавливают из кристалла
бромида йодида таллия (KRS-5), германия или другого минерала с большим показателем
преломления.
Твердые вещества. Вещество помещают на поверхность элемента МНПВО
таким образом, чтобы получить гомогенный контакт.
Идентификация с использованием стандартных образцов
Образец испытуемого вещества и стандартный образец готовят по одной и
той же методике и записывают спектры в области от 4000 до 400 см1 (от 2,5 до
25 мкм), в одних и тех же условиях. Полосы поглощения в спектре испытуемого
образца должны соответствовать по положению полосам поглощения в спектре
стандартного образца. Под полосами поглощения подразумевают минимумы
пропускания и максимумы поглощения.
Если спектры, полученные в твердом состоянии, показывают различия в положении
полос поглощения, то испытуемую субстанцию и стандартный образец
обрабатывают одним и тем же способом так, чтобы они кристаллизовались или
получались в одной и той же форме, или обрабатывают способом, указанным в
частной фармакопейной статье, а затем снимают спектры.
Идентификация с использованием эталонных спектров
Контроль разрешающей способности. Записывают спектр пленки полистирола
толщиной 0,04мм. Разность х (рис. 12.2.1) между процентом пропускания
при максимуме пропускания А при 2870 см1 (3,48 мкм) и
минимуме пропускания В при 2849,5 см-1 (3,51 мкм) должна быть больше 18.
Разность у между процентом пропускания при максимуме пропускания С
при 1589 см1 (6,29 мкм) и минимуме пропускания D при 1583 см-1 (6,32 мкм)
должна быть больше 12.
Проверка шкалы волновых чисел. Шкала волновых чисел может быть проверена
с помощью пленки полистирола, которая имеет минимум пропускания (максимум
поглощения) при волновых числах (в см1), приведенных в табл. 12.2.1.
Методика. Субстанцию готовят к испытанию в соответствии с инструкцией,
прилагаемой к эталонному спектру. Используя условия, при которых
ЕЖ

проводилась проверка разрешающей способности, записывают спектр испытуемого
образца и на него накладывают полосы полистирола при
2849,5 см-1 (3,51 мкм), 1601,2 см-' (6,25 мкм) и 1028,3 см-1 (9,72 мкм). Сравнивают
два спектра (эталонный и спектр испытуемой субстанции) и полосы
полистирола, указанные выше. При использовании положения полос полистирола
в качестве стандартных величин, положения значимых полос в спектре
испытуемой субстанции и в эталонном спектре должны соответствовать
друг другу в пределах 0,5 % от шкалы волновых чисел. Относительная величина
полос обоих спектров должна согласовываться между собой.
3200 3000 2800 2600 1800 1600 1400
Волновое число, см"1
Рис. 12.2.1. Типичный спектр полистирола, используемый для проверки
разрешающей способности
Таблица 12.2.1
Минимумы пропускания и допустимые пределы для пленки полистирола
Минимумы пропускания, см-1
3060,0
2849,5
1942,9
1601,2
1583,0
1154,5
Допустимые пределы, см1
±1,5
±1,5
±1,5
±1,0
±1,0
±1,0
Примеси в газах
Для анализа примесей в газах используют кювету, прозрачную для инфракрасного
излучения и имеющую соответствующую длину оптического пути (например,
от 1 до 20 м). Кювету заполняют так, как указано в разделе «Газы». Для
обнаружения и количественной оценки примесей используют методики, указанные
в частных фармакопейных статьях.
5. Зак. 2768

12.3. АТОМНО-ЭМИССИОННАЯ И АТОМНО-АБСОРБЦИОННАЯ
СПЕКТРОМЕТРИЯ (ОФС 42-0044-07)
Атомная спектрометрия - эмиссионная и абсорбционная - применяется для
определения содержания элемента в испытуемом образце посредством измерения
интенсивности одной из эмиссионных линий атомного пара (атомно-эмис-
сионная спектрометрия) или поглощения излучения атомным паром
(атомно-абсорбционная спектрометрия) определяемого элемента путем измерения
интенсивности эмиссии (испускания) или абсорбции (поглощения) света
при определенной длине волны атомного пара элемента, генерированного из вещества,
например, при введении раствора вещества в пламя. Определение проводят
при длине волны, соответствующей выбранной эмиссионной или
абсорбционной линии.
Точность обоих методов атомной спектрометрии, в зависимости от концентрации
вещества, составляет 1-4 %, чувствительность определяется свойствами аналитической
линии, составом пробы, классом аппаратуры и может достигать 0,001 мкг/мл.
АТОМНО-ЭМИССИОННАЯ ПЛАМЕННАЯ СПЕКТРОМЕТРИЯ (АЭС)
Принцип метода. Анализируемый раствор распыляется в виде аэрозоля в
пламя горелки, работающей на горючем газе. Под действием температуры пламени
происходит ряд сложных физико-химических процессов: испарение растворителя
из капель аэрозоля, испарение твердых частиц, диссоциация молекул,
возбуждение атомов и возникновение характеристического излучения атомов.
Излучение определяемого элемента отделяется от постороннего с помощью светофильтра
или монохроматора, попадает на фотоэлемент и вызывает фототок,
который измеряется. Количественное определение элемента методом эмиссионной
спектрометрии основано на функциональной зависимости интенсивности
спектральной линии (I) от концентрации элемента в растворе (с).
Прямопропорциональная зависимость между 1м с имеет место лишь в определенной
для данного элемента области концентраций. Линейную зависимость /
от с может нарушать самопоглощение, ионизация, образование газообразных
или трудно диссоциирующих в пламени соединений.
Прибор. Главными составными частями атомно-эмиссионного спектрометра
являются: генератор атомного пара определяемого элемента (пламя, плазма, дуга
и др.), монохроматор и детектор.
Если генератором является пламя, в качестве растворителя для приготовления
испытуемого и стандартного растворов рекомендуется использовать воду.
Могут использоваться и органические растворители, если они не влияют на стабильность
пламени.
АТОМНО-АБСОРБЦИОННАЯ СПЕКТРОМЕТРИЯ (ААС)
Принцип метода. Резонансное излучение от лампы с полым катодом проходит
через пламя, в которое распыляется анализируемый раствор пробы. Излучение
попадает на входную щель монохроматора, установленного таким
образом, что из спектра выделяется только резонансная линия определяемого
элемента, интенсивность которой измеряется фотоэлектрическим способом. Измеряют
уменьшение интенсивности резонансной линии вследствие поглощения

ее атомами определяемого элемента, принимая интенсивность неослабленной
линии за 100 %. Величина поглощения резонансного излучения пропорциональна
числу атомов, находящихся в поглощающем слое.
Прибор. Главными составными частями прибора являются: источник излучения,
атомный генератор определяемого элемента (пламя, печь и др.), моно-
хроматор и детектор - для считывания сигнала из нагревательной камеры.
Для каждого определяемого элемента должен быть выбран специфический
источник, излучающий спектральную линию, которая должна быть абсорбирована.
Таким источником излучения обычно является полая катодная лампа,
катод которой испускает излучение при возбуждении. Поскольку излучение,
абсорбируемое испытуемым элементом, обычно той же длины волны, что и
его линия эмиссии, в полой катодной лампе используется тот элемент, который
определяется.
Прибор снабжен аспиратором для введения испытуемого образца в пламя,
создаваемое газовыми смесями.
Число возбужденных атомов увеличивается с ростом температуры, которая
зависит в основном от теплотворной способности создающего пламя газа
(табл. 12.3.1).
Таблица 12.3.1
Температура наиболее часто используемых газовых смесей
Состав газовой смеси
Светильный газ + воздух
Ацетилен + воздух
Ацетилен + кислород
Водород + кислород
Ацетилен + закись азота
Температура, °С
1840
2250
3050
2680
2955
Способ введения образца зависит от типа используемого генератора. Если генератором
атомного пара является пламя, в качестве растворителя для приготовления
испытуемого и стандартного растворов рекомендуется использовать
воду. Могут использоваться и органические растворители, если они не влияют
на стабильность пламени. При использовании печи может быть также использована
техника ввода твердых проб.
В атомно-абсорбционной спектрометрии должна учитываться природа растворителя
и концентрация твердых частиц. Идеальным считается растворитель
с минимальными помехами в процессах поглощения или эмиссии, при использовании
которого в пламени образуются нейтральные атомы. Если имеются значительные
различия между поверхностным натяжением или вязкостью
испытуемого раствора и стандартного раствора, то эти растворы всасываются и
атомизируются с различной скоростью, что обуславливает существенное различие
в генерированных сигналах. Концентрация кислоты в растворах также влияет
на процессы абсорбции. Таким образом, растворители, используемые для
приготовления испытуемого и стандартного растворов в методе А АС, должны
быть одними и теми же или максимально похожими и должны образовывать растворы,
которые легко всасываются через трубку форсунки аспиратора.
Шк

Присутствие в растворе частиц нерастворенного твердого вещества может вызвать
помехи при проведении анализа, поэтому общее содержание нерастворимых
твердых частиц в растворах должно быть менее 2 %.
Атомный пар может быть получен также вне спектрометра, например, методом
«холодного пара» для определения ртути или гидридным методом. При
определении ртути атомы генерируются при химическом восстановлении, и
атомный пар вносится потоком инертного газа в абсорбционную ячейку, расположенную
на оптическом пути прибора. В гидридном методе получают гидрид
определяемого элемента, который либо смешивается с газом, питающим горелку,
либо вносится инертным газом в нагретую абсорбционную ячейку, где он диссоциирует
на атомы.
Методика. Прибор выводят на режим в соответствии с инструкцией по эксплуатации
прибора и устанавливают требуемую длину волны. В генератор атомного
пара вводят холостой раствор и настраивают регистрирующее устройство
на нулевое значение в случае атомно-эмиссионного спектрометра и на максимальное
светопропускание в случае атомно-абсорбционной спектрометрии. Вводят
стандартный раствор определяемого элемента с наибольшей концентрацией
и подбирают чувствительность для получения подходящего значения регистрируемого
сигнала.
Испытуемый раствор готовят, как указано в частной фармакопейной статье.
Определения проводят путем сравнения со стандартными растворами известной
концентрации определяемого элемента одним из двух методов: методом
калибровочной кривой или методом стандартных добавок.
Каждый раствор вводят в генератор прибора не менее трех раз и записывают
установившееся показание. Каждый раз промывают прибор холостым раствором
и проверяют, чтобы показание прибора возвращалось к первоначальному
значению для холостого раствора.
В случае использования печи в качестве генератора атомного пара между измерениями
ее отжигают.
Метод калибровочной кривой. Готовят не менее трех стандартных растворов
определяемого элемента таким образом, чтобы ожидаемое значение концентрации
испытуемого раствора находилось внутри диапазона концентраций стандартных
растворов. Все реагенты, используемые при приготовлении
испытуемого раствора, прибавляют к стандартным растворам и холостому раствору
в таких же концентрациях.
Строят калибровочную кривую зависимости среднего значения результата измерения
(/), полученного для стандартных растворов, от концентрации (с) и
определяют концентрацию элемента в испытуемом растворе по калибровочной
кривой.
Метод стандартных добавок. Равные объемы испытуемого раствора помещают
не менее, чем в три мерные колбы одинаковой вместимости. Во все колбы,
кроме одной, прибавляют пропорционально увеличивающиеся объемы стандартного
раствора, содержащего известную концентрацию определяемого элемента
(стандартные добавки), и доводят объемы растворов используемым
растворителем до метки. При этом значение регистрируемого сигнала
Е.х*^|

растворов со стандартными добавками должно находиться в линейной области
калибровочной кривой.
Рассчитывают параметры линейного уравнения прямолинейной зависимости
среднего значения результата измерения от концентрации раствора методом наименьших
квадратов и вычисляют концентрацию определяемого элемента в испытуемом
растворе.
Расчет концентрации может быть произведен графическим методом. Для
этого строят график зависимости среднего значения результата измерения от добавленного
количества определяемого элемента. Экстраполируют линию, соединяющую
эти точки на графике, до пересечения с осью абсцисс. Расстояние от
начала координат до полученной точки пересечения дает концентрацию определяемого
элемента в испытуемом растворе.
При использовании техники ввода твердых проб условия проведения анализа
должны быть указаны в частной фармакопейной статье.
При использовании АЭС и ААС для определения концентрации элемента в
анализируемых образцах наряду с приведенными выше методами (калибровочной
кривой и стандартных добавок) могут быть использованы метод сравнения
и метод ограничивающих растворов или другие валидированные методы.
Реактивы и эталонные растворы. Вода должна быть деионизированной
на ионообменных смолах, продистиллированной непосредственно перед употреблением
и должна соответствовать требованиям, предъявляемым к воде
очищенной.
Ниже приведены растворы солей, катионы которых обозначены названиями
элементов, наиболее часто нормируемых в фармацевтическом анализе.
Кальций. 1,001 г кальция карбоната, высушенного до постоянной массы при
температуре 105 °С, растворяют в 25 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты
и доводят объем раствора водой до 1000,0 мл. Раствор содержит 400 мкг
ионов Са в 1 мл.
Срок годности раствора - 1 мес, хранение при комнатной температуре.
Калий. 1,1440 г калия хлорида, высушенного до постоянной массы при температуре
130 °С, растворяют в небольшом количестве воды и доводят объем раствора
водой до 1000,0 мл. Раствор содержит 600 мкг ионов К в 1 мл.
Срок годности раствора - 2 мес, хранение при комнатной температуре.
Натрий. 0,5084 г натрия хлорида, высушенного до постоянной массы при
температуре 130 °С, растворяют в небольшом количестве воды и доводят объем
раствора водой до 1000,0 мл. Раствор содержит 200 мкг ионов Na в 1 мл.
Срок годности раствора 2 мес, хранение при комнатной температуре.
Цинк. 2,5 г гранулированного цинка растворяют в 20 мл 5 М раствора хлористоводородной
кислоты и доводят объем раствора водой до 500,0 мл. Раствор
содержит 5 мг ионов Zn в 1 мл.
Срок годности раствора - 2 мес, хранение при комнатной температуре.
Свинец. 0,1600 г свинца нитрата растворяют в 5 мл 32 % раствора азотной
кислоты и доводят объем раствора водой до 1000,0 мл. Раствор содержит 100 мкг
ионов РЬ в 1 мл.
Срок годности раствора 1 мес, хранение при комнатной температуре.
ШШ

Медь. 1,000 г меди электролитической растворяют в небольшом объеме 50 %
раствора азотной кислоты и доводят объем раствора 1 % азотной кислотой до
1000,0 мл. Раствор содержит 1 мг ионов Си в 1 мл.
Срок годности раствора - 1 мес, хранение при комнатной температуре.
Допускается использование других реактивов и эталонных растворов для
спектрального анализа, аттестованных компетентным уполномоченным органом.
Эталонные, а также приготовленные на их основе растворы сравнения хранят
в посуде, позволяющей сохранять концентрацию этих растворов неизменной
(например, в посуде из кварца, тефлона, чистого полиэтилена и т.п.). Чашки и
тигли для озоления проб должны быть изготовлены из кварца.
12.4. ФЛУОРИМЕТРИЯ (ОФС 42-0045-07)
Флуориметрия (или флуоресцентная спектрофотометрия) основана на измерении
флуоресценции - интенсивности флуоресцентного света, излучаемого испытуемым
образцом в возбужденном состоянии, которое было достигнуто
поглощением лучевой энергии в результате воздействия ультрафиолетового, видимого
или других видов электромагнитного излучения. Флуоресценция органических
соединений охватывает спектральную область от 250 до 800 нм, т.е.
области: УФ (частично), видимую и начало ближнего ИК.
Энергия молекул, поглотивших лучевую энергию и находящихся в возбужденном
состоянии, может высвобождаться в виде тепла или излучения при той
же или большей длине волны по сравнению с поглощаемым излучением. Поэтому
свет, излучаемый флуоресцентным раствором, имеет максимум интенсивности,
смещенный в более длинноволновую область по сравнению с
возбуждающим излучением, обычно на 20-30 нм.
Поскольку поглощение и испускание излучения осуществляется благодаря
переходу электронов между различными уровнями энергии или молекулярными
орбитами, между поглощением и испусканием света имеется задержка во времени.
Этот интервал (продолжительность возбужденного состояния) составляет
от 10~9 до 10~8 с для большей части флуоресцирующих растворов. Короткое время
жизни флуоресценции отличает этот тип люминесценции от фосфоресценции,
которая представляет собой долгоживущее свечение, имеющее время жизни от
103 с до нескольких мин.
Флуориметрия является более чувствительным методом анализа, чем абсорбционная
спектрофотометрия, и позволяет определять флуоресцирующие
вещества в растворах с концентрацией, которая составляет примерно от 1/10
до 1/100 от концентрации, используемой в абсорбционной спектрофотоме-
трии.
Интенсивность флуоресценции обозначается символом / и представляет
собой эмпирическое выражение флуоресцентной активности в условных единицах,
пропорциональных отклику детектора.
Флуоресцентный спектр испускания представляет собой графическое изображение
спектрального распределения излучения, испускаемого активирован-
шш

ным веществом, в координатах: интенсивность испускаемого излучения -
ордината, длина волны - абсцисса.
Флуоресцентный спектр возбуждения представляет собой графическое изображение
спектра активации в координатах: интенсивность испускаемого излучения
- ордината, длина волны активирующего излучения - абсцисса.
Приборы. Для проведения флуориметрического анализа используют приборы
двух типов: фильтрационный флуориметр и спектрофлуориметр.
Фильтрационный флуориметр состоит из источника излучения, первичного
фильтра, камеры для образца, вторичного фильтра и системы детектирования
флуоресценции. У большей части таких приборов детектор помещен под
углом 90° к возбуждающему лучу. Геометрия прямого угла позволяет возбуждающему
излучению пройти через испытуемый образец, не «загрязняя» произведенный
сигнал, передаваемый на детектор флуоресценции. Однако детектор
все-таки получает возбуждающее излучение, искаженное в результате рассеивающих
свойств самих растворов, а также из-за присутствия в растворе пыли
или других твердых частиц. Для устранения этого остаточного рассеяния используются
фильтры. Первичный фильтр отбирает коротковолновое излучение,
способное к возбуждению испытуемых образцов, вторичный фильтр пропускает
флуоресценцию в длинноволновой области, но блокирует рассеянное возбуждение.
Большинство флуориметров в качестве детекторов используют фотоумножители
разных типов. Каждый тип детектора имеет специальные характеристики
(спектральная область максимальной чувствительности, усиление, электрические
шумы). Фототок усиливается и регистрируется измерительным прибором
или самописцем.
Спектрофлуориметры отличаются от фильтрационных флуориметров тем,
что вместо фильтров используются монохроматоры типа призмы или решетки.
Для аналитических целей эти приборы более предпочтительны.
В спектрофлуориметрах монохроматоры снабжены щелями. Узкая щель дает
высокое разрешение и спектральную чистоту, широкая щель обеспечивает высокую
чувствительность. Выбор размера щели определяется разделением
между длинами волн возбуждения и испускания и необходимой чувствительностью.
Кюветы, используемые для измерения флуоресценции, представляют
собой кюветы цилиндрической формы или прямоугольные кюветы, отполированные
со всех четырех вертикальных сторон. Обычно объем испытуемых
образцов составляет 2-3 мл, но к некоторым приборам прилагаются кюветы
вместимостью от 100 до 300 мкл или капиллярные держатели для еще меньшего
объема.
Измерение флуоресценции. Практически флуоресценцию определяют в
растворах с концентрацией от 105 М и менее, когда между интенсивностью
флуоресценции и концентрацией вещества наблюдается прямолинейная зависимость.
При более высоких концентрациях значительная часть поступающего
света абсорбируется образцом вблизи поверхности кюветы, и
интенсивность света, достигающего центра, уменьшается. При этом образец

действует как «внутренний фильтр», в результате чего линейность
нарушается.
Все замеры интенсивности флуоресценции должны быть скорректированы с
растворителем.
Интенсивность флуоресценции в значительной степени зависит от длины
волны возбуждающего света, величины рН испытуемого раствора, температуры,
характера растворителей и присутствия в растворе посторонних частиц.
Твердые частицы, влияющие на флуоресценцию (могут поглощать некоторую
долю возбуждающей энергии, дезактивировать возбужденные молекулы или завышать
измеряемую величину из-за многократных отражений в кювете с образцом),
удаляют центрифугированием или фильтрованием. В последнем случае
следует учесть, что некоторые сорта фильтровальной бумаги содержат флуоресцирующие
примеси.
Для некоторых веществ эффективность флуоресценции может снизиться на
1-2 % при повышении температуры на градус. В таких случаях следует использовать
термостатированные кюветы с контролируемой температурой.
В рутинном анализе может оказаться достаточным сделать измерение быстро,
чтобы не произошло нагревания образца от источника облучения.
Флуоресцентные вещества чувствительны к свету. При выдержке во флуори-
метре они могут подвергаться фотораспаду с образованием других флуоресцирующих
продуктов. Такие эффекты обнаруживаются по отклику детектора в
зависимости от времени и могут быть снижены применением фильтров или
экрана после источника света.
Изменение растворителя может заметно повлиять на интенсивность и спектральное
распределение флуоресценции. Многие соединения, флуоресцирующие
в органических растворителях, фактически не флуоресцируют в воде,
поэтому для того, чтобы решить, является вещество флуоресцентным или нет,
надо исследовать его в различных растворителях.
Для многих органических растворителей интенсивность флуоресценции возрастает
при удалении растворенного кислорода, являющегося сильным гасителем
флуоресценции. Кислород может быть удален пропусканием инертного газа
(азот или гелий) через испытуемый образец.
Применение флуориметрии в фармацевтическом анализе
Идентификация. Характер спектра флуоресценции, а также цвет излучаемого
света специфичны для флуоресцирующих веществ. Поэтому флуоресценция
может быть применена для идентификации веществ.
Количественный анализ. При количественных определениях интенсивность
флуоресценции испытуемого образца сравнивают с интенсивностью флуоресценции
стандартного образца флуоресцирующего вещества известной концентрации,
измеренной в идентичных условиях на одном и том же приборе.
Методика. Растворяют испытуемый образец в растворителе или в смеси растворителей,
указанных в частной фармакопейной статье. Переносят раствор в
кювету флуориметра и освещают лучом возбуждающего света с длиной волны,
указанной в частной фармакопейной статье.
ear

Вначале в прибор помещают растворитель или смесь растворителей, используемых
для растворения вещества, и устанавливают прибор на «ноль». Затем
вводят стандартный раствор и устанавливают чувствительность прибора таким
образом, чтобы замер был больше 50. Если повторное доведение чувствительности
производится при изменении ширины щели, должна быть произведена
переустановка «нуля» и интенсивность флуоресценции стандартного образца
должна быть измерена вновь. Последним вводят раствор испытуемого образца
неизвестной концентрации и замеряют показания прибора.
Рассчитывают концентрацию вещества в испытуемом растворе (Сх) по формуле:
где: Сст - концентрация вещества в стандартном растворе;
/ х - интенсивность света, испускаемого испытуемым раствором;
/ ст - интенсивность света, испускаемого стандартным раствором.
Если интенсивность флуоресценции не прямо пропорциональна концентрации,
измерение может быть произведено с использованием калибровочной
кривой.
В некоторых случаях измерение может быть сделано относительно фиксированного
стандарта (например, флуоресцентного стекла или раствора другого
флуоресцентного вещества). В качестве стандартов могут быть использованы:
раствор известной концентрации хинина в 0,05 М растворе серной кислоты или
раствор флуоресцеина в 0,1 М растворе натрия гидроксида. В таких случаях концентрацию
испытуемого образца следует определять с использованием предварительно
полученной в тех же условиях калибровочной кривой.
12.5. СПЕКТРОСКОПИЯ ЯДЕРНОГО МАГНИТНОГО РЕЗОНАНСА
(ОФС 42-0046-07)
Вещества, ядра атомов которых имеют магнитные моменты, в постоянном
магнитном поле поглощают энергию электромагнитных волн (радиочастотный
диапазон) при определенном соотношении между величинами постоянного
магнитного поля и частотой переменного поля (ядерный магнитный
резонанс, ЯМР). Частота v0 = ю0/2я, при которой выполняется условие резонанса
со0 = у х в 0 (у - постоянная, носит название «гиромагнитное отношение
») называется резонансной частотой.
Магнитные моменты имеют изотопы ядер элементов с нечетным атомным
весом ('Н, ,3С, 15N, 31P, 19F). He имеют магнитных моментов ядра атомов с четным
зарядом и четным атомным весом (12С, 1 60).
Спектр ЯМР может быть получен двумя способами: или при непрерывном
облучении образца слабым электромагнитным полем с изменяющейся частотой,
в результате чего получается непосредственно спектр ЯМР (спектроскопия с
шв

непрерывным облучением), или при воздействии на образец короткого радиочастотного
импульса с последующим Фурье-преобразованием отклика, представляющего
собой сигнал свободной индукции, в спектр (импульсная
спектроскопия).
В молекулах положение энергетических уровней, переходы между которыми
образуют спектр ЯМР, определяется величиной взаимодействия магнитных моментов
ядер с постоянным магнитным полем Влок и с магнитными моментами
других ядер через посредство электронов молекулы (спин-спиновое взаимодействие).
Электроны атомов уменьшают величину внешнего магнитного поля В0 в
месте нахождения ядра: 5Л0К = В0 х ( 1 - а), а>0, константа экранирования - безразмерная
величина. Разница в резонансных частотах сигналов, равная разнице
в константах экранирования ядер, называется химическим сдвигом сигналов
(обозначается символом 8, измеряется в миллионных долях, м.д.). Спин-спиновое
взаимодействие, характеризуемое константой спин-спинового взаимодействия
(обозначается символом J, измеряется в герцах), приводит к образованию
мулътиплетов. Значения 8 и / н е зависят от величины постоянного магнитного
поля. Количество компонент в мультиплетах определяется спином ядра и количеством
взаимодействующих ядер.
Диапазон химических сдвигов сигналов ядер водорода не превосходит 20 м.д.
Диапазон химических сдвигов сигналов других ядер измеряется сотнями м.д.
Ширина сигналов ЯМР (разница между частотами на полувысоте сигнала)
веществ в растворах определяется временем поперечной релаксации Т2, характеризующим
время установления равновесия в системе спинов, а также неоднородностью
магнитного поля. Определяемая этими величинами ширина
сигналов ядер со спином Уг обычно не превосходит 1 Гц. Уширение сигналов
происходит в результате обменных процессов или присутствием в молекуле ядер
СО СПИНОМ боЛЬШИМ Уг.
Интенсивность сигнала ЯМР в спектре определяется избытком количества
ядер на нижнем энергетическом уровне. Отношение количества ядер N~ и N+
соответственно на верхнем и нижнем энергетических уровнях определяется фактором
Больцмана: NVN+ = exp(-J«^S0//A:7), где: к - постоянная Больцмана, jun -
магнитный момент ядра, Т - абсолютная температура, / - спин ядра
(при этом UnBgll« кТ). Очень небольшая разница в энергиях между возбужденным
и основным состоянием ядер является основной причиной сравнительно
низкой чувствительности метода ЯМР. Уменьшение интенсивности сигналов
также связано со сравнительно большим временем нахождения системы ядер в
возбужденном состоянии и большим временем релаксации (постоянная, характеризующая
время релаксации обозначается символом Т{).
Из ядер с естественным содержанием изотопов наиболее интенсивные сигналы
дают ядра водорода. Частота, на которой выполняются условия резонанса
для ядер водорода, называется рабочей частотой ЯМР спектрометра. Спектроскопия
ЯМР на ядрах водорода и углерода 13С (естественное содержание
1,1 %) наиболее часто используется в исследовании органических лекарственных
веществ.

Широкополосные импульсные ЯМР-спектрометры позволяют получать спектры
практически от всех элементов периодической системы.
Прибор. ЯМР-спектрометр для спектроскопии с непрерывным облучением
состоит из магнита, генератора изменяющейся частоты, датчика, генератора радиочастоты
и приемника, а также электронного интегратора и самопишущего
потенциометра. Импульсные спектрометры, кроме того, имеют генератор импульсов
и компьютер для преобразования интерферограммы отклика в спектр.
Рабочая частота спектрометра не должна быть меньше 60 МГц.
Если в частной фармакопейной статье не оговорено, то необходимо соблюдать
следующие условия:
1) Разрешение должно быть 0,5 Гц или менее.
2) Амплитуда боковых сигналов, появляющихся при вращении образца, не
должна превышать 2 % от основного сигнала.
3) При количественных измерениях с использованием интегралов сигналов
ни одно из пяти измерений не должно превосходить 2,5 % от среднего значения.
4) Разрешение и отношение сигнал/шум следует измерять, используя соответствующие
команды в пакете стандартных программ.
Метод. Растворенное вещество должно быть подписано и отфильтровано;
раствор должен быть прозрачным. Перед регистрацией спектра фаза сигнала
должна быть отрегулирована по возможности на поглощение.
Для растворов в органических растворителях химический сдвиг в спектрах
'Н и 13С измеряется относительно сигнала тетраметилсилана (ТМС), положение
которого принято за 0 м.д. Отсчет химических сдвигов ведется в сторону
слабого поля (влево) от сигнала тетраметилсилана (8 - шкала химических
сдвигов). Для водных растворов в качестве эталона в спектрах
ЯМР 'Н используется 2,2-диметил-2-силапентан-5-сульфонат натрия (ДСС),
химический сдвиг протонов метильной группы которого равен 0,015 м.д. Для
спектров 13С водных растворов в качестве эталона используют диоксан (ДО),
химический сдвиг которого равен 67,4 м.д.
В качестве растворителей используют легкоподвижные жидкости, в которых
для уменьшения интенсивности сигналов растворителей атомы водорода заменены
атомами дейтерия. При описании спектров необходимо указывать растворитель,
в котором растворено вещество, и его концентрацию.
Химические сдвиги (м.д.) сигналов остаточных протонов растворителей
имеют следующие значения: хлороформ - 7,26; бензол - 7,16; вода - 4,7; метанол
- 3,35 и 4,8; диметилсульфоксид - 2,50; ацетон - 2,05; положение сигнала
воды и протонов гидроксильных групп спиртов зависит от рН среды и
температуры.
Для того чтобы избежать уширения сигналов при использовании смешанных
растворителей, перед получением спектров необходимо выждать время для гомогенизации
смеси растворителей, которое может составлять часы.
Для спектроскопии с непрерывным облучением амплитуда переменной частоты
не должна быть большой, чтобы избежать насыщения сигнала. Наиболее
интенсивный сигнал должен занимать почти всю ширину бланка. Кривая интеграла
записывается поверх сигналов спектра.

В импульсных спектрометрах устанавливают следующие параметры: ширина
спектра, время регистрации сигнала, длительность радиочастотного импульса,
количество точек для Фурье-преобразования (спектральное разрешение) и количество
накоплений сигнала свободной индукции.
Имеется ряд методик получения сигналов ЯМР, которые могут быть использованы
при решении аналитических задач. В основе каждой из них используется
определенная последовательность импульсов. Методики принято
обозначать несколькими заглавными буквами латинского алфавита. Например,
используемая часто методика COSY является сокращением словосочетания correlation
spectroscopy. Обычные (одномерные) спектры получают воздействием на
вещество одним радиочастотным импульсом, при завершении которого проводится
считывание сигнала (свободная индукция) от ядер образца с последующим
преобразованием сигнала свободной индукции в спектр
(Фурье-преобразование).
Для слабых сигналов цикл возбуждение - считывание с накоплением сигнала
повторяется многократно, чем достигается необходимое для анализа отношение
сигнал/шум. Для количественных измерений цикл возбуждение - считывание
повторяется через интервал времени, превышающим время релаксации Т1 в несколько
раз. Для измерения времени Т] следует использовать программу в пакете
стандартных программ, прилагаемых к ЯМР-спектрометрам.
Наряду с одномерными в аналитических целях используются двумерные корреляционные
спектры, получаемые методиками COSY (для ядер одного вида),
HETCOR (для разных ядер) и др. В двумерных спектрах взаимодействие между
ядрами проявляется в виде сигналов (перенос когерентности), называемых
кросс-пиками. Положение кросс-пиков определяется значениями химических
сдвигов двух взаимодействующих ядер.
Двумерные спектры предпочтительно использовать для определения состава
сложных смесей и экстрактов, т.к. вероятность наложения сигналов (кросс-
пиков) в двумерных спектрах существенно ниже, чем вероятность наложения
сигналов в одномерных спектрах.
Для быстрого получения спектров гетероядер (,3C,15N и др.) применяются
методики (HSQC, НМВС), которые позволяют получать на ядрах 'Н спектры
других ядер, используя механизмы гетероядерного взаимодействия.
Методика DOSY позволяет получать спектры индивидуальных соединений
(спектральное разделение) в смеси без их физического разделения. Методика
основана на различии в скоростях диффузии различных молекул.
Области применения. Многообразие структурной и аналитической информации,
содержащейся в спектрах ЯМР, позволяет использовать метод ЯМР
для установления подлинности и количественных определений.
1. Установление подлинности вещества. В спектрах ЯМР практически исключается
совпадение даже нескольких сигналов от разных веществ. При заявлении
спектра на подлинность желательно ограничиваться по возможности
меньшим количеством сигналов. При описании спектров необходимо приводить
значения химических сдвигов и мультиплетность сигналов, заявленных
на подлинность. Следует указывать рабочую частоту спектрометра, т.к. от нее

зависит вид спектра. По этой же причине не использовать формулировку
«.. .такой же вид, как и на приведенном (в НД) спектре».
Для установления подлинности смеси веществ (экстрактов) эффективна двумерная
ЯМР-спектроскопия. При описании двумерных спектров (фрагментов
спектра), заявленных на подлинность, следует приводить значения кросс-
пиков.
2. Определение количества посторонних примесей. При получении спектров
ЯМР, как правило, легко достигается значение отношения сигнал/шум более
100, что позволяет использовать этот метод для определения в субстанции примеси
в количествах, измеряемых процентами и долями процента.
3. Определение количества остаточных растворителей. Все растворители,
содержащие атомы водорода и углерода, дают характерные сигналы в спектрах
'Н и 13С ЯМР. Чувствительность метода ЯМР к сигналам растворителя
весьма высокая.
4. Количественное определение относительного или абсолютного содержания
лекарственного вещества (примеси). Содержание вещества (X %) определяется
методом внутреннего стандарта, в качестве которого выбирается
вещество, сигналы которого находятся вблизи сигналов анализируемого вещества,
не перекрываясь с ними. Интенсивности сигналов анализируемого вещества
и стандарта не должны существенно различаться. При выборе
вещества-стандарта следует отдавать предпочтение не гигроскопичному, не
образующему кристаллосольватов веществу.
К испытуемому образцу добавляют вещество-стандарт, проводят измерение
площадей сигналов анализируемого вещества и вещества-стандарта. Вычисляют
процентное содержание анализируемого вещества в испытуемом образце
в пересчете на абсолютно сухое вещество (X %) по формуле:
Х% масс = ЮО х (S'a/S'CT) х (Ма х mJMc, х Ота) х (100/(100 - Щ,
где: 5" - приведенное значение интегральной интенсивности сигнала, равное
измеренной интегральной интенсивности, деленной на количество
протонов в структурном фрагменте (для СН2 - измеренная площадь, деленная
на 2, для СН3 - деленная на 3 и т.д.);
Ма - молекулярная масса анализируемого вещества;
МСТ - молекулярная масса стандарта;
та - навеска испытуемого образца;
тс т - навеска вещества-стандарта;
W - содержание влаги, в процентах.
ШЕк

циклами импульсных последовательностей должен превосходить в несколько
раз время релаксации Tj веществ-стандартов.
Мольная (Хмопь) и весовая (Хмасс) доля компонента i в смеси п веществ определяется
по формулам:
M.S'.
У=1
^моль(%)=^мольх100 И ^,Масс(%)=Л,асС
хЮ0.
13. ОСМОЛЯРНОСТЬ (ОФС 42-0047-07)
Осмолярность характеризует создаваемое растворами осмотическое давление
и является одной из важнейших характеристик инфузионных растворов. Растворы,
равные по осмолярности 0,9 % раствору натрия хлорида, называют
изотоническими. Для изотонических растворов теоретически рассчитанные значения
осмолярности находятся в пределах 239-376 мОсм/л.
На этикетках растворов для инфузий должно быть указано теоретическое значение
их осмолярности. В случае, когда теоретическая осмолярность не может
быть рассчитана, указывают среднее значение экспериментально определенной
осмолярности для данного лекарственного средства. Полученные данные носят
информационный характер и не являются показателем качества лекарственного
средства.
Осмолярность - это характеристика растворов, выражающая их осмотическое
давление через суммарную концентрацию кинетически активных частиц в
единице объема раствора.
Кинетически активные частицы - это молекулы, ионы или ионные комплексы
одного или нескольких растворенных веществ, свободно распределенные во
всем объеме растворителя и обладающие способностью к хаотическому перемещению
внутри раствора.
Теоретическая осмолярность может быть рассчитана по формуле:
т
С0см.= х„хЮ00, (1)
м
где: Сосм - осмолярность раствора, миллиосмоль на литр (мОсм/л);
т - содержание вещества в растворе, г/л;
М- молярная масса вещества;
п - суммарное число ионов, образующихся из одной молекулы растворенного
вещества в результате диссоциации (п = 1 для недиссоциирую-
щих веществ; п = 2, 3 для веществ, образующих при растворении
соответствующее количество ионов).

На практике количество частиц (п) несколько меньше теоретически рассчитанного
и приближенно может быть описано формулой:
п = п0х <р , (2)
где: п - реальное количество частиц, образующихся при растворении данного
вещества;
п0 - теоретически рассчитанное количество частиц (и = 1, 2, 3...);
(р - молярный осмотический коэффициент, учитывающий взаимодействие
между частицами в растворе и зависящий только от количества растворенного
вещества.
Коэффициент (р определяется экспериментально. Для многокомпонентных растворов
его определение крайне затруднительно.
Осмолярность растворов, состоящих из нескольких компонентов, может быть
определена как сумма осмолярностей всех компонентов.
Существующие инструментальные методы позволяют определить не осмолярность,
а осмоляльность - концентрацию кинетически активных частиц на
килограмм растворителя (мОсм/кг).
В отечественной практике принято выражать концентрацию инфузионных растворов
как массо-объемную (в г/л), поэтому удобным представляется контролировать
содержание кинетически активных частиц в миллиосмолях на литр
(осмолярность), а не на килограмм (осмоляльность) раствора.
Различиями между значениями осмолярности и осмоляльности растворов с
осмолярностью, близкой к осмолярности 0,7-1,1 % раствора натрия хлорида
или ниже, можно пренебречь (теоретическое значение осмотического давления
0,9 % раствора натрия хлорида - 308 мОсм/л; экспериментальное значение -
286 мОсм/л); для более концентрированных растворов (например, 10 % раствора
натрия хлорида) осмолярность может быть определена по формуле:
С(мОсм/л) = С(мОсм/кг) х р , (3)
где р - плотность раствора, кг/л.
Примечания
1. Расчет теоретических границ осмолярности проводится следующим образом:
минимальное значение - осмолярность раствора, содержащего минимально
допустимые по НД количества ингредиентов; максимальное значение - осмолярность
раствора, содержащего максимально допустимые количества ингредиентов.
2. При наличии в растворе высокомолекулярного вещества за его молярную
массу берется средняя молекулярная масса фракции.
3. Гидрокарбонаты при расчете осмолярности учитываются как соли одноосновной
кислоты.
Ш1

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСМОЛЯРНОСТИ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ
(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОСМОЛЯРНОСТЬ)
Для практического определения осмолярности могут быть использованы три
метода: криоскопический, мембранная и паровая осмометрия.
1 осмоль на килограмм воды понижает точку замерзания на 1,86 °С и понижает
давление пара на 0,3 мм рт. ст. при температуре 25 °С. Измерение этих изменений
лежит в основе криоскопического метода и метода паровой
осмометрии.
1. Криоскопический метод
Метод основан на понижении точки замерзания растворов по сравнению с
точкой замерзания чистого растворителя. Данный метод нашел самое широкое
практическое применение как достаточно универсальный и точный.
1. Определение осмолярности с использованием термометра Бекмана.
Определение температуры замерзания проводят на установке, изображенной
на рис. 13.1. Установка состоит из сосуда А диаметром 30-35 мм и длиной
около 200 мм, куда помещается испытуемый раствор (или растворитель);
верхняя часть сосуда расширена и закрывается пробкой с двумя отверстиями
для погружения термометра Б и мешалки В; сосуд А вставлен в более широкую
емкость (Г) так, что не касается ее стенок или дна; термометр также не
должен касаться стенок или дна сосуда А; уровень охлаждающей смеси в емкости
Г должен быть не ниже уровня испытуемого раствора в сосуде А. При
проведении эксперимента раствор (или растворитель) должен
Рис. 13.1. Устройство прибора Бекмана
А - сосуд для испытуемого раствора;
Б - термометр Бекмана;
В - мешалка;
Г - емкость с охлаждающей смесью;
Д - термометр для измерения температуры охлаждающей смеси
прикрывать основной ртутный резервуар термометра. Температура охлаждающей
смеси должна быть на 3-5 °С ниже температуры замерзания растворителя
Ни

(для бидистиллированной воды: от минус 3 до минус 5 °С); контроль минусовой
температуры осуществляется минусовым термометром Д с ценой деления
0,5 °С. Состав охладительной смеси: лед + натрия хлорид кристаллический.
Установку термометра Бекмана на криометрические исследования производят
путем подбора количества ртути в основном резервуаре так, чтобы при
замерзании чистого растворителя (бидистиллированной воды) мениск ртути
в капилляре находился у верхней части шкалы измерения. При этом возможна
регистрация ожидаемого понижения температуры замерзания водного
раствора.
Методика. Для определения температуры замерзания чистого растворителя
пользуются следующим приемом: дают жидкости переохладиться (охлаждают
без перемешивания), и когда термометр показывает температуру
на 0,2-0,3 °С ниже ожидаемой точки замерзания, перемешиванием вызывают
выпадение кристаллов растворителя; при этом жидкость нагревается
до точки замерзания. Максимальную температуру (средний результат трех
измерений, отличающихся не более чем на 0,01 °С), которую показывает
термометр после начала выпадения кристаллов, регистрируют как температуру
замерзания растворителя (Т{).
В высушенный сосуд А наливают достаточное количество испытуемого
водного раствора; определение точки замерзания проводят, как описано
выше для чистого растворителя; средний результат трех опытов регистрируют
как температуру замерзания испытуемого раствора лекарственного вещества
(Г2).
Осмолярность раствора рассчитывают по формуле:
(т2 - то
Сосм. = х100° (мОсм/кг), (4)
К
где: Т2 - температура замерзания чистого растворителя, градусы Цельсия;
Г] - температура замерзания испытуемого раствора, градусы Цельсия (°С);
К - криометрическая постоянная растворителя (для воды: 1,86).
2. Определение осмолярности растворов с использованием автоматического
криоскопического осмометра. Данный вариант предусматривает применение
автоматических осмометров, например, МТ-2, МТ-4 (производитель НПП
«Буревестник», Санкт-Петербург). Испытуемый раствор (обычно 0,2 мл) помещают
в стеклянный сосуд, погруженный в ванну с контролируемой температурой.
Термопару и вибратор помещают под испытуемым раствором; температуру
в ванной снижают до переохлаждения раствора. Включают вибратор и вызывают
кристаллизацию воды в испытуемом растворе; выделившееся тепло поднимает
температуру раствора до точки замерзания. По зафиксированной точке
замерзания раствора рассчитывают осмолярность. Прибор калибруют с помощью
стандартных растворов натрия или калия хлорида, которые перекрывают
определяемый диапазон осмолярности (табл. 13.1).
6. Зак. 2768 СО

Таблица 13.1 Стандартные справочные значения понижения температуры
замерзания и эффективности осмотической концентрации водных
растворов хлоридов натрия и калия
Аналитическая
концентрация соли
р, г/кг Н20
Понижение температуры
замерзания
*тзам,к
Эффективная (осмотическая)
концентрация
тэф, ммоль/кг Н20
Растворы натрия хлорида ~
5,649
6,290
9,188
9,511
11,13
12,75
16,00
0,3348
0,3720
0,5394
0,5580
0,6510
0,7440
0,930
180 ' ~~
200
290
300
350
400
500
Растворы калия хлорида
7,253
8,081
11,83
12,25
14,78
20,71
0,3348
0,3720
0,5394
0,5580
0,6696
0,930
180
200
290
300
360
500
2. Метод мембранной осмометрии
Метод основан на использовании свойств полупроницаемых мембран избирательно
пропускать молекулы веществ.
Движущей силой процесса является процесс осмоса. Растворитель проникает
в испытуемый раствор до установления равновесия; возникающее при этом дополнительное
гидростатическое давление приближенно равно осмотическому
давлению и может быть рассчитано по формуле:
ТС, осм. гидр. = / ) Ч хМ, (5)
где: 7госм - осмотическое давление;
Ргидр - гидростатическое давление;
р - плотность жидкости;
g - ускорение свободного падения;
Ah - высота столба жидкости.

Осмолярность может быть рассчитана по формуле:
Сосм. ~~ ^осм. I R*T, (6)
где: R - универсальная газовая постоянная (8,314 Дж/мольК);
Т- абсолютная температура, Кельвин.
Примечание. Данный метод применим только для растворов высокомолекулярных
веществ (104-106 г/моль). При анализе растворов, содержащих электролиты
и другие низкомолекулярные вещества, будет определяться только
осмотическое давление, создаваемое высокомолекулярными компонентами раствора.
Методика. Испытуемый раствор с помощью шприца (рис. 13.2) с длинной
иглой вносят в специальное отверстие измерительной ячейки. Калибровку проводят
с помощью устройства, находящегося в приборе. Проводят не менее трех
измерений. Для получения воспроизводимых результатов необходима проба
объемом не менее 1,2 мл.
Рис. 13.2. Устройство мембранного осмометра
1 - испытуемый раствор;
2 - магистраль подвода/удаления испытуемого раствора
(переключатель потоков установлен в положение «измерение»);
3 - мембрана;
4 - растворитель, подводимый по отдельной магистрали;
5 - термостатированные блоки;
6 - корпус ячейки;
7 - датчик давления.
3. Метод паровой осмометрии
Метод основан на измерении разности температур термисторами (чувствительными
к температуре сопротивлениями) вследствие различия между давлением
пара над раствором вещества и чистым растворителем. При нанесении на
оба термистора капли растворителя разность температур равна нулю. Если одну

из капель заменяют каплей испытуемого раствора, то на поверхности этого тер-
мистора происходит конденсация паров растворителя, так как давление пара растворителя
над этой поверхностью меньше. При этом температура капли
раствора повышается за счет экзотермического процесса конденсации до тех
пор, пока давление пара над каплей раствора и давление чистого растворителя
в ячейке не сравняются. Наблюдаемая разница температур измеряется. Разность
температур практически пропорциональна моляльной концентрации раствора.
Методика. В предварительно термостатированную при температуре не ниже
25 °С и насыщенную парами растворителя (воды) ячейку на оба термистора наносят
по капле воды (рис. 13.3).
Рис. 13.3. Устройство парового осмометра
1 - измерительный зонд;
2 - шприц;
3 - окна для контроля за состоянием ячейки
и термисторов (присутствуют не во всех моделях паровых осмометров);
4 - термисторы;
5 - измерительная ячейка;
6 - блоки для термостатирования.
Полученные показания прибора фиксируют. Далее проводят калибровку прибора
по эталонным растворам нескольких концентраций. Перед каждым измерением
один из термисторов промывают чистым растворителем и наносят каплю
раствора. Объемы наносимых капель раствора и чистого растворителя должны
быть одинаковы; объемы капель калибровочных растворов также должны быть
равны.
По результатам калибровки строится график зависимости разницы температур
от осмоляльности. Нулевая точка - показания прибора по чистому растворителю.
Далее проводят анализ испытуемых растворов. Осмоляльность находят
по калибровочному графику.

14. ИОНОМЕТРИЯ (ОФС 42-0048-07)
Метод ионометрии основан на определении активности (концентрации) определяемых
ионов с помощью ионоселективных электродов (ИСЭ). Ионоселек-
тивный электрод обладает избирательной чувствительностью к определенным
ионам, от содержания которых зависит его потенциал. В основу определения
положен принцип потенциометрического анализа, заключающийся в измерении
разности потенциалов (электродвижущей силы - ЭДС) измерительного (ионо-
селективного) электрода и электрода сравнения, потенциал которого постоянен.
Зависимость электродвижущей силы электродной системы от активности по-
тенциалопределяющего иона описывается уравнением Нернста:
R xT
Е = Ео + 2,303 z x F lga, (l)
где: Е - разность потенциалов между измерительным и вспомогательным
электродами (ЭДС), мВ;
Е0 - значение ЭДС электродной системы в начальной точке диапазона
измерений (стандартное значение ЭДС), мВ;
R - газовая постоянная;
Т - абсолютная температура;
F - число Фарадея;
z - заряд определяемого иона;
а - активность или эффективная концентрация свободных ионов в
растворе, связанная с концентрацией соотношением:
a = f x C , . (2)
где: С - молярная концентрация;
f - коэффициент активности.
Для очень разбавленных растворов коэффициент активности близок к единице
и активность ионов равна концентрации.
Если коэффициент активности поддерживается постоянным, уравнение Нернста
принимает вид:
Е = Е0 + * x l g f x c , (3)
где к = температурный коэффициент.
F
Температурный коэффициент к при любой температуре может быть рассчитан
по формуле:
к = 0,05916 + 0,000198 х (t - 25 °С) (4)
и приведен в табл. 14.1.

Таблица 14.1
Значения к при различных температурах
Температура, °С
15
20
25
30
35
к
0,0572 ~
0,0582
0,0592
0,0601
0,0611
Коэффициент активности (f) считается постоянным, если при измерениях во
всех анализируемых и калибровочных растворах поддерживается одинаковая
ионная сила. Для создания высокой ионной силы к раствору добавляют раствор
индифферентного электролита (фоновый раствор) с тем, чтобы различные количества
анализируемого иона не влияли на ионную силу раствора и коэффициент
активности определяемого иона оставался постоянным.
к к
ЕслиЕ = Е0 + - xlgf=E0 ' и S = - ,
Z Z
где S - крутизна электродной функции, то
E = E0' + SlgC = E o ' - S x p C , (5)
где рС = -lgC.
Таким образом, при постоянной ионной силе раствора и постоянной температуре
наблюдается линейная зависимость ЭДС электродной системы от концентрации
определяемого иона.
ИЗМЕРЕНИЕ АКТИВНОСТИ И КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ
Ионометрические измерения осуществляют с использованием иономера (вы-
сокоомного потенциометра с входным сопротивлением по крайней мере в 100
раз большим, чем сопротивление используемых электродов), который включает
в себя электродную систему и измерительный преобразователь.
В качестве ионселективных электродов могут использоваться электроды с
кристаллической или некристаллической мембраной или с твердой матрицей
(например, стеклянные электроды), электроды с заряженными (положительно
или отрицательно) или незаряженными подвижными носителями, сенсибилизированные
электроды (электроды с ферментативной подложкой, газ-индикаторные
электроды). Электродом сравнения служит, главным образом,
хлорсеребряный электрод или каломельный электрод с соответствующими индифферентными
соединительными жидкостями.
Прибор градуирован в милливольтах или в единицах рХ. Подготовка иономера
к работе и проведение измерений производятся согласно инструкциям, прилагаемым
к прибору. Измерения выполняют при постоянной температуре
± 0,5 °С и постоянной ионной силе раствора. Помещают электроды в испытуемый
раствор и снимают установившееся показание при медленном и постоянном
перемешивании.

При частых измерениях периодически проверяют стабильность отклика и линейность
калибровочной кривой в диапазоне концентраций испытуемого раствора.
В противном случае проверку проводят перед каждыми измерениями.
1. Метод градуировочного графика
Метод градуировочного графика заключается в построении графика зависимости
ЭДС электродной системы от концентрации стандартных растворов с известной
концентрацией и последующем нахождении концентрации испытуемого
раствора по измеренному в нем значению ЭДС электродной системы. Градуи-
ровочный (калибровочный) график строится микропроцессором измерительного
преобразователя автоматически на основе введенных в него значений ЭДС электродной
системы и соответствующих им значений рХ при калибровке иономера
в стандартных растворах (двух и более). Подбор концентраций стандартных растворов
должен соответствовать диапазону концентраций испытуемых растворов:
крайние значения концентраций испытуемых растворов должны находиться
внутри линейной области калибровочного графика. Значение рХ в испытуемом
растворе находится автоматически с использованием градуировочного графика
по измеренному значению ЭДС электродной системы (Е) - рис. 14.1.
Е
Е4
Е3
Е,
Е2
Ei
рХ4 рХ3 pXi pXi pXi рХ
Рис. 14.1. Градуировочный график зависимости ЭДС электродной
системы от концентрации потенциалопределяющего иона
Поскольку в разбавленных растворах рХ = _lgC, значение молярной концентрации
(моль/л) вычисляют по уравнению:
С = 1 0 - Р Х . (6)
Значение массовой концентрации иона (г/л) рассчитывают, исходя из
уравнения:
С = М Х Ю - Р Х , (7)
где М - молярная масса иона, г/моль.
При наличии влияния других компонентов испытуемого раствора на потенциал
ионоселективного электрода используют метод стандартных добавок.

2. Метод стандартных добавок
Метод применим в линейных областях калибровочной кривой.
2.1. Метод многократных добавок
В испытуемый раствор, приготовленный, как указано в частной фармакопейной
статье, вводят несколько (по крайней мере три) порций объемом VCT раствора
с известной концентрацией определяемого иона, соблюдая условие
неизменной ионной силы в растворе. Измеряют потенциал до и после каждой добавки
и вычисляют разность АЕ между измеренным потенциалом и потенциалом
испытуемого раствора. Полученная величина связана с концентрацией определяемого
иона уравнением:
Сет. х VCT
AE = S x l g ( l + ~ c T v )- <8)
или
Сст. х Vст.
10* = 1+ CxV (9)
где: V - объем испытуемого раствора;
С - молярная концентрация определяемого иона в испытуемом растворе;
VCT - добавленный объем стандартного раствора;
Сст - концентрация определяемого иона в стандартном растворе;
S - крутизна электродной функции, определяемая экспериментально при
постоянной температуре измерением разности потенциалов двух стандартных
растворов, концентрации которых отличаются в 10 раз и соответствуют
линейной области калибровочной кривой.
Строят график зависимости 10 ^ от объема добавки VCT и экстраполируют
полученную прямую до пересечения с осью X. В точке пересечения концентрация
испытуемого раствора определяемого иона выражается уравнением:
С х V
'-'СТ. "СТ.
с= — (Ю)
2.2. Метод однократной добавки
К объему V испытуемого раствора, приготовленного, как описано в частной
фармакопейной статье, прибавляют объем VCT стандартного раствора известной
концентрации Сст. Готовят холостой раствор в тех же условиях. Измеряют потенциалы
испытуемого раствора и холостого раствора до и после добавления
стандартного раствора. Вычисляют концентрацию С анализируемого иона, используя
следующее уравнение и делая необходимые поправки на холостой раствор:

10* x(V + VCT.)-V
где: V - объем испытуемого или холостого раствора;
С - концентрация определяемого иона в испытуемом растворе;
VCT - добавленный объем стандартного раствора;
Сст - концентрация определяемого иона в стандартном растворе;
АЕ - разность потенциалов, измеренных до и после добавки;
S - крутизна электродной функции, определяемая экспериментально
при постоянной температуре измерением разности потенциалов двух
стандартных растворов, концентрации которых отличаются в 10 раз и
соответствуют линейной области калибровочной кривой.
3. Потенциометрическое определение рН
Водородным показателем рН, характеризующим концентрацию ионов водорода
в водных растворах, называется отрицательный десятичный логарифм активности
ионов водорода
pH = - l g aH
+ . (12)
Потенциометрическое определение рН заключается в измерении ЭДС электродной
системы, где в качестве ионоселективного электрода используют чувствительный
к ионам водорода электрод (обычно стеклянный), в качестве
электрода сравнения — стандартный электрод с известной величиной потенциала
(насыщенный каломельный или хлорсеребряный электроды). На практике для
измерения рН применяют метод градуировочного графика. рН испытуемого раствора
связан с рН стандартного раствора следующим уравнением:
E - E s pH = pHs - , (13)
k
где: Е - потенциал электрода в испытуемом растворе;
Es - потенциал того же электрода в растворе с известным значением рН
(стандартном растворе).
Прибор. В качестве прибора для потенциометрического определения рН используют
иономеры или рН-метры с чувствительностью не менее 0,05 единиц
рН или 3 мВ. Калибровка приборов производится по стандартным буферным
растворам, приведенным в общей фармакопейной статье «Буферные растворы».
Методика. Все измерения проводят при одной и той же температуре в интервале
от 20 до 25 °С, если нет других указаний в частной статье. В табл. 14.2
приведена зависимость значений рН от температуры для различных стандартных
буферных растворов, используемых для калибровки прибора. Для приготовления
указанных растворов могут быть использованы фиксаналы по ГОСТ.

Таблица 14.2
рН стандартных буферных растворов при различных температурах
Температура,
°С
15
20
25
30
35
ДрЯ1
Л/
0,05 М
раствор
калия
тетраокса-
лата
1,67
1,68
1,68
1,68
1,69
+0,001
Насыщенный
при 25 'С
раствор
калня
гидротарт-
рата
3,56
3,55
3,55
-0,0014
0,05 М
раствор
калия
днгидро-
цитрата
3,80
3,79
3,78
3,77
3,76
-0,0022
0,05 М
раствор калия
гидрофталата
4,00
4,00
4,01
4,02
4,02
+0,0012
0,025 М
раствор
калия диги-
дрофосфата
и
0,025 М
раствор
натрия
гидрофосфата
6,90
6,88
6,87
6,85
6,84
-0,0028
0,0087 М
раствор
калия
днгидрофос-
фата
и
0,0303 М
раствор
натрия
гидрофосфата
7,45
7,43
7,41
7,40
7,39
-0,0028
0,01 М
раствор
натрия
тетрабората
9,28
9,23
9,18
9,14
9,10
-0,0082
0,025 М
раствор
натрия карбоната
и
0,025 М
раствор
натрия
гидрокарбоната
10,12
10,06
10,01
9,97
9,93
-0,0096
1 Изменение рН на градус Цельсия.
Если необходимо, учитывают температурные поправки в соответствии с инструкцией
предприятия-производителя. Прибор калибруют при помощи буферного
раствора калия гидрофталата (первичный стандарт) и одного из буферных
растворов с другим значением рН (предпочтительно одного из приведенных в
табл. 14.2). Показания прибора для третьего буферного раствора с промежуточным
значением рН не должны отличаться больше чем на 0,05 единиц рН от табличного
значения рН этого раствора. Электроды погружают в испытуемый
раствор и измеряют рН в тех же условиях, что и для буферных растворов.
Все испытуемые растворы и стандартные буферные растворы должны быть
приготовлены на воде, свободной от диоксида углерода, для чего ее необходимо
прокипятить перед употреблением. Вода, свободная от диоксида углерода,
должна иметь рН 5,8-7,0.
Приготовление стандартных буферных растворов
0,05 Мраствор калия тетраоксалата. 12,61 г КС4Н308 • 2Н20 растворяют в
воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000,0 мл.
Насыщенный при 25 °С раствор калия гидротартрата. Избыток КС4Н506
энергично встряхивают с водой при температуре 25 °С. Фильтруют или декантируют.
Раствор используют свежеприготовленным.
0,05 Мраствор калия дигидроцитрата. 11,41 г КС6Н707 растворяют в воде
и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000,0 мл. Раствор используют
свежеприготовленным.
0,05 Мраствор калия гидрофталата. 10,13 г КС8Н504, предварительно высушенного
при температуре от ПО до 135 °С до постоянной массы, растворяют
в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000,0 мл.
0,025 Мраствор калия дигидрофосфата и 0,025 Мраствор натрия гидрофосфата,
3,39 г КН2Р04 и 3,53 г Na2HP04, предварительно высушенных в течение
двух часов при температуре от ПО до 130 °С до постоянной массы,
растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000,0 мл.
0,0087 М раствор калия дигидрофосфата и 0,0303 М раствор натрия
БЕ

гидрофосфата. 1,18 г КН2Р04 и 4,30 г Na2HP04, предварительно высушенных
при температуре от 110 до 130 °С, растворяют в воде и доводят объем раствора
тем же растворителем до 1000,0 мл.
0,01Мраствор натрия тетрабората. 3,80 г Na2B407 • 10Н2О растворяют в
воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 1000,0 мл. Хранят, защищая
от диоксида углерода.
0,025 Мраствор натрия карбоната и 0,025 Мраствор натрия гидрокарбоната.
2,64 г Na2C03 и 2,09 г NaHC03 растворяют в воде и доводят объем раствора
тем же растворителем до 1000,0 мл.
При измерении рН в неводных и смешанных растворителях, а также в некоторых
коллоидных системах, следует иметь в виду, что полученные значения рН
являются условными.
В табл. 14.3 приведены термины, используемые для характеристики реакции
растворов в зависимости от рН, и цвет раствора при использовании некоторых
наиболее распространенных индикаторов.
Таблица 14.3
Реакция раствора, значение рН и цвет индикатора
Реакция раствора
Щелочная
Слабощелочная
Сильнощелочная
Нейтральная
Нейтральная
по метиловому
красному
Нейтральная
по фенолфталеину
Кислая
Слабокислая
Сильнокислая
Значение
рН
>8
8,0-10,0
>10
6,0-8,0
4,5-6,0
<8,0
<6
4,0-6,0
<4
Индикатор
Красная лакмусовая
бумага
Тимоловый синий
Фенолфталеин
Тимоловый синий
Фенолфталеиновая бумага
Тимоловый синий
Метиловый
красный
Феноловый красный
Метиловый красный
Фенолфталеин
Метиловый красный
Бромтимоловый синий
Метиловый красный
Бромкрезоловый
зеленый
Конго красного бумага
Цвет
Синий
Серый или фиолетово-
синий
От бесцветного
до розового
Серый
Красный
Фиолетово-синий
Желтый
Желтый или
розовый
Оранжево-красный
Бесцветный; розовый
или красный после прибавления
0,05 мл 0,1 М
раствора основания
Оранжевый или
красный
Желтый
Оранжевый
Зеленый или синий
Зеленый или синий

15. РАСТВОРИМОСТЬ (ОФС 42-0049-07)
В фармакопейном анализе понятие растворимости приводится в качестве характеристики
приблизительной растворимости лекарственного вещества при
температуре от 15 до 25 °С. Испытание следует проводить при фиксированном
значении температуры, обычно 20 ± 2 °С, если нет других указаний в частной
фармакопейной статье.
Если растворимость является показателем чистоты субстанции (что должно
быть указано в частной фармакопейной статье), то в разделе следует представлять
конкретные количественные соотношения субстанции и растворителей.
Рекомендуется использовать растворители разной полярности (обычно три);
не рекомендуется использование легкокипящих и легковоспламеняющихся (например,
диэтиловый эфир) или очень токсичных (например, бензол, метилен-
хлорид) растворителей.
В фармакопее растворимость вещества выражают в следующих терминах
(в пересчете на 1 г):
Таблица 15.1
Термин
Очень легко растворим
Легко растворим
Растворим
Умеренно растворим
Мало растворим
Очень мало растворим
Практически нерастворим
Примерное количество растворителя (мл),
необходимое для растворения 1 г вещества
до 1
от 1 до 10
от 10 до 30
от 30 до 100
от 100 до 1000
от 1000 до 10 000
10 000 и выше
Субстанцию считают растворившейся, если в растворе при наблюдении в проходящем
свете не обнаруживаются частицы вещества. В растворе могут содержаться
следовые количества физических примесей, таких как волокна
фильтровальной бумаги и других. Для субстанций, образующих при растворении
мутные растворы, соответствующее указание должно быть приведено в
частной фармакопейной статье.
Термин «смешивается с...» используется для характеристики жидкостей, смешивающихся
с указанным растворителем во всех соотношениях.
Если указано, что субстанция растворима в жирных маслах, то имеется в виду,
что она растворима в любом масле, относящемся к классу жирных масел.
Методика определения растворимости. К навеске растертой в тонкий порошок
субстанции прибавляют отмеренное количество растворителя и непрерывно
встряхивают в течение 10 мин при 20 ± 2 °С.
Для медленно растворимых препаратов, требующих для своего растворения

более 10 мин, допускается нагревание на водяной бане до 30 °С. Наблюдение
производят после охлаждения раствора до комнатной температуры и энергичного
встряхивания в течение 1 -2 мин.
Условия растворения медленно растворимых препаратов указывают в частных
фармакопейных статьях.
Для субстанций с неизвестной растворимостью испытание проводят по следующей
методике.
К 1,00 г растертой субстанции прибавляют 1,0 мл растворителя и проводят
растворение, как описано выше. Если субстанция полностью растворилась, она
очень легко растворима.
Если субстанция растворилась неполностью, к 100 мг растертой субстанции
прибавляют 1,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше.
Если субстанция полностью растворилась, она легко растворима.
Если субстанция растворилась неполностью, добавляют 2,0 мл растворителя
и продолжают растворение. Если субстанция полностью растворилась, она растворима.
Если субстанция растворилась неполностью, добавляют 7,0 мл растворителя
и продолжают растворение. Если субстанция полностью растворилась, она умеренно
растворима.
Если субстанция растворилась неполностью, к 10 мг растертой субстанции
прибавляют 10,0 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше.
Если субстанция полностью растворилась, она мало растворима.
Если субстанция растворилась неполностью, к 10 мг растертой субстанции
прибавляют 100 мл растворителя и проводят растворение, как описано выше.
Если субстанция полностью растворилась, она очень мало растворима.
Если субстанция не растворилась, она практически нерастворима в данном
растворителе.
Для субстанций с известной растворимостью испытание проводят по описанной
выше методике, но только для крайних значений, относящихся к указанному
термину. Например, если субстанция растворима, то 100 мг растертой
субстанции не должны растворяться в 1,0 мл растворителя, но должны раствориться
полностью в 3,0 мл растворителя.
16. СТЕПЕНЬ ОКРАСКИ ЖИДКОСТЕЙ (ОФС 42-0050-07)
Окраску жидкостей определяют визуально одним из методов, приведенных
ниже, путем сравнения с соответствующими эталонами. В статью включены методы
контроля качества лекарственных средств по показателям «цветность» и
«цветность раствора». Цветность является условно принятой количественной
характеристикой для жидкостей, имеющих незначительную окраску.
Цвет - это восприятие или субъективная реакция наблюдателя на объективный
раздражитель в виде энергии, излучаемой в видимой части спектра и охватывающей
диапазон длин волн от 400 до 700 нм. Окраска двух растворов
совпадает (при определенном источнике света), если их спектры поглощения и
отражения идентичны и наблюдатель не замечает разницы между ними.
шя

Ахроматизм или отсутствие окраски означает отсутствие у испытуемого раствора
абсорбции в видимой области спектра.
Для визуальной оценки окраски жидкостей в зависимости от интенсивности
в области коричневых, желтых и красных цветов используют один из двух методов,
описанных в статье. Бесцветными считаются жидкости, если их окраска
не отличается от воды (в случае растворов - от соответствующего растворителя)
или выдерживают сравнение с эталоном В9, т.е. должны быть окрашены не более
интенсивно, чем эталон В9.
Метод 1
Испытания проводят в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного,
нейтрального стекла с внутренним диаметром около 12 мм, используя равные
объемы - 2,0 мл испытуемой жидкости и воды, или растворителя, или эталона
сравнения, описанного в статье. Сравнивают окраску в дневном отраженном
свете, горизонтально (перпендикулярно оси пробирок) на матово-белом фоне
(эталоны 1-3).
Метод 2
Испытания проводят в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного,
нейтрального стекла с внутренним диаметром от 15 до 25 мм, используя равные
слои высотой 40 мм испытуемой жидкости и воды, или растворителя, или эталона
сравнения, описанного в статье. Сравнивают окраску в дневном отраженном
свете сверху вдоль вертикальной оси пробирок на матово-белом фоне
(эталоны 4-9).
Приготовление исходных растворов
Желтый раствор. 46 г (точная навеска) железа(Ш) хлорида (FeCl3
х 6 Н20;
М.м. 270,30) растворяют в 900 мл смеси, приготовленной из 25 мл концентрированной
хлористоводородной кислоты и 975 мл воды, в мерной колбе вместимостью
1000 мл, перемешивают и доводят объем раствора в колбе этой же
смесью до метки. Определяют количественное содержание железа хлорида в
1 мл раствора. Объем раствора железа хлорида разбавляют этой же смесью
таким образом, чтобы содержание железа хлорида в 1 мл составляло 45,0 мг.
Раствор хранят в защищенном от света месте.
Количественное определение: 10,0 мл раствора железа хлорида помещают в
коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл, прибавляют 15 мл
воды, 5 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 4 г калия йодида,
перемешивают, закрывают пробкой и оставляют на 15 мин в темном месте, затем
прибавляют 100 мл воды. Титруют выделившийся йод раствором 0,1 М натрия
тиосульфата, прибавляя 0,5 мл раствора крахмала в конце титрования в качестве
индикатора.
1 мл 0,1 М раствора натрия тиосульфата соответствует 27,03 мг железа(Ш)
хлорида (FeCl3
х 6 Н20).
Красный раствор. 60 г (точная навеска) растертого кобальта(П) хлорида
(СоС12
х 6 Н20; М.м. 237,93) растворяют в 900 мл смеси, приготовленной из
ЕЖ

25 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и 975 мл воды, в мерной
колбе вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора в колбе этой же
смесью до метки. Определяют количественное содержание кобальта хлорида в 1
мл раствора. Объем раствора кобальта хлорида разбавляют этой же смесью таким
образом, чтобы содержание кобальта хлорида в 1 мл раствора составляло 59,5 мг.
Количественное определение. 5,0 мл раствора кобальта хлорида помещают в
коническую колбу с притертой стеклянной пробкой вместимостью 250 мл, прибавляют
5 мл 3 % раствора перекиси водорода и 30 мл 10 % раствора натрия ги-
дроксида. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин, затем
охлаждают до комнатной температуры и прибавляют 60 мл 1 М раствора серной
кислоты и 2 г калия йодида. Закрывают колбу и растворяют осадок, осторожно
помешивая. Выделившийся йод титруют 0,1 М раствором натрия тиосульфата до
бледно-розового окрашивания, используя в качестве индикатора 0,5 мл раствора
крахмала в конце титрования.
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора натрия тиосульфата соответствует 23,79 мг кобальта (II)
хлорида (СоС12
х 6 Н20).
Голубой раствор. 63 г (точная навеска) меди(П) сульфата (CuS04
Х 5 Н20;
М.м. 249,68) растворяют в 900 мл смеси, приготовленной из 25 мл концентрированной
хлористоводородной кислоты и 975 мл воды, в мерной колбе вместимостью
1000 мл и доводят объем раствора в колбе этой же смесью до метки.
Определяют количественное содержание меди сульфата в 1 мл раствора. Объем
раствора меди сульфата разбавляют этой же смесью таким образом, чтобы содержание
меди сульфата в 1 мл раствора составляло 62,4 мг.
Количественное определение. 10,0 мл раствора меди сульфата помещают в коническую
колбу с притертой стеклянной пробкой вместимостью 250 мл, прибавляют
50 мл воды, 12 мл 2 М раствора уксусной кислоты и 3 г калия йодида.
Смесь перемешивают и выделившийся йод титруют ОД М раствором натрия
тиосульфата до бледно-коричневого окрашивания, используя 0,5 мл раствора
крахмала в качестве индикатора в конце титрования.
1 мл 0,1 М раствора натрия тиосульфата соответствует 24,97 мг меди(П) сульфата
(CuS04 х 5Н20).
Приготовленные исходные и стандартные растворы помещают в сухие
склянки с притертыми пробками и хранят при температуре (20±3) °С в защищенном
от попадания прямых солнечных лучей месте.
Срок годности исходных и стандартных растворов - 1 год.
При хранении исходных и стандартных растворов следует перед употреблением
убедиться в отсутствии в них мути, осадка и хлопьев. При наличии таковых
растворы заменяют свежеприготовленными.
Приготовление стандартных растворов
Стандартные растворы, получаемые смешением исходных растворов железа
хлорида, кобальта хлорида и меди сульфата с 1 % раствором хлористоводородной
кислоты, представлены в табл. 16.1.
ШЕЯ

Таблица 16.1
Стандартные растворы
Стандартные
растворы
В (коричневый)
BY (коричневато-желтый)
Y (желтый)
GY (зеленовато-желтый)
R (красный)
Желтый
исходный
раствор, мл
30
24
24
96
10
Красный
исходный
раствор, мл
30
10
6
2
20
Голубой
исходный
раствор, мл
24
4
0
2
0
1 % раствор хлористоводородной
кислоты, мл
16
62
70
0
70
Приготовление эталонов
Эталоны готовят из пяти стандартных растворов путем разбавления их
1 % раствором хлористоводородной кислоты.
Отмеривание исходных и стандартных растворов для приготовления шкал
производят при помощи калиброванной пипетки или бюретки с точностью
до 0,02 мл.
Эталоны для определения степени окраски жидкостей по методу I хранят в
ампулах из бесцветного прозрачного нейтрального стекла с наружным диаметром
12 мм, в защищенном от света месте в течение 1 года.
Эталоны, используемые для определения степени окраски жидкостей по методу
II, готовят из соответствующих стандартных растворов непосредственно
перед использованием.
Количества компонентов для приготовления эталонов цветности приведены в
табл.16.2-16.6.
Таблица 16.2
Эталоны коричневых оттенков (шкала В)
Эталоны шкалы В
Bi
в2
В3
в4
в5
_ в6
в7
в8
в9
Стандартный
раствор В, мл
75,0
50,0
37,5
25,0
12,5
5,0
2,5
1,5
1,0
1 % раствор хлористоводородной
кислоты, мл
25,0
50,0
62,5
75,0
87,5
95,0
97,5
98,5
99,0

Таблица 16.3
Эталоны коричневато-желтых оттенков (шкала BY)
Эталоны шкалы BY
BY,
BY2
BY3
BY4
BY5
BY6
BY7
Стандартный
раствор BY, мл
100,0
75,0
50,0
25,0
12,5
5,0
2,5
1 % раствор хлористоводородной
кислоты, мл
0,0
25,0
50,0
75,0
87,5
95,0
97,5
Таблица 16.4
Эталоны желтых оттенков (шкала Y)
Эталоны шкалы Y
Yi
Y2
Y3
Y4
Y5
Y6
Y7
Стандартный
раствор Y, мл
100,0
75,0
50,0
25,0
12,5
5,0
2,5
1 % раствор хлористоводородной
кислоты, мл
0,0
25,0
50,0
75,0
87,5
95,0
97,5
Таблица 16.5
Эталоны зеленовато-желтых оттенков (шкала GY)
Эталоны шкалы GY
GY!
GY2
GY3
GY4
GY5
GY6
GY7
Стандартный
раствор GY, мл
25,0
15,0
8,5
5,0
3,0
1,5
0,75
1 % раствор хлористоводородной
кислоты, мл
75,0
85,0
91,5
95,0
97,0
98,5
99,25
—-— —ка '¦ Зак. 2768

Таблица 16.6
Эталоны красных оттенков (шкала R)
Эталоны шкалы R
Ri
R2
R3
R4
R5
Re
R7
Стандартный
раствор R, мл
100,0
75,0
50,0
37,5
25,0
12,5
5,0
1 % раствор хлористоводородной
кислоты, мл
0,0
25,0
50,0
62,5
75,0
87,5
95,0
Сравнение степени окраски жидкости с эталонами (В, BY, Y, GY, R ) ^ обычно
проводят по методу I; в случае использования эталонов В4_с>> (BY, Y, GY, R)4_7
применяют метод П.
Степень окраски испытуемого раствора не должна превышать степень окраски
соответствующего эталона. Цвет испытуемого образца должен быть максимально
приближен к цвету соответствующего эталона.
При сравнении окраски испытуемого раствора с эталонами указывают, кроме
номера эталона, букву шкалы. Например, окраска раствора не должна превышать
эталон В7.
При необходимости могут быть использованы другие эталоны, приготовленные
путем смешения стандартных растворов разных цветовых шкал с точным
указанием их объемов для достижения нужной окраски, приближенной к окраске
испытуемого раствора, если это предусмотрено частной статьей.
Для оценки окраски жидкостей возможно использование спектрофотометри-
ческого метода, при этом должны быть указаны: длина волны, при которой наблюдается
максимум поглощения в видимой области спектра, толщина кюветы
и значение оптической плотности с допустимыми отклонениями, если это предусмотрено
частной фармакопейной статьей.
17. ПРОЗРАЧНОСТЬ И СТЕПЕНЬ МУТНОСТИ ЖИДКОСТЕЙ
(ОФС 42-0051-07)
Прозрачность и степень мутности жидкостей определяют путем сравнения
испытуемой жидкости с растворителем или эталонами визуально или инструментальным
методом.
Испытание проводят в пробирках с притертой пробкой из прозрачного бесцветного
стекла с внутренним диаметром около 15 мм. Для сравнения берут
ЕЯ

равные объемы эталона и испытуемой жидкости (5 или 10 мл). Испытание проводят
при освещении электрической лампой матового стекла мощностью
40 Вт, расположенной над образцом, просматривая растворы перпендикулярно
вертикальной оси пробирок на черном фоне через 5 мин после приготовления
эталона.
Испытуемую жидкость считают прозрачной, если она по прозрачности не
отличается от воды или растворителя, используемого при приготовлении испытуемой
жидкости, или выдерживает сравнение с эталоном I, т.е. ее опалес-
ценция (мутность) не превышает опалесценцию (мутность) эталона I при
просмотре в описанных выше условиях.
Эталонами служат взвеси из гидразина сульфата и гексаметилентетрамина.
Приготовление раствора гидразина сульфата. 0,50 г гидразина сульфата
помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл воды, доводят
объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор выдерживают
в течение 4-6 ч.
Приготовление раствора гексаметилентетрамина. 3,00 г гексаметилентетрамина
растворяют в 30,0 мл воды.
Приготовление исходного эталона. К 25,0 мл раствора гидразина сульфата
прибавляют 25,0 мл раствора гексаметилентетрамина, перемешивают и оставляют
на 24 ч.
Исходный эталон стабилен в течение 2 мес. при хранении в стеклянной посуде,
не имеющей дефектов поверхности (взвесь не должна прилипать к стеклу),
с притертой пробкой.
Приготовление основного эталона. 15,0 мл исходного эталона помещают
в мерную колбу вместимостью 1 л, доводят объем жидкости водой до метки и
перемешивают.
Срок годности основного эталона - 24 ч.
Приготовление эталонов сравнения. Отмеренное количество основного
эталона, указанное в приведенной ниже таблице, помещают в мерную колбу
вместимостью 100 мл, доводят объем жидкости водой до метки и перемешивают.
Таблица 17.1
Состав эталонов сравнения
Основной
эталон, мл
Вода, мл
I
5,0
95,0
Эталоны сравнения
II
10,0
90,0
III
30,0
70,0
IV
50,0
50,0
Примечание. Перед применением исходный, основной и эталоны сравнения
перемешивают и встряхивают в течение 3 мин.
ШЛА

ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА
18. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТА В ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЯХ
МЕТОДОМ КЪЕЛЬДАЛЯ (ОФС 42-0052-07)
Метод основан на минерализации лекарственного средства под воздействием
серной кислоты концентрированной при нагревании в присутствии катализаторов.
При этом азот превращается в аммония сульфат. При добавлении натрия
гидроксида выделяется аммиак, который перегоняют с паром в приемник, содержащий
кислоту для его поглощения: борную - в методе прямого титрования
(1 и 2); серную или хлористоводородную - в методе обратного титрования (3).
В методах 1 и 2 поглощенный аммиак титруют раствором кислоты (хлористоводородной
или серной), в методе 3 избыток кислоты оттитровывают раствором
натрия гидроксида. По результатам титрования рассчитывают содержание азота.
Различают следующие варианты метода: 1 - метод Къельдаля, 2 - микрометод
Къельдаля, 3 - метод Къельдаля (обратное титрование).
Прибор для определения азота (рис. 18.1) состоит из парообразователя-круг-
лодонной колбы (1) вместимостью З л е предохранительной трубкой (2), сменных
колб Къельдаля с длинным горлом (3) для конденсации водяных паров и
защиты от потери вещества, воронки (4) с зажимом или краном (5) для добавления
щелочи, брызгоуловителя (6), прямого холодильника (7) и сменных конических
колб-приемников (8). Стеклянная посуда должна быть термостойкой.
Прибор помещают в вытяжной шкаф.
Вместо описанного прибора могут быть использованы приборы для автоматического
определения азота по Къельдалю. В таком случае определение проводят
в соответствии с инструкцией, прилагаемой к прибору.
в

прибора и дать пене осесть, затем снова продолжают нагревание, не допуская попадания
пены в горло колбы. После охлаждения колбы Къельдаля в нее осторожно
добавляют 20 мл воды, вращая колбу для перемешивания содержимого,
вновь охлаждают и присоединяют колбу к собранному аппарату (рис. 18.1), заранее
промытому путем пропускания через него пара. В парообразователь наливают
воду не менее половины объема, подкисленную 0,5 М или 0,05 М
раствором серной кислоты по индикатору метиловому красному (2-3 капли) до
слабо-розового цвета, для связывания аммиака, который может попасть из воздуха.
Для обеспечения равномерного кипения воды в парообразователь помещают
стеклянные шарики. В приемник перед началом отгонки наливают 20 мл
4 % раствора борной кислоты и прибавляют 0,25 мл (5 капель) смешанного индикатора.
Нижний конец внутренней трубки холодильника должен быть опущен
в раствор, находящийся в приемнике. После сборки прибора в холодильник пускают
воду и доводят до кипения воду в парообразователе. Затем в колбу (3) из
воронки медленно по каплям прибавляют 40 мл 30 % раствора натрия гидрок-
сида, следя за тем, чтобы раствор в колбе (3) энергично перемешивался поступающим
паром. Для обеспечения большей герметичности прибора в воронке
следует оставлять некоторый избыток 30 % раствора натрия гидроксида. Собирают
около 100 мл отгона (или количество, указанное в частной фармакопейной
статье). Во время отгонки колбу Къельдаля нагревают так, чтобы объем жидкости
в ней оставался постоянным. По окончании отгонки опускают приемник,
трубку холодильника выводят из жидкости, промывают снаружи водой,
продолжая подачу пара в колбу (3) в течение 1-2 мин; промывную воду собирают
в тот же приемник. После этого прекращают нагревание парообразователя
и немедленно отсоединяют колбу Къельдаля от прибора. По окончании отгонки
дистиллят титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты или 0,05 М
раствором серной кислоты (должно быть указано в частной фармакопейной
статье) до перехода окраски смешанного индикатора из зеленой в красно-фиолетовую.
Проводят контрольный опыт таким же образом и с теми же реактивами, но без
испытуемого образца; полученный результат используют для внесения поправки
при расчете содержания азота.
1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной или 0,05 М раствора серной кислоты
соответствует 1,401 мг азота.
2. Микрометод Къельдаля
В колбу Къельдаля вместимостью от 50 до 250 мл помещают точную навеску
или указанный в частной фармакопейной статье объем образца лекарственного
средства с содержанием азота 1,4-3,5 мг. Остальные операции проводят, как указано
выше в методе 1, используя описанную ранее смесь катализаторов или (например,
в лекарственных средствах, выделенных из природных источников или
полученных биотехнологическими методами) 0,25 г смеси калия сульфата, меди
сульфата и натрия селената в соотношении 20 : 5 : 8,5; в этом случае вместо 7 мл
прибавляют 2 мл серной кислоты концентрированной.
В случае указанных лекарственных средств минерализацию проводят до тех
fE3

пор, пока раствор не станет прозрачным. После этого нагревание продолжают
еще 30 мин. В конце минерализации, когда вода испарится, прибавляют 1-3
капли водорода пероксида и продолжают нагревание в течение 10 мин до обесцвечивания
раствора.
Титрование выделенного аммиака проводят 0,01 М раствором хлористоводородной
или 0,005 М раствором серной кислоты.
1 мл 0,01 М раствора хлористоводородной или 0,005 М раствора серной кислоты
соответствует 0,1401 мг азота.
3. Метод Къельдаля (обратное титрование)
А. После разложения образца лекарственного средства в методах 1 или 2 в
приемник помещают точно отмеренное количество (от 10,0 до 25,0 мл) взятой в
избытке хлористоводородной или серной кислоты (объем и молярность раствора
кислоты зависят от содержания азота в препарате; указывают в частной фармакопейной
статье).
По окончании отгонки аммиака содержимое приемника титруют 0,1 М раствором
натрия гидроксида (или 0,01 М, что должно быть указано в частной
фармакопейной статье) в присутствии смешанного индикатора, если не указано
иначе в частной фармакопейной статье, до перехода окраски из красно-фиолетовой
в зеленую.
Проводят контрольный опыт таким же образом и с теми же реактивами, но без
испытуемого образца или используя 0,050 г глюкозы, о чем указывают в частной
фармакопейной статье.
Содержание азота в лекарственном средстве в процентах (X]) или в мг/мл
(Х2) вычисляют по формулам:
(VQ-VJXK* 1,401 х io-з х 100
Хх= ,
т
( К 0 - F i ) x . x 1,401
Х2 = ,
V
где: VQ - объем 0,1 М раствора натрия гидроксида, пошедший на титрование
контрольного раствора, мл;
Vi - объем 0,1 М раствора натрия гидроксида, пошедший на титрование
испытуемого раствора, мл;
К - поправочный коэффициент раствора натрия гидроксида;
1,401 - титр азота по соответствующей методике, мг/мл;
т - навеска образца лекарственного средства, г;
V'- объем раствора, взятый для анализа, мл.
ш

Б. Данный метод применяют преимущественно в препаратах крови
В колбу Къельдаля с помощью калиброванной пипетки вносят 0,5-1 мл испытуемого
раствора, содержащего 8-32 мг азота (или 50-200 мг белка), затем вносят
растертую смесь (около 1 г) калия сульфата и меди сульфата (3:1) и от 2 до
4 мл серной кислоты концентрированной в зависимости от содержания белка
Содержимое колбы кипятят. Для ускорения сжигания несколько раз прибавляют
по 5 капель пергидроля и продолжают кипятить, пока раствор не станет голубым
или бесцветным. По окончании сжигания смесь охлаждают. В парообразователь
наливают воду, нагревают до кипения и проверяют аппарат на герметичность.
Присоединяют колбу Къельдаля к прибору для перегонки аммиака или количественно
переносят содержимое колбы в реакционный сосуд аппарата, используя
30 мл воды. Отгон собирают в приемник, куда предварительно наливают от 10,0
до 25,0 мл 0,05 М раствора серной кислоты в зависимости от содержания белка.
Приемник присоединяют так, чтобы нижний конец трубки холодильника был
опущен в раствор. Воду в парообразователе нагревают до кипения. В колбу или
в реакционный сосуд аппарата с минерализатом через воронку прибавляют
около 20 мл 15 М раствора натрия гидроксида до появления коричневой окраски
минерализата. После этого быстро и герметично закрывают зажим воронки и
отгоняют аммиак в течение 5 мин. Затем опускают приемник с 0,05 М раствором
серной кислоты так, чтобы нижний конец трубки холодильника не касался поверхности
жидкости, и продолжают перегонку еще 5 мин. Отгон титруют 0,1 М
раствором натрия гидроксида до перехода сиреневой окраски в зеленую (индикатор
- 0,05 мл смешанного индикатора). Параллельно проводят контрольный
опыт.
1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 1,401 мг азота.
Рис. 18.1. Прибор для определения азота (объяснение в тексте)
ЕШ

19. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА (ОФС 42-0053-07)
Определение содержания белка проводят в лекарственных средствах, выделенных
из природных источников или полученных биотехнологическими методами.
Для лекарственных средств, в которых белки не являются основными компонентами
или имеют необычную первичную структуру (например, протамины),
могут использоваться модифицированные методики определения белка, указанные
в частных фармакопейных статьях, в которых могут быть изменены рекомендуемые
области концентраций белка и/или объемы испытуемого раствора
и реактивов и некоторые другие условия в соответствии с индивидуальными
свойствами лекарственного средства.
Для количественного определения белка используют следующие методы:
1. Спектрофотометрические методы, в которых измерение проводят при
одной длине волны (метод А) или при двух длинах волн (метод Б). Спектрофотометрические
методы определения белка основаны на измерении светопо-
глощения растворов белков при 280 нм (поглощение ароматических
аминокислот) или в области 205-220 нм (поглощение пептидных групп).
2. Колориметрические методы
1. Метод с биуретовым реактивом. Метод универсален, мало зависит от природы
белка, но имеет низкую чувствительность.
2. Метод Лоури. Преимущественно используется для ферментных препаратов.
Отличается высокой чувствительностью, но определению мешают многие
вещества. В последнем случае применяют метод с предварительным осаждением
белка (Б). Зависимость поглощения белка от его концентрации нелинейная,
однако в области малых концентраций ее можно считать линейной. Определение
проводят по калибровочному графику, построенному по растворам стандартного
образца белка, который воспроизводят при каждом анализе.
3. Метод Бредфорда используется для белков и пептидов с молекулярной массой
более 3000 Да. Метод имеет высокую чувствительность, но степень связывания
красителя в значительной степени зависит от индивидуальных свойств
белка.
4. Метод с бицинхониновой кислотой альтернативен методу Лоури, но отличается
более высокой стабильностью реагента, чем реактив Фолина, и меньшей
зависимостью от природы белка и сопутствующих соединений.
Колориметрические и некоторые спектрофотометрические методы требуют
использования стандартного образца. В качестве стандартного образца белка используют:
стандартный образец присутствующего в препарате белка, или бычий
сывороточный альбумин, или сывороточный альбумин человека, высушенные
перед испытанием до постоянной массы (стандартный образец и условия высушивания
указывают в частной фармакопейной статье: в эксикаторе под вакуумом
над фосфора(У) оксидом, в вакуумном шкафу при 60 °С или в термостате
при 100-105 °С).
Раствор стандартного образца. Стандартный образец белка растворяют в
том же растворителе и в той же концентрации, что и в испытуемом растворе.
Испытуемый раствор. Растворяют или разводят лекарственное средство в
твта

воде, 0,9 % растворе натрия хлорида или буферном растворе до концентрации
указанной в частной фармакопейной статье.
3. Методы определения белка по содержанию азота
1. Метод Къельдаля - титриметрический (А - микрометод, Б - обратное титрование).
2. Метод с реактивом Несслера (колориметрический). В качестве стандартного
образца, содержащего азот, используют аммония сульфат.
Для многокомпонентных препаратов, содержащих другие вещества, в состав
которых входит азот, перед определением белка необходимо предварительно
проводить пробоподготовку: осаждение трихлоруксусной или фосфорноволь-
фрамовой кислотой.
4. Метод определения белка по аминокислотному составу.
1. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Результаты достоверны в области линейной зависимости оптической плотности
раствора от концентрации белка.
Метод А. Метод основан на способности ароматических аминокислот (тирозина,
триптофана и в меньшей степени фенилаланина) в молекуле белка поглощать
ультрафиолетовый свет при длине волны около 280 нм.
При низких концентрациях белок адсорбируется на стенках кюветы, что
может приводить к заниженным результатам; в этом случае в раствор препарата
добавляют неионный детергент, указанный в частной фармакопейной статье,
или предварительно концентрируют испытуемый раствор, избегая денатурации
белка.
Готовят испытуемый раствор с содержанием белка 0,2-2 мг/мл.
Методика. Выдерживают при комнатной температуре испытуемый раствор,
раствор стандартного образца и раствор сравнения в течение 10 мин.
Для высокоочищенных белков концентрацию белка в растворе вычисляют с
использованием удельного показателя поглощения.
Рассеяние света. Точность определения содержания белка в УФ-области
уменьшается, если белки в растворе существуют в виде частиц, сравнимых
по размеру с длиной волны измеряемого света (250-300 нм). Рассеяние светового
луча приводит к увеличению поглощения испытуемого раствора, поэтому
дополнительно вычисляют оптическую плотность раствора при длине
волны 280 нм, обусловленную рассеянием света. С этой целью проводят определение
оптической плотности испытуемого раствора при длинах волн 320,
325, 330, 335, 340 и 350 нм. Строят график зависимости логарифма (lg) оптической
плотности от lg соответствующей длины волны. Экстраполируют кривую
до lg 280 нм и определяют lg оптической плотности. Антилогарифм этого
значения соответствует оптической плотности за счет рассеяния света, которое
вычитают из оптической плотности раствора, полученной при 280 нм, для
расчета истинного содержания белка в испытуемом растворе.
шз

Концентрацию белка в испытуемом растворе (С) в мг/мл вычисляют по
формуле:
где: Сс т - концентрация белка в растворе стандартного образца, в мг/мл;
А и Аст - значения оптической плотности испытуемого раствора и раствора
стандартного образца при длине волны 280 нм соответственно,
после вычитания оптической плотности за счет рассеяния света.
Мутные растворы для уменьшения светового рассеяния перед определением
содержания белка фильтруют через фильтры из поливинилиденфторида или указанные
в частной фармакопейной статье с размером пор 0,2 мкм, не адсорбирующие
белок, или центрифугируют.
Метод Б. Метод измерения оптической плотности растворов при двух длинах
волн используют как для растворов чистых белков, так и для их смесей, в области
концентраций 0,0015-0,0450 мг/мл, если не указано иначе в частной фармакопейной
статье.
Готовят серию разведений (не менее трех) образца лекарственного средства с
равными интервалами и измеряют оптическую плотность полученных растворов
при длинах волн 215 нм и 225 нм. Концентрацию белка (Q) в каждом растворе
в мг/мл вычисляют по формуле:
q =(A2 1 5-A2 2 5 ) x P ix0,144,
где: А215
и А 225 - оптическая плотность разведенного раствора при 215 нм
и 225 нм соответственно;
Pj - разведение;
0,144 - эмпирически вычисленный коэффициент для белков при измерении
оптической плотности растворов при длинах волн 215 нм и
225 нм.
Рассчитывают среднее значение.
2. КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
1. Метод с биуретовым реактивом
Метод основан на образовании в щелочной среде окрашенного комплекса
ионов двухвалентной меди с пептидными связями молекулы белка.
Методика. К 1 мл испытуемого раствора, приготовленного растворением испытуемого
вещества в 0,9 % растворе натрия хлорида, с содержанием белка от
2 до 8 мг прибавляют 4 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют
при комнатной температуре на 30 мин. Измеряют оптическую плотность раствора
при длине волны 540 нм (или указанной в частной фармакопейной статье,
в пределах 540-650 нм).
Биуретовую реакцию нельзя проводить в присутствии солей аммония из-за
образования медно-аммиачных комплексов, а также с растворами, в которых
появляется мутность или образуется осадок. Для устранения влияния посторонних
веществ проводят осаждение белка из раствора испытуемого образца
твя

следующим образом: к 1 объему раствора испытуемого образца прибавляют 0,1
объема 50 % раствора трихлоруксусной кислоты, удаляют надосадочную жидкость
и растворяют осадок в небольшом объеме 0,5 М раствора натрия гидро-
ксида. Полученный раствор используют для приготовления испытуемого
раствора.
Метод может использоваться в различных вариантах: с построением калибровочной
кривой или с использованием стандартного образца.
Калибровочный график строят каждый раз при приготовлении новых реактивов
или использовании другого спектрофотометра, но не реже 1 раза в 3 мес.
2. Метод Лоури
Метод основан на биуретовой реакции белков с солями меди(П) в щелочном
растворе и восстановлении фосфорномолибдено-вольфрамового реактива (или
реактива Фолина) в гетеромолибденовый краситель с максимумом поглощения
при длине волны 750 нм в результате окисления ароматических аминокислот
белка (главным образом тирозина, а также триптофана и фенилаланина и в меньшей
степени цистеина). Развитие окраски достигает максимума через 20-30 мин
при комнатной температуре, в дальнейшем идет уменьшение ее интенсивности.
Степень окрашивания зависит от природы белка. Определению мешают некоторые
соли, тиоловые соединения, углеводы, липиды, неионные детергенты, органические
растворители, комплексоны и другие соединения. Для уменьшения
влияния веществ, мешающих определению, проводят дополнительное разведение
раствора или осаждение белков трихлоруксусной кислотой.
Метод А (без предварительного осаждения белка). К 1 мл испытуемого раствора,
содержащего 0,020-0,100 мг белка; к 1 мл каждого раствора стандартного
образца белка и к 1 мл используемого для приготовления испытуемого
раствора растворителя, помещенным в отдельные пробирки, прибавляют по
5 мл реактива В. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 10 мин
при комнатной температуре. Затем в каждую пробирку прибавляют 0,5 мл фос-
форномолибденово-вольфрамового реактива, разбавленного перед употреблением
водой в 2 раза, быстро и тщательно перемешивают и оставляют на 30 мин
при комнатной температуре. Измеряют оптическую плотность испытуемого и
стандартных растворов на спектрофотометре при длине волны 750 нм в кюветах
с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.
Примечания
1. Приготовление реактива А. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
2 г натрия карбоната, растворяют в 0,1 М растворе натрия гидроксида и доводят
объем до метки этим же раствором.
Срок годности раствора - 1 мес.
2. Приготовление реактива Б. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают
0,5 г меди сульфата и растворяют в 1 % растворе: калия-натрия тартрата,
или натрия тартрата, или натрия цитрата (должно быть указано в частной фармакопейной
статье).
Срок годности раствора - 2 мес.
3. Приготовление реактива В. Перед анализом смешивают 50 мл реактива А
и 1 мл реактива Б.
рЯБГ

Метод Б (с предварительным осаждением белка). Метод рекомендован для
лекарственных средств, содержащих компоненты, влияющие на результаты анализа
(фенол, ароматические аминокислоты, трис-буфер, цистеин, дитиотреитол,
аскорбиновая кислота, этилендиаминтетраацетат; тритон Х-100, твин-20, соли,
сахара и др.).
Методика. В центрифужную пробирку помещают 1 мл испытуемого раствора,
содержащего 0,10-0,30 мг белка, прибавляют 1 мл 20 % раствора три-
хлоруксусной кислоты и перемешивают. Пробу оставляют на 18-20 ч при
температуре 4-8 °С. Осадок отделяют центрифугированием в течение 30 мин
при температуре около 5 °С и скорости вращения 2000 об/мин, промывают 1 мл
10 % раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют в тех же условиях.
Осторожно сливают надосадочную жидкость, оставшийся осадок растворяют в
0,2 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и доводят объем раствора водой до
1 мл. К 0,5 мл полученного раствора, содержащего 0,050-0,150 мг белка, прибавляют
0,5 мл воды, перемешивают, вносят 5 мл реактива В и далее поступают,
как описано выше в методе А.
В качестве раствора сравнения используют пробу, содержащую 0,1 мл 0,1 М
раствора натрия гидроксида, 0,9 мл воды, 5 мл реактива В и 0,5 мл разбавленного
в 2 раза фосфорномолибденово-вольфрамового реактива.
Примечание. Приготовление 20 % раствора трихлоруксусной кислоты
(ТХУ). 150 г ТХУ растворяют в 100 мл воды. 1 мл полученного раствора титруют
1 М раствором натрия гидроксида с индикатором фенолфталеин и рассчитывают
концентрацию трихлоруксусной кислоты в полученном растворе (приблизительно
80 % раствор трихлоруксусной кислоты).
1 мл 1 М раствора натрия гидроксида соответствует 0,1634 г трихлоруксусной
кислоты.
Срок годности полученного раствора - 1 год.
Раствор разводят водой до концентрации 20 %.
Срок годности 20 % раствора трихлоруксусной кислоты - 1 мес.
Метод В (с натрия додецилсулъфатом). Определение проводят, как описано
в методе А, но вместо 5 мл реактива В к растворам прибавляют по 1 мл щелочного
реагента меди.
Примечание. Приготовление щелочного реагента меди. В мерной колбе вместимостью
100 мл растворяют в воде 0,2 г меди сульфата и 0,4 г натрия тарт-
рата, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 1 объем
полученного раствора смешивают с 2 объемами 5 % раствора натрия додецил-
сульфата и 1 объемом 3,2 % раствора натрия гидроксида.
Срок годности - 2 недели при комнатной температуре.
3. Метод Бредфорда
Метод основан на измерении светопоглощения продукта взаимодействия красителя
кислотного синего 90 с белком при длине волны 595 нм. Связывание красителя
происходит в анионной форме преимущественно с остатками аргинина
и в меньшей степени с остатками лизина, гистидина, триптофана и фенилала-
нина белка.
ияя

Методика. О,1 мл испытуемого раствора, содержащего 0,04-0,05 мг белка, помещают
в пробирку, прибавляют 5 мл реактива Бредфорда, тщательно перемешивают
и через 10 мин измеряют оптическую плотность на спектрофотометре
при длине волны 595 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм против раствора сравнения,
содержащего растворитель и реактив Бредфорда. Окраска стабильна в
течение 1 часа. Для соблюдения линейной зависимости оптической плотности
определяемого белка от его концентрации конечная концентрации белка в растворе
красителя должна быть 0,008-0,010 мг/мл. В частных фармакопейных
статьях допускается изменение объемов испытуемого раствора и реактива Бредфорда
с соблюдением данного условия.
Содержание белка в растворе рассчитывают по калибровочному графику, построенному
в пределах от 0,01 до 0,10 мг стандартного образца белка в 0,1 мл раствора.
Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.
Примечание. Приготовление реактива Бредфорда. В мерную колбу вместимостью
500 мл помещают 0,05 г кислотного синего 90, растворяют в 25 мл
спирта 96 %, прибавляют 50 мл фосфорной кислоты концентрированной, доводят
объем раствора водой до метки и тщательно перемешивают.
Реактив хранят при комнатной температуре во флаконе темного стекла. Срок
годности - 2 недели.
Перед использованием реактив фильтруют.
Допускается использование коммерческого реактива Бредфорда.
4. Метод с бицинхониновой кислотой
Метод основан на восстановлении двухвалентного иона меди в одновалентный
при взаимодействии с остатками цистеина, цистина, триптофана, тирозина,
пептидной связью белка и образовании окрашенного комплекса Си+ с бицинхониновой
кислотой (2,2'-бихинолин-4,4'-дикарбоновая кислота-БХК). Определению
мешают восстанавливающие вещества: сахара, аскорбиновая кислота,
тиоловые соединения, этилендиаминтетраацетат. Влияние мешающих веществ
может быть уменьшено разбавлением испытуемого раствора или устранено отделением
белка путем его осаждения, описанного в методе Лоури. Интенсивность
окраски образующегося комплекса зависит от природы белка, поэтому
белок стандартного образца должен быть тот же, что и в испытуемом образце.
Методика. К 0,1 мл испытуемого раствора, содержащего 0,025-0,05 мг белка;
0,1 мл раствора стандартного образца белка и к 0,1 мл растворителя, используемого
для приготовления испытуемого раствора, прибавляют 2 мл реагента меди
с БХК. Выдерживают растворы при 37 °С в течение 30 мин, охлаждают при комнатной
температуре и через 60 мин (от конца выдержки при 37 °С) измеряют оптическую
плотность испытуемого и стандартных растворов на
спектрофотометре при длине волны 562 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм относительно
раствора сравнения.
Содержание белка в испытуемом растворе рассчитывают по калибровочному
графику.
Примечания
1. Приготовление БХК-реагента. В мерной колбе вместимостью 1 л в воде

растворяют 10 г бицинхониновой кислоты (БХК) или ее динатриевой соли, 20 г
натрия карбоната моногидрата, 1,6 г натрия тартрата, 4 г натрия гидроксида, 9,5
г натрия гидрокарбоната, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают;
рН полученного раствора должен быть 11,25. При необходимости рН доводят
раствором натрия гидроксида 10 % или натрия гидрокарбоната 5 %.
2. Приготовление реагента меди с БХК. Смешивают 1 мл 4 % раствора меди
сульфата и 50 мл БХК-реагента.
3. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА ПО СОДЕРЖАНИЮ АЗОТА
Определение белка по содержанию азота основано на том, что содержание
азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным
16 %. По количеству найденного азота во взятой пробе рассчитывают содержание
белка в лекарственном средстве, используя коэффициент пересчета
азота на белок, равный 6,25.
Другие азотсодержащие вещества, присутствующие в испытуемом образце,
будут оказывать влияние на результаты определения.
Определение белка по содержанию азота основано на разложении испытуемого
образца при проведении анализа. При нагревании азотсодержащего органического
соединения с серной кислотой концентрированной азот превращается
в аммония сульфат, и его можно определить количественно.
1. Метод Къельдаля
Л. Микрометод. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение
азота в органических соединениях» (раздел 2 - микрометод Къельдаля) из
точной навески препарата, содержащей 10-20 мг белка.
Б. Метод Къельдаля (обратное титрование). Определение проводят в соответствии
с ОФС «Определение азота в органических соединениях» (раздел 3,
подраздел Б - определение азота преимущественно в препаратах крови) из точного
объема испытуемого раствора, содержащего 50-200 мг белка.
2. Метод с реактивом Несслера
Метод основан на цветной реакции ионов аммония с реактивом Несслера.
Содержание азота в испытуемом растворе определяют по калибровочному
графику, построенному с использованием в качестве стандартного образца аммония
сульфата, высушенного до постоянной массы в эксикаторе над серной
кислотой или кальция хлоридом.
Метод А. Точную навеску лекарственного средства, содержащую около 10 мг
белка, минерализуют по способу, описанному в микрометоде Кьельдаля. После
минерализации пробу количественно переносят в мерную колбу вместимостью
25 мл и доводят объем раствора водой до метки.
0,5-1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью
25 мл, прибавляют 10 мл воды, 2 мл реактива Несслера, доводят объем раствора
водой до метки и перемешивают. Через 15 мин измеряют оптическую плотность
на спектрофотометре при длине волны 400-410 нм (указанной в частной фармакопейной
статье) в кювете с толщиной слоя 10 мм.
на

В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без испытуемого
образца.
Калибровочный график строят в пределах содержания азота от 0,03 до 0,07 мг
в 25 мл конечного раствора.
Метод Б (с использованием фосфорновольфрамовой кислоты). В центрифужную
термостойкую пробирку вместимостью 10 мл вносят от 0,5 до 3 мл испытуемого
раствора с содержанием белка от 0,07 до 3,0 мг, доводят при
необходимости объем 0,9 % раствором натрия хлорида до 3 мл, прибавляют 0,3
мл 20 % раствора фосфорновольфрамовой кислоты и 0,3 мл серной кислоты концентрированной,
тщательно перемешивают и оставляют на 18-20 ч при температуре
2-8 °С. Осадок отделяют центрифугированием при скорости вращения
2000 об/мин в течение 30 мин при температуре 4-6 °С. Осадок промывают
смесью, состоящей из 1 мл воды, 0,1 мл серной кислоты концентрированной,
0,1 мл 20 % раствора фосфорновольфрамовой кислоты, затем центрифугируют
в тех же условиях. К осадку прибавляют 0,1 мл серной кислоты концентрированной.
Пробирку закрывают стеклянным колпачком или стеклянной воронкой
и минерализуют на песчаной бане. Одновременно минерализуют контрольную
пробу, содержащую 0,1 мл серной кислоты концентрированной. Для ускорения
минерализации используют водорода пероксид, который периодически прибавляют
по 1-2 капли в предварительно охлажденную пробирку. Минерализацию
продолжают до образования осадка желтого цвета (8-10 ч или указанного в частной
фармакопейной статье времени), окраска которого не изменяется в течение
последних 1-1,5 ч. Пробирку охлаждают, доводят объем минерализата водой до
10 мл и перемешивают. 0,5 мл полученного раствора переносят в мерную пробирку,
доводят водой до объема 9,5 мл и перемешивают; прибавляют 0,5 мл реактива
Несслера и вновь перемешивают. Через 15 мин измеряют оптическую
плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 400-410 нм (указанной
в частной фармакопейной статье) в кювете с толщиной слоя 10 мм.
В качестве раствора сравнения используют контрольный раствор, приготовленный
аналогичным образом из контрольной пробы.
Калибровочный график строят в пределах содержания азота от 0,005 до
0,025 мг в 10 мл и воспроизводят при каждом анализе.
ЕШ

предварительно окислять соответственно в цистеиновую кислоту и метионин-
сульфон или использовать другие методы анализа: для цистина (1/2 цистеина) -
гидразинолиз с последующим проведением цветной реакции с реактивом висмута,
описанным в частной фармакопейной статье; для метионина - проведение
гидролиза в отдельной навеске большой массы (около 0,5 г) с последующей
цветной реакцией с натрия нитропруссидом. Триптофан определяют после щелочного
гидролиза в отдельной навеске и проводят цветную реакцию с л-диме-
тиламинобензальдегидом.
Расчет содержания белка проводят следующим образом: зная содержание
каждой аминокислоты (At) в мкг/мг и мкМ/мг, рассчитывают сумму аминокислот.
Затем рассчитывают величину средней молекулярной массы аминокислот
(Мср), поделив сумму аминокислот в мкг ( I Ап) на сумму аминокислот в мкМ
&Ai2):
ZAn
КР.
ZAa
Из полученного значения Мср вычитают 18 (молекулярная масса воды, которая
присоединяется к пептидной связи во время гидролиза с ее разрывом и образованием
концевых групп аминокислот), получают величину среднего
аминокислотного остатка (Аср):
Аср.= Кр.~1%-
Затем полученное значение Аср умножают на сумму аминокислот в мг и делят
на значение Мс , в результате получают содержание белка в мг (Б):
Аср.*ЪАл
Б = ,
1000хМс/)
где 1000 - перевод мкг в мг.
Для определения содержания белка (X) в мг в 1 мг образца лекарственного
средства делят значение Б с учетом разведения (Р), проводимого в ходе анализа,
на навеску образца (т) в мг, которая обычно составляет около 10 мг:
Б*Р
Х= •
т
— — ——нв
8 Зак. 2768

20. НИТРИТОМЕТРИЯ (ОФС 42-0054-07)
Нитритометрия - метод титриметрического анализа, при котором в качестве
реактива для титрования используется раствор натрия нитрита.
Применяется для количественного определения соединений, содержащих первичную
или вторичную ароматическую аминогруппу, для определения гидра-
зидов, а также ароматических нитросоединений после предварительного
восстановления нитрогруппы до аминогруппы.
Методика. Если не указано иначе, точную навеску образца лекарственного
средства, указанную в частной фармакопейной статье, растворяют в смеси 10 мл
воды и 10 мл хлористоводородной кислоты разведенной 8,3 %. Прибавляют воду
до общего объема 80 мл, 1 г калия бромида и при постоянном перемешивании
титруют 0,1 М раствором натрия нитрита. В начале титрования прибавляют раствор
натрия нитрита со скоростью 2 мл/мин, а в конце (за 0,5 мл до эквивалентного
количества) - 0,05 мл/мин.
Титрование проводят при температуре раствора 15-20 °С, однако в некоторых
случаях требуется охлаждение до 0-5 °С.
Точку эквивалентности определяют электрометрическими методами (потен-
циометрическое титрование, амперометрическое титрование) или с помощью
внутренних индикаторов.
При потенциометрическом титровании в качестве индикаторного применяют
платиновый электрод, при этом в качестве электродов сравнения используют
хлорсеребряный или насыщенный каломельный электрод.
На электроды накладывают разность потенциалов 0,3-0,4 В, если не указано
иначе в частной фармакопейной статье.
В качестве внутренних индикаторов используют тропеолин 00 (4 капли раствора),
тропеолин 00 в смеси с метиленовым синим (4 капли раствора тропео-
лина 00 и 2 капли раствора метиленового синего), нейтральный красный (2 капли
в начале и 2 капли в конце титрования).
Титрование с тропеолином 00 проводят до перехода окраски от красной к желтой,
со смесью тропеолина 00 с метиленовым синим - от красно-фиолетовой к
голубой, с нейтральным красным - от красно-фиолетовой к синей. Выдержку в
конце титрования с нейтральным красным увеличивают до 2 мин.
Параллельно проводят контрольный опыт.

ИСПЫТАНИЕ НА ПРЕДЕЛЬНОЕ
СОДЕРЖАНИЕ ПРИМЕСЕЙ
21. ОБЩАЯ ЗОЛА (ОФС 42-0055-07)
Около 1 г испытуемого вещества или 3-5 г измельченного лекарственного растительного
сырья (точная навеска) помещают в предварительно прокаленный
и точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, равномерно
распределяя вещество по дну тигля. Затем тигель осторожно нагревают,
давая сначала веществу сгореть или улетучиться при возможно более низкой
температуре. Сжигание оставшихся частиц угля проводят также при возможно
более низкой температуре; после того как уголь сгорит почти полностью, увеличивают
пламя. При неполном сгорании частиц угля остаток охлаждают, смачивают
водой или насыщенным раствором аммония нитрата, выпаривают на
водяной бане и остаток прокаливают. В случае необходимости такую операцию
повторяют несколько раз.
Прокаливание проводят в муфельной печи при температуре около 600 °С до
постоянной массы, избегая появления пламени, сплавления золы и спекания ее
со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе
и взвешивают.
22. СУЛЬФАТНАЯ ЗОЛА (ОФС 42-0056-07)
Точную навеску испытуемого вещества (около 1 г, если нет других указаний
в частной фармакопейной статье) помещают в предварительно прокаленный и
точно взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, смачивают
1 мл серной кислоты концентрированной и осторожно (избегая сильного вспенивания
вещества) нагревают на пламени или песчаной бане до удаления паров
серной кислоты. Продолжают нагревание при более высокой температуре до исчезновения
темных частиц. Затем тигель помещают в муфельную печь и прокаливают
при температуре около 600 °С до постоянной массы, избегая появления
пламени, сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания
тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают.
В случае трудного сгорания, прибавление серной кислоты концентрированной
и прокаливание повторяют.
23. ОСТАТОЧНЫЕ ОРГАНИЧЕСКИЕ РАСТВОРИТЕЛИ
(ОФС 42-0057-07)
П Н

Нормативная документация (НД), регламентирующая качество таких лекарственных
и вспомогательных веществ, а также лекарственных препаратов,
должна иметь раздел «Остаточные органические растворители».
Отсутствие такого раздела в НД должно быть обосновано.
Предельно допустимое содержание органических растворителей в лекарственных
средствах определяется степенью их возможного риска для здоровья человека.
Эти факторы положены в основу классификации органических
растворителей:
1 класс - высокотоксичные растворители (генотоксичные канцерогены), применяемые
в фармацевтическом производстве в исключительных случаях, когда
нельзя избежать их использования (табл. 23.1);
2 класс - негенотоксичные растворители. Нормирование их в лекарственных
средствах обусловлено максимально допустимым количеством, принимаемым
в составе суточной дозы лекарственного средства (табл. 23.2);
3 класс - растворители низкой токсичности, содержание которых до
0,5 % не требует подтверждения (табл. 23.3). Содержание таких растворителей
допускается и в более высоких пределах, если это регламентировано правилами
Надлежащей производственной практики или иными стандартами производства.
Определение содержания остаточных органических растворителей может
быть осуществлено любыми валидированными методами. Наиболее часто для
этих целей используется метод газовой хроматографии.
Содержание остаточных органических растворителей в лекарственных средствах
регламентируется следующим образом:
1) при наличии растворителей 1 класса каждый из них должен быть идентифицирован
и определен количественно;
2) при наличии растворителей 2 класса каждый из них должен быть идентифицирован
и определен количественно;
3) при наличии растворителей 3 класса, если их содержание не превышает
0,5 %, для определения допускается применение неспецифического метода «Потеря
в массе при высушивании»; при наличии растворителей 3 класса, если их
содержание превышает 0,5 %, каждый из них должен быть идентифицирован и
определен количественно.
Условия проведения анализа на остаточные органические растворители
должны быть описаны в соответствующих НД.
Указание на необходимость определения в фармацевтической субстанции или
готовой лекарственной форме иных органических растворителей и условия проведения
их анализа должны содержаться в соответствующих НД.
Таблица 23.1
Предельно допустимое содержание в лекарственных средствах
остаточных органических растворителей 1 класса токсичности
Растворитель
Бензол
1,1-Дихлорэтан
1,2-Дихлорэтан
1,1,1 -Трихлорэтан
Четыреххлористый углерод
Предельное содержание, ррт
2
8
5
1500
4
ЕШ

Таблица 23.2
Предельно допустимое содержание в лекарственных средствах
остаточных органических растворителей 2 класса токсичности
Растворитель
Ацетонитрил
Гексан
]УГ,К-Диметилацетамид
]Ч,]Ч-Диметилформамид
1,2-Диметоксиэтан
1,4-Диоксан
1,2-Дихлорэтен
Ксилол
Метанол
Метилбутилкетон
Метиленхлорид
N-Метилпирролидон
Метилциклогексан
2-Метоксиэтанол
Нитрометан
Пиридин
Сульфолан
Тетрагидрофуран
Тетралин
Толуол
Трихлорэтен
Формамид
Хлорбензол
Хлороформ
Циклогексан
Этиленгликоль
2-Этоксиэтанол
Предельное
содержание, мг/сут
4,1
2,9
10,9
8,8
1,0
3,8
18,7
21,7
30,0
0,5
6,0
5,3
11,8
0,5
0,5
2,0
1,6
7,2
1,0
8,9
0,8
2,2
3,6
0,6
38,8
6,2
1,6
Предельное
содержание, ррш
410
290
1090
880
100
380
1870
2170
3000
50
600
530
1180
50
50
200
160
720
100
890
80
220
360
60
3880
620
160

Таблица 23.3 Растворители 3 класса токсичности, которые подлежат нормированию
в соответствии с требованиями настоящей ОФС
Ацетон
Анизол
1-Бутанол
2-Бутанол
Бутилацетат
т/?ет-Бутилметиловый эфир
Гептан
Диметилсульфоксид
Диэтиловый эфир
Изобутилацетат
Изопропилацетат
Кумол
Муравьиная кислота
Метилацетат
3 -Метил-1 -бутанол
Метилизобутилкетон
2-Метил-1-пропанол "
Метилэтилкетон
Пентан ~"
1-Пентанол
1-Пропанол
2-Пропанол
Пропилацетат
Уксусная кислота
Этанол
Этилацетат
Этилформиат
24. ИСПЫТАНИЯ НА ЧИСТОТУ
И ДОПУСТИМЫЕ ПРЕДЕЛЫ ПРИМЕСЕЙ
Определение примесей в лекарственных средствах и оценку их содержания
проводят путем сравнения с эталонными растворами, устанавливающими предел
содержания данной примеси, после проведения реакции. Окраска или опа-
лесценция/муть испытуемого раствора должна быть не интенсивнее окраски или
опалесценции/мути эталонного раствора.
Общие замечания
1. Вода и все реактивы должны быть свободны от ионов, на содержание которых
проводят испытания.
2. Пробирки, в которых проводят наблюдения, должны быть бесцветными и одинакового
диаметра (около 1,5 см, если не указано иначе).
3. Если не указано иначе, навески для приготовления эталонных растворов отвешивают
с точностью до 0,001 г.
4. Наблюдения мути и опалесценции растворов проводят в проходящем свете
на темном фоне, а окраски - по оси пробирок при дневном отраженном свете на
матово-белом фоне.
5. Прибавление реактивов к испытуемому и эталонному растворам должно проводиться
одновременно и в одинаковых количествах.
6. В случае, когда в соответствующей фармакопейной статье указано, что в данной
концентрации раствора не должно обнаруживаться той или иной примеси,
поступают следующим образом. К 10 мл испытуемого раствора прибавляют
по

применяемые для каждой реакции реактивы, указанные в методике, кроме основного
реактива, открывающего данную примесь. Затем раствор делят на две
равные части: к одной из них прибавляют основной реактив и оба раствора сравнивают
между собой. Между ними не должно быть заметной разницы.
24.1. ЖЕЛЕЗО (ОФС 42-0058-07)
Химические методы определения примеси железа в лекарственных средствах
основаны на образовании окрашенных растворов при взаимодействии ионов железа
с различными реагентами.
С сульфосалициловой кислотой соли двух- и трехвалентного железа в зависимости
от концентрации образуют в аммиачной среде желтые или коричнево-
красные растворы сульфосалицилатных комплексов (метод 1); в зависимости от
природы испытуемого образца используются различные модификации этого
метода.
С тиогликолевой кислотой в аммиачной среде (метод 2) или с аммония тио-
цианатом в кислой среде (метод 3) соли трехвалентного железа в зависимости от
концентрации образуют розовые или красные растворы соответствующих соединений.
В этих методах двухвалентное железо переходит в трехвалентное под
действием тиогликолевой кислоты или аммония персульфата.
Интенсивность окраски испытуемого раствора сравнивают с окраской эталонного
раствора. Окраска, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать
окраску эталонного раствора.
Предельно допустимое содержание солей железа, метод испытания, условия
подготовки испытуемого образца и концентрация стандартного раствора железа
должны быть указаны в частной фармакопейной статье.
Определение железа в растворах лекарственных средств
Метод 1
Испытуемый раствор. 10 мл раствора испытуемого образца, приготовленного,
как указано в частной фармакопейной статье.
Эталонный раствор. 10 мл стандартного раствора железо(Ш)-иона (Змкг/мл).
К испытуемому и стандартному растворам прибавляют по 2 мл 10 % раствора
сульфосалициловой кислоты, 1 мл 10 % раствора аммиака, перемешивают и
через 5 мин сравнивают окраску растворов.
Определение солей железа в соединениях магния
Испытуемый раствор. 10 мл раствора испытуемого образца, приготовленного,
как указано в частной фармакопейной статье.
Эталонный раствор. 10 мл стандартного раствора железо(Ш)-иона (Змкг/мл).
К испытуемому и стандартному растворам прибавляют по 2 мл 10 % раствора
сульфосалициловой кислоты, 0,5 мл 10,7 % раствора аммония хлорида, 1 мл
10 % раствора аммиака и через 5 мин сравнивают окраску растворов.
Определение солей железа в соединениях алюминия
Испытуемый раствор. 10 мл раствора испытуемого образца, приготовленного,
как указано в частной фармакопейной статье.
Эталонный раствор. 10 мл стандартного раствора железо(Ш)-иона (3 мкг/мл).
К испытуемому и стандартному растворам прибавляют по 5 мл 10 % раствора
по

сульфосалициловой кислоты, 2 мл 10% раствора натрия гидроксида и сравнивают
окраску растворов.
Метод 2
Испытуемый раствор. 10 мл раствора испытуемого образца, приготовленного,
как указано в частной фармакопейной статье.
Эталонный раствор. 10 мл стандартного раствора железо(Ш)-иона (1 мкг/мл).
К испытуемому и стандартному растворам прибавляют по 2 мл 20 % раствора
лимонной кислоты и 0,1 мл тиогликолевой кислоты, перемешивают, добавляют
раствор аммиака до щелочной реакции, разбавляют водой до 20 мл, перемешивают
и через 5 мин сравнивают окраску растворов.
Метод 3
Испытуемый раствор. 10 мл раствора испытуемого образца, приготовленного,
как указано в частной фармакопейной статье.
Эталонный раствор. К 3 мл стандартного раствора железо(Ш)-иона
(1 мкг/мл) прибавляют 7 мл воды.
К испытуемому и стандартному растворам прибавляют по 0,5 мл хлористоводородной
кислоты концентрированной, 10 мг аммония персульфата и 1,5 мл
15 % раствора аммония тиоцианата, перемешивают и сравнивают окраску растворов.
Определение солей железа в зольном остатке органических соединений
Испытуемый раствор. Зольный остаток, полученный после сжигания навески
испытуемого образца с серной кислотой концентрированной, обрабатывают
при нагревании на водяной бане 2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной
и прибавляют 2 мл воды.
Содержимое тигля, если нужно, фильтруют в пробирку, тигель и фильтр промывают
3 мл воды, присоединяя промывные воды к фильтрату. Раствор нейтрализуют
аммиаком водным и доводят объем раствора водой до 10 мл.
Эталонный раствор. В тигель помещают серную кислоту в количестве, взятом
для сжигания испытуемого образца, и далее поступают как с испытуемым
препаратом, но объем раствора доводят водой до 9 мл, после чего прибавляют
1 мл стандартного раствора железо(Ш)-иона (30, 10 или 3 мкг/мл в зависимости
от метода определения).
Далее определение проводят любым из описанных выше методов определения
железа в растворах лекарственных средств.
Стандартные растворы железо(1П)-иона
Стандартный раствор 200 мкг/мл железо(Ш)-иона
0,8634 г железа(Ш) аммония сульфата или количество железа(Ш) аммония
сульфата (X), соответствующее 100,0 мг железо(Ш)-иона, рассчитанное по
формуле X=100,0/Q, где Q - содержание железо(Ш)-иона в миллиграммах в
1 грамме железа(Ш) аммония сульфата (см. Примечание), растворяют в 25 мл
раствора серной кислоты разведенной 9,8 % при нагревании, переносят количественно
в мерную колбу вместимостью 500 мл, доводят объем раствора
водой до метки и перемешивают.
рид"

Стандартный раствор 30 мкг/мл железо(Ш)-иона
15 мл стандартного раствора (200 мкг/мл железо(III)-иона) перед использованием
помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем водой
до метки и перемешивают.
Стандартный раствор 20 мкг/мл железо(III)-иона
10 мл стандартного раствора (200 мкг/мл железо(III)-иона) перед использованием
помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем водой
до метки и перемешивают.
Стандартный раствор 10 мкг/мл железо(III)-иона
5 мл стандартного раствора (200 мкг/мл железо(III)-иона) перед использованием
помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем водой до
метки и перемешивают.
Стандартный раствор 3 мкг/мл железо(III)-иона
15 мл стандартного раствора (20 мкг/мл железо(III)-иона) перед использованием
помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем водой до
метки и перемешивают.
Стандартный раствор 1 мкг/мл железо(III)-иона
5 мл стандартного раствора (20 мкг/мл железо(III)-иона) перед использованием
помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем водой до
метки и перемешивают.
Примечание. Определение содержания железо(Ш)-иона в железа(Ш) аммония
сульфате. Около 2,5 г железа(Ш) аммония сульфата (точная навеска)
растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора
водой до метки и перемешивают. 20 мл полученного раствора переносят
в колбу с притертой пробкой, прибавляют 10 мл хлористоводородной
кислоты и 2 г калия йодида. Смесь взбалтывают и оставляют в темном месте
на 30 мин, затем прибавляют 50 мл воды и титруют 0,1 М раствором натрия
тиосульфата (индикатор - крахмал).
1 мл 0,1 М раствора натрия тиосульфата соответствует 5,585 мг же-
лезо(Ш)-иона.
24.2. ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ (ОФС 42-0059-07)
Описанные ниже методы определения содержания примесей тяжелых металлов
(свинец, ртуть, висмут, сурьма, олово, кадмий, серебро, медь, молибден, ванадий,
рутений, платина, палладий) в лекарственных средствах основаны на
образовании окрашенных сульфидов. Кроме указанных элементов окрашенные
сульфиды дают железо в количестве более 0,05 % и мышьяк.
В качестве источника сульфидов используют раствор натрия сульфида
(метод 1) или тиоацетамидный реактив (метод 2).
После проведения реакции интенсивность окраски испытуемого раствора
сравнивают с окраской эталонного раствора. Окраска, появившаяся в испытуемом
растворе, не должна превышать окраску эталонного раствора.
Определение считается достоверным, если в эталонном растворе наблюдается
слабое коричневое окрашивание по сравнению с контрольным раствором.
1И1

Определение тяжелых металлов в растворах лекарственных средств возможно
для субстанций, образующих прозрачные, бесцветные растворы и не
влияющих на взаимодействие ионов металлов с сульфид-ионом вследствие ком-
плексообразующих свойств. В остальных случаях определение проводят из сульфатной
золы или после другого способа минерализации испытуемого
лекарственного средства, описанного в частной фармакопейной статье.
Предельно допустимое содержание тяжелых металлов, метод испытания и
условия подготовки испытуемого образца должны быть указаны в частной фармакопейной
статье.
Определение тяжелых металлов в растворах лекарственных средств
Испытуемый раствор. 10 мл раствора испытуемого образца, приготовленного,
как указано в частной фармакопейной статье.
Эталонный раствор. К 2 мл стандартного раствора свинец-иона (5 мкг/мл)
прибавляют 8 мл воды.
Контрольный раствор. 10 мл воды.
Примечание. Если при приготовлении испытуемого раствора используется
органический растворитель, то эталонный, контрольный и стандартный
растворы свинец-иона готовят с использованием того же растворителя.
Метод 1. К полученным растворам прибавляют по 1 мл уксусной кислоты
разведенной 30 %, 2 капли 2 % раствора натрия сульфида, перемешивают и
через 1 мин сравнивают окраску растворов.
В сравниваемых растворах допустима лишь слабая опалесценция от выделившейся
серы.
Метод 2. К полученным растворам прибавляют по 2 мл ацетатного буферного
раствора рН 3,5, перемешивают, прибавляют по 1 мл тиоацетамидного реактива,
перемешивают и через 2 мин сравнивают окраску растворов.
Определение тяжелых металлов в зольном остатке
органических лекарственных средств
Испытуемый раствор. Зольный остаток, полученный после сжигания 1 г
(если не указано иначе в частной фармакопейной статье) испытуемого образца
в присутствии серной кислоты концентрированной, обрабатывают при нагревании
на сетке 2 мл насыщенного раствора аммония ацетата, нейтрализованного
раствором натрия гидроксида, прибавляют 3 мл воды и фильтруют в пробирку
через беззольный фильтр, предварительно промытый 1 % раствором уксусной
кислоты, а затем горячей водой. Тигель и фильтр промывают 5 мл воды, пропуская
ее через тот же фильтр в ту же пробирку.
Эталонный раствор. В тигель помещают серную кислоту концентрированную
в количестве, взятом для сжигания испытуемого образца, и далее поступают,
как с испытуемым образцом, но промывание тигля и фильтра производят
лишь 3 мл воды, после чего к фильтрату прибавляют 2 мл стандартного раствора
свинец-иона (5 мкг/мл).
Контрольный раствор. Готовят так же, как и испытуемый раствор, но без испытуемого
образца.
вшг

БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ
25. АНОМАЛЬНАЯ ТОКСИЧНОСТЬ (ОФС 42-0060-07)
Основной тест
Испытание проводят на 5 здоровых белых мышах обоего пола массой 19-21 г,
которые ранее не использовались в экспериментах. Условия содержания и кормления
должны обеспечивать нормальную жизнедеятельность животных.
Испытуемое лекарственное средство растворяют или разводят, в случае необходимости,
раствором натрия хлорида 0,9 % для инъекций. Тест-доза должна содержаться
в объеме 0,5 мл испытуемого раствора, подогретого до 37 °С, который
вводят в хвостовую вену животного со скоростью 0,1 мл в секунду. Тест-дозу указывают
в частной фармакопейной статье. Период наблюдения за животными составляет
48 ч.
Если в частной фармакопейной статье даны иные указания, то следуют им.
Лекарственное средство выдерживает испытание, если в течение предусмотренного
срока наблюдения не погибнет ни одна из подопытных мышей.
Лекарственное средство не выдерживает испытание, если в течение предусмотренного
срока наблюдения погибнет более, чем одно животное.
В случае гибели одного животного, эксперимент повторяют на 5 мышах массой
20,0 ± 0,5 г. Если при повторном испытании не погибнет ни одна мышь, лекарственное
средство выдерживает испытание.
Тест для вакцин и сывороток
Испытание проводят на 5 здоровых белых мышах массой 17-20 г.
Испытуемое лекарственное средство вводят внутрибрюшинно в одной максимальной
разовой дозе для человека, но не более 1,0 мл каждому из животных.
Сухой лекарственный препарат растворяют прилагаемым растворителем в соответствии
с указаниями на этикетке.
Период наблюдения за животными составляет 7 сут.
Если в частной фармакопейной статье даны иные указания, то следуют им.
Лекарственное средство выдерживает испытание, если в течение предусмотренного
срока наблюдения не погибнет ни одна из подопытных мышей, ни у одного
из животных не проявятся признаки интоксикации и не будет отмечено
уменьшении массы тела.
Если более чем одно животное погибнет, лекарственное средство не выдерживает
испытание. Если одно животное погибнет, проявятся признаки интоксикации
или будет отмечено снижение массы тела, то испытание повторяют.
Лекарственное средство выдерживает испытание, если ни одно животное из второй
группы не погибнет, не проявятся признаки интоксикации и не будет отмечено
уменьшение массы тела за период наблюдения.
Испытание лекарственного средства также должно быть проведено на двух
здоровых морских свинках с массой тела 250-300 г.
Каждому животному вводят внутрибрюшинно одну максимальную разовую
дозу испытуемого лекарственного средства для человека, но не более чем 5,0 мл.
КИТ

Сухой лекарственный препарат растворяют прилагаемым растворителем в соответствии
с указаниями на этикетке.
Период наблюдения за животными составляет 7 сут.
Если в частной фармакопейной статье даны иные указания, то следуют им.
Лекарственное средство выдерживает испытание, если ни у одного из животных
не проявятся признаки интоксикации и не будет отмечено уменьшение
массы тела. Если оба животных погибнут, лекарственное средство не выдерживает
испытание. Если одно животное погибнет, проявятся признаки интоксикации
или будет отмечено снижение массы тела, то испытание повторяют.
Лекарственное средство выдерживает испытание, если ни одно животное из второй
группы не погибнет или не проявятся признаки интоксикации и не будет отмечено
уменьшение массы тела за период наблюдения.
26. ПИРОГЕННОСТЬ (ОФС 42-0061-07)
Испытание на пирогенность инъекционных растворов и субстанций,
из которых они изготавливаются, основано на измерении температуры тела
у кроликов до и после инъекции.
Содержание животных и подготовка их к проведению испытания
Каждого кролика содержат в отдельной клетке на полноценном пищевом рационе,
ограждая от раздражающих воздействий (акустических, оптических и
других). Перед испытанием проводят осмотр животных и отбирают здоровых
кроликов одного пола, не альбиносов, с массой тела от 2,0 до 3,5 кг, которые не
теряли в массе в течение предыдущей недели.
В помещениях, где находятся животные и проводятся испытания, поддерживают
постоянную температуру воздуха 20 ± 3 °С.
За 18 ч до испытания кроликов лишают корма без ограничения воды. Во
время опыта животные не получают ни корма, ни воды. Кроликов, впервые
предназначенных для опыта или не участвовавших в опыте более четырех недель,
предварительно готовят к процедуре испытания, осуществляя все рабочие
операции (осмотр, взвешивание, измерение температуры тела) за
исключением инъекции.
Кролики, ранее бывшие в опыте, могут быть использованы повторно через
трое суток, если введенное им лекарственное средство было апирогенным. При
повышении температуры тела у животного на 0,6 °С и более, кролик может быть
использован для дальнейших опытов не ранее, чем через две недели.
Если испытуемое лекарственное средство обладает антигенными свойствами,
то порядок повторного использования животных для испытаний указывают в
частной фармакопейной статье.
Материалы и оборудование
Посуда для разведения, шприцы и иглы для инъекций должны быть стерильными
и апирогенными, что обеспечивается нагреванием при температуре 250 °С в течение
30 мин или 200 °С в течение 60 мин.
Для разведения испытуемых лекарственных средств используют раствор натрия
хлорида 0,9 % для инъекций, если в частной фармакопейной статье не указан другой
растворитель. Все растворители должны быть стерильными и апирогенными.
д а

Ректальную температуру у кроликов измеряют с точностью до 0,1 °С медицинским
максимальным ртутным или электронным термометром с термочувствительным
датчиком. Термометр или датчик вводят в прямую кишку кролика
на глубину от 5 до 7,5 см в зависимости от массы тела животного.
Введение испытуемого лекарственного средства
Испытуемое лекарственное средство вводят в ушную вену кролика, если в
частной фармакопейной статье не указан другой путь введения. Объем инъецируемого
раствора должен составлять не менее 0,2 мл и не более 10 мл на 1,0 кг
массы тела животного. Перед введением раствор подогревают до 37,0 ± 2 °С.
Весь объем лекарственного средства вводят за период времени не более 2 мин.
Тест-дозу испытуемого лекарственного средства, объем вводимого раствора
и, если необходимо, скорость введения указывают в частной фармакопейной
статье.
Проведение испытания
Испытание лекарственного средства проводят на группе из трех кроликов с
исходной температурой 38,5-39,5 °С.
Перед опытом, с интервалом не менее 30 мин, у каждого кролика дважды измеряют
температуру тела. Различия в показаниях температуры у одного и того
же животного не должны превышать 0,2 °С. В противном случае кролика исключают
из испытания. За исходную температуру принимают величину последнего
результата измерения.
Раствор испытуемого лекарственного средства вводят животным сразу после
второго измерения температуры.
Измерения температуры после внутривенного введения испытуемого лекарственного
средства проводят с интервалом не более 30 мин на протяжении
трех часов. При других путях парентерального введения - на
протяжении пяти часов.
Учет результатов
Испытание лекарственного средства можно проводить поэтапно.
На каждом этапе используют трех кроликов. Максимальное число этапов
не должно превышать четырех.
По окончании каждого из этапов испытания определяют максимальное изменение
температуры (At) тела у кролика по сравнению с исходным значением.
Изменение температуры тела животного ниже исходной величины принимают
за нуль и не учитывают.
Для трех кроликов определяют сумму индивидуальных максимальных повышений
температур (2 At). Значения . At, полученные на разных этапах испытания,
последовательно суммируют, а результаты сравнивают с уровнями,
указанными в табл. 26.1.
• После первого этапа испытания лекарственное средство признают апи-
рогенным, если полученный результат меньше или равен 1,2 °С
(колонка 3), а индивидуальное повышение температуры ни у одного из кроликов
не превышает 0,5 °С (колонка 4).
• Если результат, полученный на первом этапе, превышает 1,2 °С (колонка 5)
или зарегистрировано индивидуальное повышение температуры более 0,5 °С •
визу

хотя бы у одного из трех кроликов (колонка 6), то необходимо перейти к проведению
следующего этапа испытания.
• После второго этапа испытания лекарственное средство признают апи-
рогенным, если полученный результат меньше или равен 2,8 °С
(колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 °С отмечено
не более, чем у одного из шести кроликов (колонка 4).
• Если результат, полученный на втором этапе испытания, больше 2,8 °С,
но меньше 4,3 °С (колонка 5), или зарегистрировано индивидуальное повышение
температуры свыше 0,5 °С более, чем у одного животного (колонка 6),
то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.
• После третьего этапа испытания лекарственное средство признают апи-
рогенным, если полученный результат меньше или равен 4,5 °С (колонка 3),
а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 °С отмечено не более,
чем у двух из девяти кроликов (колонка 4).
• Если результат, полученный на третьем этапе испытания, больше 4,5 °С, но
меньше 6,0 °С (колонка 5), или зарегистрировано индивидуальное повышение
температуры свыше 0,5 °С более, чем у двух животных (колонка 6), то необходимо
перейти к проведению следующего этапа испытания.
• После четвертого этапа испытания лекарственное средство признают
апирогенным, если полученный результат меньше или равен 6,6 °С
(колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 °С отмечено
не более, чем у трех из двенадцати кроликов (колонка 4).
• Лекарственное средство признают пирогенным, если результат на втором
или последующих этапах испытания выше, чем величины, указанные в колонке
7.
• Лекарственное средство признают пирогенным и в том случае, если в результате
четырех этапов испытания зарегистрировано индивидуальное повышение
температуры свыше 0,5 °С более, чем у трех кроликов из двенадцати.
Таблица 26.1
Оценка результатов испытания
Этап
;
I
II
III
IV
Общее
количество
животных
2
3
6
9
12
Оценка результатов испытания (L At)
Лекарственное средство
признают апирогенным
если . At
3
<1,2
<2,8
<4,5
<6,6
при числе
животных
с повышением
At > 0,5 "С
не более
4
1
2
3
Повторное испытание
(перестановку) проводят
если . At
5
>1,2
>2,8,
но < 4,3
>4,5,
но < 6,0
—
при числе
животных
с повышением
At > 0,5 "С
6
>1
>1
>2
—
Лекарственное
средство
признают
пирогенным,
если . At
7
>4,3
>6,0
6,6*
* При индивидуальном повышении температуры свыше 0,5 °С более чем у трех кроликов из двенадцати, лекарственное
средство признают пирогенным.

27. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ЭНДОТОКСИНЫ (ОФС 42-0062-07)
Настоящая статья описывает метод определения бактериальных эндотоксинов
в лекарственных препаратах, предназначенных для парентерального применения,
и субстанциях, используемых для их изготовления.
Определение содержания бактериальных эндотоксинов проводят с помощью
реактива, представляющего собой лизат клеток крови (амебоцитов) мечехвоста
Limulus polyphemus (ЛАЛ-реактив) или Tachypleus tridentatus (ТАЛ-реактив).
В результате реакции с эндотоксином происходит помутнение реакционной
смеси и увеличение ее вязкости вплоть до формирования плотного геля, образование
которого служит индикатором наличия в пробе бактериальных эндотоксинов.
Проводимый таким образом анализ называется гель-тромб тест. Этот
метод может быть использован для определения соответствия содержания бактериальных
эндотоксинов предельному содержанию бактериальных эндотоксинов,
указанному в частной фармакопейной статье («Метод А. Качественный
анализ»), и для определения содержания бактериальных эндотоксинов в испытуемом
лекарственном средстве («Метод В. Количественный анализ»).
Качественный анализ является основным методом проведения анализа на
соответствие показателю «Бактериальные эндотоксины». Этот же метод является
арбитражным.
Допускается использование других методов и/или модификаций
ЛАЛ-теста, если они указаны в частной фармакопейной статье и валидированы
для данного лекарственного средства.
Посуда и ее подготовка
Стеклянная и пластиковая посуда, используемая в ЛАЛ-тесте, не должна содержать
бактериальные эндотоксины в количествах, определяемых в тесте, и не
должна оказывать влияния на ход реакции.
Рекомендуемым режимом депирогенизации является нагревание при температуре
250 °С не менее 30 мин в соответствии с валидированной процедурой.
Стандарты эндотоксина
Содержание бактериальных эндотоксинов выражается в единицах эндотоксина
(ЕЭ) Международного стандарта эндотоксина. При проведении анализа
может использоваться Контрольный стандарт эндотоксина (КСЭ) активность которого
установлена по Международному стандарту эндотоксина.
Контрольный стандарт эндотоксина должен быть предназначен для проведения
анализа с данной партией ЛАЛ-реактива (ТАЛ-реактива)1. Растворение и
хранение КСЭ осуществляют согласно инструкции фирмы-производителя.
ЛАЛ-реактив
Необходимо использовать ЛАЛ-реактив, предназначенный для проведения
фармакопейного анализа с помощью гель-тромб теста. В случае проведения
анализа методом, отличным от основного, необходимо использовать реактив,
предназначенный для данного метода.
Чувствительность реактива (X) выражена в единицах эндотоксина [ЕЭ/мл] и
соответствует минимальной концентрации Международного стандарта
1 Контрольный стандарт эндотоксина и ЛАЛ-реактив или ТАЛ-реактив должны быть зарегистрированы в Минздравсоцраз-
вития РФ.

эндотоксина, которая вызывает образование плотного геля при реакции с данным
реактивом.
ЛАЛ-реактив представляет собой лиофилизированный препарат. Растворение
и хранение реактива осуществляют согласно инструкции фирмы-производителя.
Вода для ЛАЛ-теста
Для приготовления растворов реактивов и разведений испытуемого лекарственного
средства используют воду для ЛАЛ-теста. Вода для ЛАЛ-теста
должна соответствовать требованиям, предъявляемым к воде для инъекций, и
при этом не должна содержать бактериальные эндотоксины в количествах, определяемых
в тесте.
Максимально допустимое разведение испытуемого лекарственного средства
Максимально допустимое разведение (МДР) представляет собой наибольшее
разведение испытуемого лекарственного средства, в котором возможно определение
концентрации эндотоксина, соответствующей значению предельного содержания
бактериальных эндотоксинов, установленному для данного
лекарственного средства.
Испытуемое лекарственное средство может быть проверено в одном разведении
или в серии разведений при условии, что конечная степень разведения не
превысит значения МДР, которое рассчитывается по формуле:
Предельное содержание Концентрация
бактериальных эндотоксинов испытуемого раствора
МДР =
X
где:
предельное содержание бактериальных эндотоксинов - допустимое содержание
бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном средстве, указанное
в частной фармакопейной статье;
концентрация испытуемого раствора - концентрация лекарственного средства
или действующего вещества, для которого указано предельное содержание
бактериальных эндотоксинов;
Х- чувствительность ЛАЛ-реактива [ЕЭ/мл].
Для расчета предельного содержания бактериальных эндотоксинов используют
следующую формулу:
К
Предельное содержание бактериальных эндотоксинов = ~Т7 ,
где:
М - максимальная терапевтическая доза испытуемого лекарственного средства,
вводимая в течение одного ч (в мг, мл, ЕД на 1 кг массы тела). Дозу, выраженную
на 1 м2, пересчитывают с учетом того, что поверхность человека со
средней массой тела 70 кг составляет 1,8 м2;
К - пороговая пирогенная доза, равная 5 ЕЭ/кг в 1 ч для испытуемого лекарственного
препарата, если он вводится пациенту любым парентеральным путем,
д а

кроме интратекального. При интратекальном пути введения лекарственного препарата
К составляет 0,2 ЕЭ/кг.
Для радиофармацевтических лекарственных препаратов, вводимых парентерально
(внутривенно), предельное содержание бактериальных эндотоксинов
рассчитывается, как 175/V, где V - максимальная рекомендованная доза в мл.
Для радиофармацевтических лекарственных препаратов, вводимых интрате-
кально, предельное содержание бактериальных эндотоксинов равняется 14/V.
Для субстанций рассчитывают предельное содержание бактериальных эндотоксинов,
используя величину М, выбранную для лекарственной формы.
Подготовка испытуемого образца
Каждый отобранный образец испытывается индивидуально.
Для растворения и/или разведения испытуемого лекарственного средства используют
воду для ЛАЛ-теста, если не указано иного в частной фармакопейной
статье. Испытуемый раствор должен иметь рН в пределах, указанных производителем
ЛАЛ-реактива, обычно 6,0-8,0. В случае необходимости рН доводят растворами
кислоты, основания или с помощью буферного раствора.
Используемые растворы не должны содержать бактериальные эндотоксины в
количествах, определяемых в тесте, и не должны оказывать влияния на ход реакции.
Процедура анализа
В круглодонные пробирки диаметром 10 мм вносят равные объемы ЛАЛ-реактива
и испытуемого раствора (по 0,1 мл). Реакционные смеси аккуратно перемешивают
и инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 60 ± 2 мин. Во
время инкубирования следует избегать вибрации и ударов. По истечении указанного
срока визуально регистрируют результаты как положительные или отрицательные.
Положительная реакция (+) характеризуется образованием плотного
геля, который не разрушается при аккуратном однократном переворачивании
пробирки на 180°. Отрицательная реакция (-) характеризуется отсутствием такого
геля.
ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ АНАЛИЗЫ
Для подтверждения достоверности и точности результатов определения бактериальных
эндотоксинов, проводимых с помощью ЛАЛ-реактива, необходимо
подтвердить чувствительность реактива, указанную на этикетке, а также убедиться
в том, что испытуемое лекарственное средство не содержит факторов,
мешающих проведению реакции.
Подтверждение заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива
Анализ проводят для каждой новой серии используемого ЛАЛ-реактива, а
также при изменении условий эксперимента, используемых материалов и реактивов,
способных повлиять на результаты теста.
Процедура. Для проведения анализа готовят растворы С и D по схеме, приведенной
в табл. 27.1.
ЕШ

Таблица 27.1
Схема эксперимента
«Подтверждение заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива»
Раствор
С
D
Исходный раствор
Раствор КСЭ в воде
для ЛАЛ-теста
с концентрацией 2Х
Вода для
ЛАЛ-теста
Растворитель
Вода для ЛАЛ-
теста
-
Фактор
разведения
1
2
4
8
-
Конечная концентрация
КСЭ
в испытуемом
растворе
21
IX
0,5Х
0,25А.
-
Количество
повторностей
4
4
4
4
2
Растворы С - серия разведений КСЭ в воде для ЛАЛ-теста (проверка чувствительности
ЛАЛ-реактива).
Раствор D - Вода для ЛАЛ-теста (отрицательный контроль).
Опыт проводят, как описано в разделе Процедура анализа.
Результаты и интерпретация. Анализ считают достоверным, если:
- для раствора D (отрицательный контроль) во всех повторностях получены
отрицательные результаты;
- для раствора С с концентрацией 0,25Х получены отрицательные результаты.
Конечной точкой реакции для каждой из повторностей растворов С является
положительный результат, полученный для раствора с наименьшей концентрацией
КСЭ. По этим результатам рассчитывается среднее геометрическое значение
чувствительности ЛАЛ-реактива по следующей формуле:
Среднее геометрическое значение ^
концентраций КСЭ в конечной точке = antilog ("%^ ),
реакции
где Е е - сумма логарифмов концентраций КСЭ в конечной точке реакции в
каждой из повторностей, /— число повторностей.
Заявленная чувствительность ЛАЛ-реактива считается подтвержденной и используется
в дальнейших расчетах в том случае, если полученное
в эксперименте значение чувствительности ЛАЛ-реактива не менее 0,5Х
и не более 2Х.
Мешающие факторы
Испытуемое лекарственное средство может содержать мешающие факторы,
усиливающие и/или ингибирующие реакцию ЛАЛ-реактива с бактериальными
эндотоксинами. Обнаружить эти явления можно, сравнив способность используемого
ЛАЛ-реактива реагировать с раствором КСЭ в воде для ЛАЛ-теста и в
растворе испытуемого лекарственного средства в стандартных условиях проведения
эксперимента.
Испытанию может быть подвергнуто лекарственное средство в любом
1И1

разведении, не превышающем значения МДР. Используемые в данном анализе
пробы испытуемого лекарственного средства (или его разведения) не должны
содержать бактериальных эндотоксинов в определяемых в тесте количествах.
Процедура. Для проведения анализа готовят растворы A-D по схеме, приведенной
в табл. 27.2.
Раствор А - испытуемое лекарственное средство в выбранном разведении
(контроль отсутствия бактериальных эндотоксинов).
Растворы В — серия разведений КСЭ в растворе испытуемого лекарственного
средства (выявление возможности ингибирования или усиления реакции).
Растворы С - серия разведений КСЭ в воде для ЛАЛ-теста (контроль чувствительности
ЛАЛ-реактива).
Раствор D - вода для ЛАЛ-теста (отрицательный контроль).
Таблица 27.2
Схема эксперимента «Мешающие факторы»
Раствор
А
В
С
D
Исходный раствор
Испытуемое
лекарственное средство
Испытуемое
лекарственное средство,
содержащее КСЭ
в концентрации 2Х
Раствор КСЭ в воде для
ЛАЛ-теста с концентрацией
2Х
Вода для ЛАЛ-теста
Растворитель
-
Испытуемое
лекарственное
средство
Вода для
ЛАЛ-теста
-
Фактор
разведения
-
1
2
4
8
1
2
4
8
-
Конечная
концентрация
эндотоксина
в испытуемом
растворе
-
2Х
IX
0,5Х
0,25Х
2Х
IX
0,5Х
0,25Х
-
Количество
повторностей
4
4
4
4
4
2
2
2
2
2
Опыт проводят, как описано в разделе Процедура анализа.
Результаты и интерпретация. Результаты эксперимента считаются достоверными,
если:
- для раствора D получены отрицательные результаты во всех повторностях;
- для растворов С (контроль чувствительности ЛАЛ-реактива) среднее геометрическое
значение концентрации бактериальных эндотоксинов составляет
не менее 0,5Х и не более 2Х;
- для раствора А получены отрицательные результаты во всех повторностях.
По результатам, полученным для каждой из повторностей растворов В, рассчитывают
среднее геометрическое значение чувствительности ЛАЛ-реактива.
Расчет проводят, как описано в разделе Подтверждение заявленной чувствительности
ЛАЛ-реактива. Если полученное среднее значение оказалось не
менее 0,5А. и не более 2Х, испытуемое лекарственное средство в выбранном разведении
не содержит мешающих факторов, способных ингибировать и/или усиливать
реакцию ЛАЛ-реактива с бактериальными эндотоксинами, и может быть
подвергнуто анализу на содержание бактериальных эндотоксинов.
Ш5Г~

Если присутствие мешающих факторов обнаружено для испытуемого лекарственного
средства, которое проверялось в разведении, меньшем МДР, анализ
повторяют в большем разведении, вплоть до разведения, равного МДР. В большинстве
случаев дополнительное разведение испытуемого лекарственного средства
способно снять действие мешающих факторов. Использование
ЛАЛ-реактива большей чувствительности позволяет увеличить степень разведения.
Действие мешающих факторов может быть преодолено соответствующей обработкой,
например, фильтрацией, нейтрализацией, диализом или температурной
обработкой. Выбранный способ удаления мешающих факторов не должен
изменять концентрацию бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном
средстве, поэтому КСЭ к раствору испытуемого лекарственного средства
добавляют перед проведением такой обработки, после чего проводят анализ
Мешающие факторы. Если после обработки выбранным способом результаты
анализа Мешающие факторы окажутся удовлетворительными, то испытуемое
лекарственное средство может быть подвергнуто анализу на содержание бактериальных
эндотоксинов.
Если испытуемое лекарственное средство нельзя освободить от мешающих
факторов, оно не может быть исследовано на предмет содержания бактериальных
эндотоксинов с помощью ЛАЛ-теста.
КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ (МЕТОД А)
Задачей этого анализа является подтверждение того, что содержание бактериальных
эндотоксинов в испытуемом образце не превышает значения предельного
содержания бактериальных эндотоксинов, указанного в частной
фармакопейной статье.
Анализ проводят с лекарственным средством в одном разведении, в котором
был проведен анализ Мешающие факторы, или в большем разведении, но не
превышающем значения МДР.
Процедура. Для проведения анализа готовят растворы A-D по схеме, приведенной
в табл. 27.3.
Раствор А - испытуемое лекарственное средство в разведении, в котором отсутствуют
мешающие факторы, или в большем разведении, не превышающем
МДР.
Раствор В - испытуемое лекарственное средство в выбранном разведении, к
которому добавлен КСЭ. Конечная концентрация эндотоксина в анализируемом
растворе должна составлять Ik (положительный контроль испытуемого лекарственного
средства).
Раствор С - раствор КСЭ в воде для ЛАЛ-теста с конечной концентрацией 2Х
(положительный контроль).
Раствор D - вода для ЛАЛ-теста (отрицательный контроль).
Анализ проводят, как описано в разделе Процедура анализа.

Таблица 27.3
Схема эксперимента «Качественный анализ»
Раствор
А
В
С
D
Исходный раствор
Испытуемое лекарственное средство
Испытуемое лекарственное средство,
содержащее КСЭ в концентрации 2Х
Раствор КСЭ в воде
для ЛАЛ-теста с концентрацией 2Х
Вода для ЛАЛ-теста
Конечная концентрация
эндотоксина (КСЭ)
в испытуемом растворе
-
2Х
2Х
-
Количество
повторностей
2
2
2
2
Результаты и интерпретация. Анализ считают достоверным, если:
- для раствора D (отрицательный контроль) получены отрицательные результаты
в обеих повторностях;
- для раствора С (положительный контроль) во всех повторностях получены
положительные результаты;
- для раствора В (положительный контроль испытуемого образца) в обеих
повторностях получены положительные результаты.
Если для раствора А в обеих повторностях получены отрицательные результаты,
лекарственное средство считают выдержавшим испытания.
Если для испытуемого лекарственного средства в разведении, меньшем МДР,
в обеих повторностях получены положительные результаты, анализ следует повторить
в разведении, равном МДР.
Если для испытуемого лекарственного средства в разведении, равном МДР, в
обеих повторностях получены положительные результаты, то лекарственное
средство не соответствует требованиям раздела «Бактериальные эндотоксины»
частной фармакопейной статьи.
Если положительный результат получен в одной из повторностей
для раствора А, то проводят повторный анализ. Лекарственное средство считается
выдержавшим испытания, если в повторном анализе для обеих повторностей
получены отрицательные результаты.
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ (МЕТОД В)
Задачей этого анализа является определение содержания бактериальных эндотоксинов
в испытуемом лекарственном средстве. Для этого используется
серия последовательных разведений испытуемого лекарственного средства, начиная
с того разведения, для которого был проведен анализ Мешающие факторы,
или большего, но не превышающего МДР.
Процедура. Для проведения анализа готовят растворы A-D по схеме, приведенной
в табл. 27.4.
Растворы А - разведение испытуемого лекарственного средства, начиная с
разведения, в котором отсутствуют мешающие факторы, до наибольшего разведения,
не превышающего МДР.
Раствор В - испытуемое лекарственное средство в наименьшем из проверяемых
в тесте разведений, к которому добавлен раствор КСЭ. Конечная
ЕЛ

концентрация эндотоксина в анализируемом растворе должна составлять Тк (положительный
контроль испытуемого лекарственного средства).
Растворы С - серия разведений КСЭ в воде для ЛАЛ-теста (контроль чувствительности
ЛАЛ-реактива).
Раствор D - вода для ЛАЛ-теста (отрицательный контроль).
Анализ проводят, как описано в разделе Процедура анализа.
Таблица 27.4
Схема эксперимента «Количественный анализ»
Раствор
А
В
С
D
Исходный раствор
Испытуемое
лекарственное
средство
Испытуемое лекарственное
средство,
содержащее КСЭ
в концентрации 2Х
Раствор КСЭ
в воде для ЛАЛ-теста с
концентрацией 2Х
Вода для ЛАЛ-теста
Растворитель
Вода для
ЛАЛ-теста
Испытуемое
лекарственное
средство
Вода для
ЛАЛ-теста
-
Фактор
разведения
1
2
4
8
и т.д.
ДоМДР
1
1
2
4
8
-
Конечная концентрация
КСЭ
в испытуемом
растворе
-
2Х
2Х
IX
0,5).
0,25Х
-
Количество
повторностей
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Результаты и интерпретация. Анализ считают достоверным, если:
- для раствора D (отрицательный контроль) получены отрицательные результаты
в обеих повторностях;
- для растворов С (контроль чувствительности ЛАЛ-реактива) среднее геометрическое
значение концентрации бактериальных эндотоксинов составляет
не менее 0,5>, и не более Тк;
- для раствора В (положительный контроль испытуемого образца) получены
положительные результаты в обеих повторностях;
- для растворов А конечной точкой реакции является положительный результат,
полученный для наибольшего разведения испытуемого лекарственного
средства.
Значение произведения фактора этого разведения на величину чувствительности
ЛАЛ-реактива (к) равно концентрации эндотоксина в растворе А, полученной
для данной повторности. Среднее геометрическое значение
концентрации эндотоксина рассчитывают, как описано в разделе Подтверждение
заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива.
Если во всех повторностях серии растворов А получены отрицательные результаты,
то концентрация бактериальных эндотоксинов в испытуемом
пая

лекарственном средстве менее чувствительности ЛАЛ-реактива, умноженной
на наименьший фактор разведения.
Если во всех повторностях серии растворов А получены положительные результаты,
то концентрация бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном
средстве более чувствительности ЛАЛ-реактива, умноженной на
наибольший фактор разведения.
Лекарственное средство считают выдержавшим испытания, если определенное
в эксперименте среднее значение содержания бактериальных эндотоксинов
менее значения предельного содержания бактериальных эндотоксинов, указанного
в частной фармакопейной статье.
28. ИСПЫТАНИЕ НА ГИСТАМИН (ОФС 42-0063-07)
Настоящая статья распространяется на определение содержания гистамина
in vitro в лекарственных средствах для парентерального применения.
Подготовка изолированного органа
В опыт берут морскую свинку-самца с массой тела 200 -ь 350 г. За 24 ч до эксперимента
животное лишают пищи, но оставляют воду. После эвтаназии свинку
обескровливают путем декапитации. Вскрывают брюшную полость от лонного
сочленения до грудины и находят слепую кишку. Место ее перехода в ободочную
кишку является ориентиром при поиске подвздошной кишки, которая отходит от
слепой за 1 -^ 2 см до этого места.
Для того чтобы извлечь подвздошную кишку, тупым зажимом или пинцетом
плотно захватывают ее основание и отрезают ножницами. Отсеченный конец
кишки слегка приподнимают, а затем без натяжения и, не перехватывая ее, отсекают
ткань брыжейки маленькими разрезами при помощи тупоконечных ножниц.
Остатки брыжейки удалять не следует. Все манипуляции с подвздошной
кишкой следует проводить осторожно, не растягивая ее. Для эксперимента пригоден
дистальный участок подвздошной кишки, исключая 10^-15 см, ближайшие
к слепой кишке.
Подвздошную кишку нарезают на равные части (около 6 см каждая)
и помещают в чашку Петри с гипокальциевым раствором Тироде (примечание
1). Им осторожно промывают полученные отрезки с помощью шприца или
резиновой груши с пастеровской пипеткой с затупленным концом до полного
удаления содержимого кишечника. Промытые отрезки подвздошной кишки помещают
в чистый гипокальциевый раствор Тироде. Они могут быть использованы
сразу или храниться в течение 24 ч при температуре от +2 до +4 °С
(примечание 2).
Непосредственно перед экспериментом промытый отрезок кишки разрезают
до длины, требуемой условиями эксперимента (10 мм при использовании электронного
датчика или 20 мм при использовании механического рычага и кимографа).
|ЕТЗГ

Приготовление разведений стандартного образца и испытуемого
лекарственного средства1
/. Разведения стандартного образца
В качестве стандартного образца используют гистамина дигидрохлорид в
трех разведениях: разведение 1 (1,25 х 1СИ г/мл); разведение 2 (2,50 х 10"6 г/мл)
я разведение 3 (5,00 х Ю-6 г/мл), вызывающие 50, 75 и 100 % сокращение кишки
соответственно. В качестве растворителя используют 0,9 % раствор натрия
хлорида.
2. Разведение испытуемого препарата (ИП)
Испытанию подвергают неразведенный ИП, когда максимально допустимая
нормативной документацией концентрация гистамина в неразведенном лекарственном
средстве находится в диапазоне от 1,25 х Ю-6 г/мл до
2,50 х 10-6 г/мл. При необходимости ИП разводят 0,9 % раствор натрия хлорида
таким образом, чтобы предполагаемая концентрация гистамина дигидрохлорида
в разведении ИП составляла 2,50 х Ю^г/мл.
Регистрирующая система
Для регистрации сокращений изолированного отрезка подвздошной кишки
морской свинки в изотонических условиях в ответ на введение стандартного образца
и ИП используют регистрирующую систему, состоящую из термостати-
руемой ванночки с гипокальциевым раствором Тироде (35 °С), а также
электронного датчика с самописцем или механического рычага с кимографом.
Ванночку аэрируют карбогеном (95 % 0 2 и 5 % С02) или воздухом. Нагрузка
обычно составляет 500 + 800 мг. В случае использования механического рычага,
для ее вычисления следует применять правило равновесия:
Сила х Плечо силы = Нагрузка х Плечо нагрузки.
Проведение опыта
Изолированный отрезок подвздошный кишки помещают в ванночку и прикрепляют
к регистрирующей системе с помощью лигатуры по диагонали за противоположные
концы: один - к крючку на дне ванночки, а другой - к датчику
или рычагу. Прикладывают к отрезку нагрузку и оставляют его в покое на
30 мин. За это время необходимо не менее трех раз сменить в ванночке раствор
Тироде.
1. Адаптация изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки
к субмаксимальной дозе гистамина
В термостатируемую ванночку вводят стандартный образец в разведении 3 в
объеме, равном 1/100 от ее емкости. Через 30 с (время экспозиции) ванночку
промывают тройным объемом раствора Тироде. После первого отмывания проводят
второе таким же объемом раствора. Не менее чем через 4 мин после первого
введения снова повторяют цикл «введение-экспозиция-два отмывания».
Эти циклы повторяют до тех пор, пока не получат не менее двух одинаковых
пиков. Их высоту принимают за 100 % (примечание 3). Интервалы между
1 В дальнейшем, для удобства, испытуемое лекарственное средство будет называться «испытуемый препарат».
ЖЕЯ

введениями испытуемого вещества и между двумя отмываниями должны быть
постоянными.
2. Испытание ИП на гистамин
Предварительное испытание
После достижения постоянной величины ответа отрезка кишки на введение
стандартного образца в разведении 3, проводят испытание ИП на гистамин. Для
этого с интервалом не менее 4 мин однократно, в случайном порядке вводят
стандартный образец в разведении 1, разведении 3 и ИП. Циклы «введение-экс-
позиция-два отмывания» такие же, как и при проведении адаптации органа к
субмаксимальной дозе.
В случае если пик, полученный в ответ на введение ИП, по высоте не меньше,
чем пик стандартного образца в разведении 1, проводят количественное определение
содержания гистамина в ИП (2.1). Если пик, полученный в ответ на введение
ИП, меньше пика стандартного образца в разведении 1 или вообще
отсутствует, проводят контрольное испытание (2.2).
2.1. Количественное испытание ИП на гистамин
В случайном порядке поочередно вводят стандартный образец в разведении 1,
разведении 3 и ИП до получения не менее чем четырех пиков в ответ на введение
каждого раствора. Находят среднее значение ответа отрезка кишки на каждый
раствор. С помощью регрессионного анализа вычисляют параметры
линейной зависимости среднего ответа кишки на стандартный образец от логарифма
его концентрации. Затем, подставляя полученные значения этих параметров
в уравнение регрессии, вычисляют, какой концентрации гистамина в
разведении ИП соответствует средняя высота его пика и, исходя из этого, рассчитывают
содержание гистамина в неразведенном ИП (см. подраздел «Статистическая
обработка результатов испытания на гистамин» общей фармакопейной
статьи «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических
испытаний»).
ИП считают прошедшим испытание, если найденное содержание гистамина
не превышает максимально допустимое нормативной документацией
(коэффициент пересчета с гистамина дигидрохлорида на гистамин-основание
равен 0,6038).
2.2. Контрольное испытание
Схема его проведения такая же, как и при количественном определении содержания
гистамина в ИП, за исключением того, что вместо ИП используют
стандартный образец в разведении 2. Если средняя высота его пика соответствует
вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном разведении
(2,50 х Ю-6 г/мл), то результаты опыта следует признать достоверными.
Результаты опыта следует признать недостоверными в каждом из следующих
случаев:
1) Средняя высота пика стандартного образца в разведении 2 не соответствует
вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном разведении
(2,50 х 10-6 Г/МЛ)
2) При количественном определении содержания гистамина в ИП отсутствует
воспроизводимость ответов отрезка кишки на введение ИП.
EpEI

3) В процессе эксперимента наблюдается статистически значимое снижение высоты
пиков в ответ на серию введений одного и того же раствора (примечание 4).
В каждом из этих трех случаев следует провести испытание ИП на вещества
депрессорного действия (см. «Испытание на депрессорные вещества»).
Примечания
1. Состав и приготовление гипокалъциевого раствора Тироде
Состав:
NaCl 80,00 г
NaHC03 10,00 г
D-глюкоза 11,00 г
КС1 2,00 г
СаС12-2Н20 1,30 г
MgCl2-6H20 2,10 г
NaH2P04 • Н20 0,58 г
Воды дистиллированной до Юл
Приготовление
В мерном цилиндре объемом 1 л растворяют в дистиллированной воде навески
NaCl, NaHC03 и D-глюкозы в любом порядке. Доводят объем раствора водой
до 1 л и переливают содержимое цилиндра в 10-литровый стеклянный или полиэтиленовый
сосуд с притертой пробкой или завинчивающейся крышкой.
Таким же образом, но по отдельности, каждую из оставшихся навесок растворяют
в 1 л воды дистиллированной и по очереди переносят в тот же 10-литровый
сосуд, строго придерживаясь следующего порядка:
1)КС1
2) СаС12- 2Н20
3) MgCl2- 6Н20
4) NaH2P04- H20
Затем доливают воду дистиллированную до отметки 10 л и вновь тщательно
перемешивают.
Полученный раствор может храниться при температуре от +3 до +5 °С не
более 24 ч. Помутнение недопустимо.
Помутневший раствор следует вылить, тщательно промыть сосуд в проточной
воде и прополоскать дистиллированной водой. Поверхностно активные моющие
средства применять нельзя.
2. Сосуд, в котором находятся отрезки подвздошной кишки при хранении,
плотно не закрывают, а затягивают двойным слоем марли, чтобы обеспечить доступ
воздуха. Перед тем как отрезки использовать в опыте, их следует подготовить.
Для этого сосуд в течение 10 мин выдерживают при комнатной
температуре и в течение 20 мин в термостате (35 °С). После нагревания из
отрезка следует удалить слизь. Это достигается легкими поглаживающими движениями
в продольном направлении.
тая

4. Каждую серию, состоящую не менее чем из четырех пиков, полученных в
результате введения одного и того же раствора, следует проверять на дрейф с
помощью теста Нойманна:
D = —И ,
"2>2-(2>J
где: х - высота пика на введение одного и того же раствора;
п - число пиков, полученных в результате введения одного и того же раствора.
Значение D должно быть (р<0,05):
при п = 4 - меньше 0,78;
при п = 5 - меньше 0,82;
при п = 6 - меньше 0,89.
29. ИСПЫТАНИЕ НА ДЕПРЕССОРНЫЕ ВЕЩЕСТВА (ОФС 42-0064-07)
Настоящая статья распространяется на определение веществ депрессорного
действия in vivo в лекарственных средствах для парентерального применения.
Подготовка животного к опыту
В опыт берут здоровых кошек любого пола массой не менее 2 кг. Самки не
должны быть беременными или лактирующими. За 24 ч до опыта животное лишают
корма, но оставляют свободный доступ к воде. В качестве наркоза используют
гексенал в дозе 350 ¦*- 400 мг/кг, который вводят внутримышечно.
Можно использовать любой другой наркоз, не оказывающий существенное влияние
на величину артериального давления.
Животное фиксируют в станке в положении на спине. Препарируют сонную
артерию, в которую вставляют канюлю, заполненную раствором, предупреждающим
свертывание крови (в качестве антикоагулянта используют 25 % раствор
магния сульфата или раствор гепарина, содержащий 50 ЕД в 1 мл и др.).
Канюлю соединяют при помощи системы трубок, заполненных тем же раствором,
с ртутным манометром или электронным датчиком для регистрации кровяного
давления. Запись давления производят на ленте кимографа или другого
регистрирующего устройства. Испытуемое лекарственное средство1 вводят
через иглу, вставленную в отпрепарированную бедренную вену.
Приготовление разведений стандартного образца
испытуемого препарата (ИП)
В качестве стандартного образца используют гистамина дигидрохлорид. Все
разведения следует проводить в пересчете на гистамин-основание (коэффициент
пересчета с гистамина дигидрохлорида на гистамин-основание равен 0,6038).
Для разведения стандартного образца используют тот же растворитель, что и
1 В дальнейшем, для удобства, испытуемое лекарственное средство будет называться «испытуемый препарат».
ипт

для ИП: воду для инъекций или 0,9 % изотонический раствор натрия хлорида
для инъекций, в зависимости от растворителя, указанного в соответствующем
частном нормативном документе. Концентрация рабочих разведений стандартного
образца в пересчете на гистамин-основание должна составлять 0,5 мкг/мл
{разведение /) и 1,0 мкг/мл {разведение 2).
Проведение опыта
Введение растворов на протяжении всего опыта проводят со скоростью 0,1 мл
в секунду и интервалом между введениями не менее 5 мин.
В начале опыта проверяют чувствительность животного к гистамину. Для
этого в вену последовательно вводят стандартный образец в разведении 1 к разведении
2 в объеме 0,2 мл на 1 кг массы. Животных, у которых при введении
стандартного образца в разведении 2 в дозе 0,2 мкг на 1 кг массы величина артериального
давления снизится менее чем на 20 мм рт. ст., из опыта исключают.
После проверки чувствительности животного к гистамину определяют величину
гипотензивной реакции введением стандартного образца в разведении 1 в
объеме 0,2 мл раствора на 1 кг массы тела. Введение гистамина повторяют, пока
при двух последовательных введениях не будет получено одинаковое снижение
артериального давления, которое принимают за стандартное в данных условиях
опыта.
Затем кошке однократно вводят раствор ИП. Тест-доза и растворитель указаны
в частном нормативном документе.
ИП считают выдержавшим испытание, если снижение артериального давления
после введения тест-дозы не превышает реакции на введение стандартного
образца в разведении 1.
При испытании на одном животном двух и более ИП необходимо периодически
проводить определение величины снижения артериального давления в ответ
на введение стандартного образца в разведении 1. В случае значительного уменьшения
величины реакции артериального давления по сравнению со стандартной
величиной, полученной в начале опыта, необходимо вновь проверить
чувствительность животного к действию стандартного образца в разведении 2,
как описано выше. Если снижение артериального давления при этом будет не
менее 20 мм рт. ст., испытание ИП продолжают в соответствии с указанными
выше требованиями.
30. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ
ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ СЕРДЕЧНЫЕ
ГЛИКОЗИДЫ (ОФС 42-0065-07)
Биологической оценке подлежат:
1. Листья наперстянки пурпуровой, крупноцветковой и их лекарственные препараты.
2. Лекарственные препараты наперстянки шерстистой.
3. Трава, лекарственные препараты горицвета.
ЖИМ

4. Трава, листья, цветки ландыша, лекарственные препараты ландыша, сложные
лекарственные формы, содержащие настойку ландыша.
5. Семена и лекарственные препараты строфанта.
6. Трава и семя желтушника раскидистого (серого), сложные лекарственные
формы, содержащие лекарственные препараты желтушника серого.
Принцип метода биологической оценки
Биологическая оценка указанных выше лекарственных средств основана на
способности сердечных гликозидов вызывать в токсических дозах систолическую
остановку сердца животных.
Активность сердечных лекарственных средств оценивают по сравнению с активностью
стандартных образцов и выражают в единицах действия (ЕД).
Испытания проводят на лягушках или кошках. Устанавливают наименьшие
дозы стандартного образца и испытуемого лекарственного средства1, вызывающие
систолическую остановку сердца подопытных животных. Затем рассчитывают
содержание единиц действия в 1 г испытуемого препарата (ИП), если
испытываются лекарственное растительное сырье или сухие концентраты; в
одной таблетке - при испытании таблеток или в 1 мл, если испытываются жидкие
лекарственные формы.
Стандартные образцы и понятие единицы действия
Стандартным образцом при испытании травы, листьев, цветков ландыша, лекарственных
препаратов ландыша, сложных лекарственных форм, содержащих
настойку ландыша, служат специально изготовленные спиртовые экстракты ландыша,
содержащие сумму гликозидов и очищенные от сопутствующих веществ.
Стандартными образцами при испытании листьев и лекарственных препаратов
наперстянки пурпуровой и крупноцветковой, травы, цветков, листьев и лекарственных
препаратов служат специально изготовленные спиртовые
экстракты наперстянки названных видов, содержащие сумму гликозидов и
очищенные от сопутствующих веществ.
Стандартными образцами при испытании других лекарственных растений и
полученных из них лекарственных препаратов служат индивидуальные кристаллические
гликозиды: при испытании лекарственных препаратов наперстянки
шерстистой - целанид-стандарт; при испытании травы,
лекарственных препаратов горицвета - цимарин-стандарт; при испытании
семян и лекарственных препаратов строфанта - строфантин G-стандарт; при
испытании травы и семян желтушника серого - эризимин-стандарт.
Биологическую активность стандартных образцов устанавливают на лягушках-
самцах (Rana temporaria) массой 28 - 33 г при подкожном введении в
октябре-ноябре (таких лягушек условно называют «стандартными» или «нормальными
»), а также на кошках в определенных условиях опыта.
При испытании на лягушках, разведения стандартных образцов подбирают
с таким расчетом, чтобы одна лягушачья единица действия (1 ЛЕД) соответствовала
дозе стандартного образца, вызывающей в определенных условиях
1 В дальнейшем, для удобства, испытуемое лекарственное средство будет называться «испытуемый препарат».
па

опыта систолическую остановку сердца у большинства стандартных подопытных
лягушек.
Под 1 ЛЕД ландыша или наперстянки подразумевают специфическую биологическую
активность 0,3 мл стандартного спиртового образца, разведенного
в 4 раза водой. Неразведенные стандартные образцы наперстянки и ландыша
содержат в 1 мл 13,33 ЛЕД.
Под 1 ЛЕД цимарина, целанида подразумевают специфическую биологическую
активность 0,3 мл стандартного спиртоводного раствора кристаллического
гликозида в следующей концентрации:
цимарина 1:13333
целанида 1:5000
Под 1 ЛЕД строфантина G, эризимина подразумевают специфическую биологическую
активность 0,4 мл стандартного спиртоводного раствора кристаллического
гликозида в следующей концентрации:
строфантина G 1:20000
эризимина 1:25 000
При испытании сердечных лекарственных средств на кошках активность ИП
выражают в кошачьих единицах действия.
Под одной кошачьей единицей действия (1 КЕД) подразумевают дозу стандартного
образца или ИП из расчета на 1 кг массы животного, вызывающую систолическую
остановку сердца кошки и устанавливаемую в определенных
условиях опыта. Эта доза является смертельной.
Разведения стандартного образца или ИП подбирают с таким расчетом, чтобы
1 КЕД содержалась примерно в 15 мл раствора.
1. МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ НА
ЛЯГУШКАХ
i m

точностью до 0,5 г с отклонениями от средней массы в группе не более чем на
± 2,5 г: 28 -*¦ 33, 30 - 35, 35 - 40 и до 65 - 70 г.
Лягушек по 5 штук укрепляют на досках брюшком кверху с предельно вытянутыми
конечностями, булавки вкалывают в верхнюю часть морды и в суставы
передних и задних конечностей.
Пинцетом захватывают кожу на груди и вырезают в ней треугольное отверстие.
Вырезанный лоскут кожи откидывают в сторону. При этом становится отчетливо
видимой грудина, просвечивающая через мышцы в виде белой
пластины, напоминающей по форме песочные часы. Приподняв пинцетом грудину
в узкой части, тонкими ножницами перерезают ее поперек выше и ниже
места наложения пинцета, так что образуется узкое поперечное оконце, через
которое видны дуги аорты и предсердия. Тонким (глазным) пинцетом проникают
в разрез (осторожно, чтобы не поранить предсердия и крупные сосуды),
слегка вытягивают сердечную сорочку и рассекают ее ножницами. Затем легкими
надавливаниями на брюшко лягушки выводят сердце наружу. При препарировании
следят за тем, чтобы через образованное отверстие не выступали
наружу печень и легкие и чтобы сердце свободно помещалось на лишенном
кожи участке, не прикасаясь к наружной поверхности кожи. В течение опыта
обнаженное сердце каждые 15 -^ 20 мин смачивают 0,6 % раствором натрия хлорида
(наносят пипеткой 2-^3 капли на обнаженное сердце).
Испытания на травяных лягушках следует проводить, вводя растворы в лимфатические
бедренные мешки (под кожу) или в сердце (в полость желудочка); на
водяных - в сердце (в полость желудочка) или в вену; под кожу - только растворы,
содержащие гликозиды ландыша.
Лягушкам, относящимся к одной группе (5 штук), вводят одинаковые дозы
испытуемого раствора.
Испытуемые препараты предварительно разводят водой с таким расчетом,
чтобы 0,3 или 0,4 мл испытуемого раствора содержали 1 ЛЕД. Для этого среднее
количество единиц действия лекарственного средства умножают на количество
миллилитров, соответствующее 1 ЛЕД. Например, если в 1 мл препарата
«Коргликон раствор 0,06 % для инъекций» содержится в среднем 13,3 ЛЕД
(13,3 х 0,3 = 3,99), то препарат следует развести 1 : 4.
1. Метод испытания при введении под кожу. Растворы вводят шприцем с
тонкой иглой в бедренные лимфатические мешки лягушек. Дозы, не превышающие
0,35 мл, вводят в одну конечность, большие дозы (но не более 0,7 мл)
вводят равными частями в обе конечности.
После введения раствора наблюдают за лягушками и определяют наименьшую
дозу, вызывающую систолическую остановку сердца у большинства (3 ¦*- 4)
из 5 лягушек данной группы в течение 1 ч, если испытывают лекарственное растительное
сырье и лекарственные препараты наперстянки, ландыша, горицвета,
или в течение 2 ч, если испытывают лекарственное растительное сырье и лекарственные
препараты строфанта или желтушника. Если в течение этого времени
отчетливой остановки сердца не произошло, продолжают наблюдение еще
10 мин (при длительности наблюдения 1 ч) и учитывают также количество

лягушек, у которых остановка сердца наступила в дополнительное время. Длительность
систолической остановки сердца должна быть не менее 15 мин. Лягушек,
у которых сердце начинает вновь сокращаться ранее, чем через 15 мин
после остановки, в расчет не принимают.
В протоколах опытов отмечают время введения ИП и результаты опытов для
каждой лягушки в отдельности. Каждое отдельное испытание начинают с определения
чувствительности данной партии лягушек к стандартному образцу.
С этой целью нескольким группам лягушек с одинаковой массой тела, по 5
животных в каждой, вводят различные дозы стандартного образца: первой
группе - дозу, соответствующую 1 ЛЕД (по 0,3 или 0,4 мл в зависимости от
образца); другим - на 0,05 -^0,1 мл больше. Находят наименьшую дозу стандартного
образца, вызывающую остановку сердца у большинства из 5 лягушек.
Если остановка наблюдается у всех лягушек, то переходят к испытанию меньшей
дозы, а если остановки были у 1 или 2 животных или не наблюдались вообще,
то доза ИП увеличивается. Таким образом, определяется
чувствительность опытной партии лягушек по сравнению со стандартными лягушками.
Затем в тех же условиях опыта группе из 5 лягушек той же партии вводят
раствор ИП в дозе, соответствующей найденной наименьшей дозе
стандартного образца, и наблюдают за животными в течение 1 или 2 ч (в зависимости
от того, какое лекарственное средство испытывается). Если в результате
наблюдений будет установлено, что введенная доза недостаточна или
слишком велика, дозу увеличивают или уменьшают, причем разница между дозами
должна быть не более 0,1 мл. Опыты проводят до тех пор, пока не будет
найдена наименьшая доза ИП, вызывающая систолическую остановку сердца у
большинства из 5 лягушек.
Далее рассчитывают содержание единиц действия (X) в 1 мл, 1 г или
в 1 таблетке ИП.
Для лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов наперстянки,
ландыша, горицвета расчет проводят по формуле:
v_ BxK
где: А - наименьшая доза в миллилитрах, установленная для раствора ИП;
В - наименьшая доза в миллилитрах, установленная для раствора стандартного
образца;
0,3 - доза в миллилитрах, соответствующая 1 ЛЕД;
К - число, обозначающее разведение ИП.
Для лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов строфанта
и желтушника расчет проводят по формуле:
х= ВхК
0,4хА '
10. Эак,2768
жиа

2. Метод испытания при введении в полость желудочка сердца. Испытуемые
растворы, предварительно освобожденные от избытка спирта (не должен
превышать 10 %) и летучих веществ, в соответствующем разведении вводят лягушкам
непосредственно в полость желудочка сердца со скоростью 0,1 мл в 5 с,
проколов его в момент диастолы тонкой иглой, соединенной со шприцем с делением
0,02 мл. Иглу вынимают из полости желудочка во время систолы, чтобы
избежать кровотечения в месте укола.
Для определения наименьшей дозы раствора стандартного образца и ИП травяным
лягушкам вводят примерно 0,2 мл лекарственного препарата наперстянки,
ландыша, горицвета или 0,3 мл лекарственного препарата строфанта,
желтушника. Допустимое отклонение между вводимыми дозами - 0,02 мл.
При определении активности на водяных лягушках рассчитывают вводимую
дозу на 1 г массы тела. Для того чтобы не рассчитывать каждый раз дозу на введение,
предлагается таблица расчетных доз (табл. 30.1). Допустимое отклонение
между вводимыми дозами должно быть не более 0,0005 мл на 1 г массы
лягушки. Наименьшими дозами обычно являются 0,004 ¦*- 0,006 мл раствора на
1 г массы лягушки.
Таблица 30.1
Дозы в мл, рассчитанные для введения водяным лягушкам
при оценке лекарственных средств, содержащих сердечные
гликозиды, внутрисердечным и внутривенным путем
Средняя масса
лягушки, г
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
Дозы (мл) лекарственного средства на 1 г массы лягушки
0,0030
0,09
0,11
0,12
0,14
0,15
0,17
0,18
0,20
0,21
0,23
0,0035
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,19
0,21
0,23
0,25
0,26
0,0040
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
0,24
0,26
0,28
0,30
0,0045
0,14
0,16
0,18
0,20
0,23
0,25
0,27
0,29
0,32
0,34
0,0050
0,15
0,18
0,20
0,23
0,25
0,28
0,30
0,33
0,35
0,38
0,0055
0,17
0,19
0,22
0,25
0,28
0,30
0,33
0,36
0,39
0,41
0,0060
0,18
0,21
0,24
0,27
0,30
0,33
0,36
0,39
0,42
0,45
0,0065
0,20
0,23
0,26
0,29
0,33
0,36
0,39
0,42
0,46
0,49
0,0070
0,21
0,25
0,28
0,32
0,35
0,39
0,42
0,46
0,49
0,53
0,0075
0,23
0,26
0,30
0,34
0,38
0,41
0,45
0,49
0,53
0,56
Длительность наблюдения за лягушками - 15 мин, если испытывают лекарственное
растительное сырье и лекарственные препараты наперстянки,
ландыша, горицвета; для лекарственных препаратов строфанта, желтушника
- 20 мин. Если в течение этого времени отчетливой остановки сердца не
произошло, наблюдение продолжают еще 5 мин. Лягушек, у которых сердце
начинает вновь сокращаться ранее, чем через 5 мин после остановки, в расчет
не принимают.

Вычисляют содержание ЛЕД в 1 мл, 1 г или в 1 таблетке испытуемого образца
по формулам, приведенным для подкожного введения, но значения А и В зависят
от принципа расчета доз, т.е. от вида применяемых лягушек:
А - наименьшая доза (в мл на массу травяной лягушки или в мл на 1 г массы
водяной лягушки), установленная для раствора ИП;
В - наименьшая доза (в мл на массу травяной лягушки или в мл на 1 г массы
водяной лягушки), установленная для раствора стандартного образца.
3. Метод испытания при введении в вену. У лягушек проводят поперечный
разрез кожи на уровне ключиц, затем по средней линии живота до симфиза, где
надсекают кожу вправо и влево. Образовавшиеся лоскуты кожи отводят в стороны.
На внутренней поверхности после отведения в сторону лоскутов кожи с
каждой стороны видна большая кожная вена в виде петли, идущей по поверхности
прямой мышцы живота от кожи спины книзу, а затем снова вверх, где она
впадает в верхнюю полую вену. Затем выводят наружу сердце аналогично методу
испытания при введении под кожу. Доску с группой препарированных животных
поворачивают так, чтобы головы лягушек были обращены к
экспериментатору для удобства введения иглы в нисходящее колено петли вены
лягушки.
При введении лягушкам внутривенным способом растворов стандартных образцов
и ИП в соответствующем разведении, освобожденных от избытка спирта
и летучих веществ, рассчитывают вводимую дозу на 1 г массы тела (табл. 30.1).
Лягушкам, относящимся к одной группе (5 штук), вводят в вену одинаковые
дозы раствора стандартного образца или ИП тонкой иглой, соединенной со
шприцем вместимостью 1 мл, со скоростью 0,1 мл за 5 с. После каждого введения
накладывают кровоостанавливающие зажимы, которые не снимают до конца
опыта. Время наблюдения за остановкой сердца лягушки - 15 мин, если испытывают
лекарственное растительное сырье и лекарственные препараты наперстянки,
ландыша, горицвета; для лекарственных препаратов строфанта,
желтушника - 20 мин. Если в течение этого времени отчетливой остановки
сердца не произошло, наблюдение продолжают еще 5 мин; о результатах судят
по изменениям, наступающим в дополнительное время.
Определение наименьшей дозы стандартного образца и ИП, вызывающей систолическую
остановку сердца у большинства лягушек (не менее 3) из 5, проводят
так же, как при введении под кожу. Допустимое отклонение между
вводимыми дозами должно быть не более 0,0005 мл на 1 г массы лягушки.
Наименьшими дозами обычно являются 0,004-0,006 мл раствора на 1 г массы
лягушки.
Вычисляют содержание ЛЕД в 1 мл, 1 г или в 1 таблетке ИП по формулам,
приведенным для подкожного введения, но с другими обозначениями А и В:
А - наименьшая доза (в мл на 1 г массы лягушки), установленная для раствора
ИП;
В - наименьшая доза (в мл на 1 г массы лягушки), установленная для раствора
стандартного образца.
па

2. МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ
СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ НА КОШКАХ
Отбор кошек и их содержание
Для опыта отбирают кошек обоего пола, здоровых, не беременных и не лак-
тирующих, массой 2,0 ^- 3,5 кг, находившихся в условиях лабораторного содержания
в течение 2-^3 сут. За 16 -^ 20 ч до начала опыта животных лишают пищи,
но не воды.
Техника испытания и принцип расчета
Опыт проводят под легким наркозом (например, 200 -^ 250 мг/кг гексенала в
мышцу бедра). В отпрепарированную бедренную вену животного вводят канюлю,
соединенную тонкой каучуковой трубкой, с градуированной бюреткой
вместимостью 50 + 100 мл, откуда поступает раствор ИП, приготовленный на
0,9 % растворе натрия хлорида для инъекций. На пути между бюреткой и канюлей
включают стеклянный змеевик, помещенный на водяную баню с температурой
39 °С для поддержания постоянной температуры (37 °С) вводимого
раствора. В резиновую трубку, соединяющую стеклянный змеевик с канюлей,
вставляют с помощью стеклянного тройника термометр, показывающий температуру
жидкости, поступающей к животному. Жидкость из бюретки вытекает
под постоянным давлением, что достигается введением в бюретку стеклянного
капилляра внешним диаметром не более 1 мм, укрепленного при помощи каучуковой
пробки в верхнем отверстии бюретки (по принципу сосуда Мариотта).
Длина капилляра должна быть такова, чтобы его нижний конец доходил до
уровня нижнего деления бюретки. Скорость вытекания жидкости из бюретки
регулируют при помощи зажима, наложенного на каучуковую трубку, или стеклянного
крана таким образом, чтобы в вену животного в 1 мин поступал 1 мл
испытуемого раствора. Можно использовать другое оборудование, позволяющее
соблюдать указанную скорость введения и температуру испытуемого раствора.
Введение раствора проводят до наступления остановки сердца.
Длительность опыта должна составлять не менее 30 и не более 55 мин. Момент
остановки сердца определяют по исчезновению сердечного толчка и контролируют
последующим вскрытием грудной клетки. При наличии патологических
изменений в органах опыт в расчет не принимают.
Оценку активности ИП можно проводить двумя способами:
1) по сравнению со стандартным образцом;
2) в кошачьих единицах действия (КЕД).
1. Оценка активности ИП по сравнению со стандартным образцом.
В опыт берут не менее 12 кошек: по 6 животных, как для стандартного образца,
так и для ИП. Данные, полученные при биологическом испытании стандартного
образца, могут быть использованы для расчетов в последующих опытах в течение
15 сут без повторного испытания.
Результаты опыта обрабатывают согласно подразделу «Обработка результатов
определения биологической активности сердечных гликозидов на кошках»
ш

общей фармакопейной статьи «Статистическая обработка результатов химического
эксперимента и биологических испытаний».
Результаты опытов удовлетворяют требованиям метода, если отношение стандартного
отклонения среднего результата Sy к средней смертельной дозе 7 не
превышает 5,7 %. В противном случае необходимо увеличить число опытов.
ИП считают прошедшим испытание, если отношение средних смертельных
доз ИП и стандартного образца составляет 90-110 %, а их разность не превышает
величины Sd
x t.
2. Определение активности ИП в КЕД. Для выражения активности ИП в
кошачьих единицах действия (КЕД) расчет проводят для каждого животного по
формуле: Кхт
А =
а '
где: К- разведение ИП;
т - масса животного в килограммах;
а - доза разведенного ИП в миллилитрах.
Из данных, полученных в опытах, выводят среднее число КЕД и вычисляют
(в КЕД и процентах) отклонения результатов отдельных опытов от среднего
числа КЕД.
Результаты опытов удовлетворяют требованиям метода, если найденное среднее
отклонение от среднего числа КЕД будет меньше максимально допустимого
отклонения для данного числа опытов, указанного в табл. 30.2.
Таблица 30.2
Максимально допустимое отклонение отдельных опытов от среднего значения
Число опытов
3
4
5
6
Отклонение, %
9,4
11,5
13,3
14,9
Число опытов
7
8
9
10
Отклонение, %
16,3
17,6
18,9
20,0
Из табл. 30.2 следует, что испытания можно проводить на 3 кошках (минимальное
число опытов), но только в том случае, если полученное в опытах отклонение
будет меньше 9,4 %. В противном случае, число опытов следует
увеличить.
Таблица 30.3
Пример расчета: определение числа КЕД
для раствора строфантина К 0,05% для инъекций
п/п
1
2
3
Масса
животного, кг
2,63
2,56
2,22
Разведение раствора
для инъекций
1:50
1:50
1:50
Доза,
мл
37
39
35
Число
КЕД
3,55
3,28
3,17
Отклонение от средней
КЕД
+0,22
-0,05
-0,16
%
+6,6
-1,5
-4,8
Среднее число КЕД = 3,33.
па

31. СТЕРИЛЬНОСТЬ (ОФС 42-0066-07)
Лекарственные средства для инъекций и инфузий, глазные капли, мази,
пленки и другие препараты и субстанции, в отношении которых имеются соответствующие
указания в документации, должны быть стерильными, то есть не
содержать микроорганизмов.
Методы контроля стерильности применяют для испытания всех лекарственных
средств независимо от их природы и лекарственной формы.
1. Условия проведения испытания
Испытание на стерильность проводят в асептических условиях, чтобы избежать
микробной контаминации во время посева, используя, например, лами-
нар-бокс класса А, расположенный в зоне класса В, или изолятор. Можно
применять и другие меры, предотвращающие контаминацию, при условии, что
они не оказывают пагубное влияние на микроорганизмы, которые могут содержаться
в исследуемых образцах. Условия проведения испытания регулярно контролируют
в соответствии с правилами GMP.
2. Определение антимикробного действия
До проведения испытания на стерильность следует определить, обладает ли
исследуемый образец антимикробным действием, которое может существенно
повлиять на результаты испытания.
Для этого готовят взвеси культур тест-микроорганизмов (табл. 31.4)
с конечной концентрацией не более 100 колониеобразующих единиц (КОЕ)
в 1 мл. Испытание проводят дважды с каждым микроорганизмом в отдельности.
В пробирки с 10 мл питательной среды, рекомендованной для испытания,
вносят по 1 мл приготовленной взвеси тест-микроорганизма.
В две пробирки с инокулированной средой вносят по 1 мл исследуемого образца,
в две другие вносят по 1 мл соответствующего растворителя - положительный
контроль. Посевы на тиогликолевой среде инкубируют при
температуре (32,5 ± 2,5) °С в течение 3-х сут. Посевы на жидкой соево-казеи-
новой среде и среде Сабуро инкубируют при температуре (22,5 ± 2,5) °С в течение
5 сут.
Сравнивают рост тест-микроорганизмов в контрольных и опытных посевах
при визуальном просмотре. Если результаты неодинаковые, то есть, в контроле
наблюдают рост тест-микроорганизма, а в опыте рост отсутствует, считают,
что исследуемый образец обладает бактериостатическим или фунгистатиче-
ским действием.
2.1. Устранение антимикробного действия
При наличии антимикробного действия исследуемого образца используют
специфические инактиваторы, указанные в нормативных документах. Например,
парааминобензойная кислота для сульфаниламидов, Р-лактамаза для пени-
циллинов и цефалоспоринов.
Неспецифические инактиваторы (твин-20, твин-80, яичный лецитин,
ЕШ

гистидина гидрохлорид, натрия тиосульфат и другие) добавляют в буферный раствор
и (или) в питательные среды, как правило, до стерилизации.
Для разведения исследуемого образца перед испытанием на стерильность
можно использовать нейтрализующую жидкость, приготовленную в лаборатории
или промышленного производства, следующего состава:
Полисорбата-80 (твина-80) - 30,0 г
Лецитина яичного (или соевого) - 3,0 г
L-гистидина гидрохлорида - 1,0 г
Пептона (мясного или казеинового) - 1,0 г
Натрия хлорида - 4,3 г
Калия фосфата однозамещенного - 3,6 г
Натрия фосфата двузамещенного - 7,2 г
Воды -1000 мл
Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации.
рН после стерилизации 7,0 ± 0,2.
Если разведение в вышеприведенном растворе не устраняет антимикробное
действие исследуемого образца, то увеличивают концентрацию твина-80 или лецитина.
Альтернативно допускается добавление в буферный раствор специфических
инактиваторов, устраняющих антимикробное действие лекарственных
средств или консервантов (табл. 31.1).
Таблица 31.1
Инактиваторы антимикробного действия консервантов
Тип консерванта
Фенолы
Органо-ртутные
соединения
Галогены
Четвертичные
соединения аммония
Инактиватор
Натрия лаурилсульфат
Твин-80 и лецитин
Яичный желток
Натрия тиогликолят
Натрия тиосульфат
Яичный желток
Концентрация
в растворителе
4 г/л
30 г/л и 3 г/л
5-50 мл/л
0,5-5 г/л
5 г/л
5-50 мл/л
При отсутствии инактиватора исследуемый образец разводят, изменяя соотношение
объемов посевного материала и питательной среды, или используют
метод мембранной фильтрации.
3. Испытание на стерильность
3.1. Отбор образцов для анализа
Для испытания отбирают образцы лекарственного средства в количестве, указанном
в табл. 31.2, если нет других указаний в частной фармакопейной статье.
ПЭТ

Таблица 31.2
Количество единиц (ампул, флаконов и др.) от серии исследуемого образца
для проведения анализа
Количество единиц в серии
1
Парентеральные лекарственные средства:
• Не более 100
• От 100 до 500
• Более 500
• Парентеральные лекарственные
средства большого объема
• Антибиотики, твердые формы -
ангро (более 5 г)
Неинъекционные лекарственные средства
(в том числе глазные):
• Не более 200
• Более 200
• Препараты в однодозовой упаковке
Твердые формы, ангро:
• Не более 4 упаковок
• Свыше 4, но не более 50
• Свыше 50
Количество единиц
для проведения анализа (не менее)
2
10 % или 4 (берут наибольшее)
10
2 % или 20 (берут наименьшее)
2 % или 10 (берут наименьшее)
6
5 % или 2 (берут наибольшее)
10
См. графу «Парентеральные лекарственные
средства»
Каждую
20 % или 4 (берут наибольшее)
2 % или 10 (берут наибольшее)
При вскрытии образцов не допускают их контаминации микроорганизмами,
которые могут находиться на его внешней поверхности. Ампулы и пробки флаконов
протирают спиртом этиловым ректификованным 96 % и фламбируют.
3.2. Для посева на каждую питательную среду используют количество
исследуемого образца, приведенное в табл. 31.3, если нет других указаний в
частной фармакопейной статье.
Таблица 31.3
Минимальное количество образца для посева на питательные среды
Количество лекарственного
средства в упаковке
Жидкие
• Менее 1 мл
• 1-40 мл
• 40-100 мл
• более 100 мл
• Антибиотики
• Другие препараты, растворимые в воде
или изопропилмиристате
Нерастворимые препараты, мази и
кремы, поддающиеся эмульгированию
или суспендированию
Твердые
• Менее 0,05 г
• 0,05-0,3 г
• 0,3-5 г
• более 5 г
Количество образца для посева
Весь объем
ХА содержимого, но не менее 1 мл
20 мл
10 % содержимого, но не более 20 мл
1 мл
Содержимое упаковки,
но не менее 0,2 г
Содержимое упаковки,
но не менее 0,2 г
Все содержимое
Vz содержимого, но не более 0,05 г
0,150 г
0,500 г
1Ш

3.3. Метод мембранной фильтрации
При определении стерильности лекарственных средств, обладающих выраженным
антимикробным действием, и лекарственных средств в сосудах вместимостью
более 100 мл, используют метод мембранной фильтрации.
Исключение составляют лекарственные средства с антимикробным действием,
нерастворимые в воде или изопропилмиристате.
Испытание проводят с использованием фильтрационной установки, которая
должна быть смонтирована таким образом, чтобы исследуемый раствор (жидкость)
можно было ввести и профильтровать в условиях асептики. После окончания
фильтрации мембрану асептически переносят в 100 мл питательной
среды. Испытания проводят под вакуумом 93,3 кПа (70 см рт. ст) при скорости
вытекания воды 55-75 мл в 1 мин.
Допускается использование аппарата, представляющего собой стерильную
замкнутую систему и работающего также по принципу фильтрации растворов,
с мембраной, вмонтированной в канистру, в которую после фильтрования добавляют
стерильную среду. Используют мембранные фильтры с размером пор
0,45 ± 0,02 мкм и внешним диаметром 47 мм. Фильтры из нитрата целлюлозы используются
для водных, масляных и слабых спиртовых растворов, фильтры из
ацетата целлюлозы - для концентрированных спиртовых растворов и др. Гидрофобный
край фильтра и низкая сорбционная способность сводят к минимуму
потери препарата при фильтрации.
Для лекарственных средств, не обладающих бактериостатическим или фун-
гистатическим действием, можно использовать фильтры без гидрофобного края,
увлажняя их перед фильтрацией, если нет других указаний в частной фармакопейной
статье.
Установки и фильтры стерилизуют и хранят в условиях, гарантирующих сохранение
стерильности.
При исследовании лекарственных средств в виде раствора в масле, фильтр и
установка перед анализом должны быть тщательно высушены.
3.3.1. Пробоподготовка водных растворов
Лекарственное средство в упаковке перемешивают, отбирают необходимое
для испытания количество исследуемого образца (табл. 31.3) и асептически переносят
на один или несколько фильтров.
Мембранную фильтрацию проводят с помощью вакуума или давления. Фильтры
асептически снимают с фильтродержателя и помещают в обе среды. При
использовании замкнутой системы канистры заполняют равным объемом сред.
При этом следует избегать аэрации тиогликолевой среды.
Если исследуемый образец обладает антимикробным действием или в его состав
входит консервант, то для промывания фильтров используют раствор натрия
хлорида изотонический 0,9 % или жидкость № 1 (раздел 3.4). Испытание
проводят, исключая контаминацию микроорганизмами последней порции жидкости
для промывания.
3.3.2. Пробоподготовка жидкостей, не смешивающихся с водой
Испытание проводят, как указано в разделе 3.3.1.
Перед помещением на фильтр вязких жидкостей или суспензий для
ш

увеличения скорости фильтрации к общей пробе асептически добавляют достаточное
количество подходящего растворителя.
Если в состав исследуемого образца входят лецитин, масло или консервант и
при наличии антимикробного действия, то для промывания фильтров используют
жидкость № 2 (раздел 3.4). Испытание проводят, исключая контаминацию
микроорганизмами последней порции жидкости для промывания.
3.3.3. Пробоподготовка лекарственных средств, растворимых в изопро-
пилмиристате (ИПМ)
Мази на жировой основе и эмульсии типа «вода в масле» растворяют в ИПМ,
предварительно простерилизованном методом мембранной фильтрации с использованием
мембран с диаметром пор 0,22 мкм. Стерильный растворитель и,
если необходимо, исследуемый образец непосредственно перед фильтрацией нагревают
до температуры не более 44 °С.
Первоначально через мембрану пропускают стерильный ИПМ в количестве
5 мл. Затем фильтруют раствор препарата в ИПМ. Для максимальной эффективности
процесса над фильтром постоянно должен быть слой раствора во время
фильтрации. После фильтрации мембрану промывают вначале двумя порциями
жидкости № 2, по 200 мл каждая, а затем 100 мл жидкости № 1.
При испытании в питательные среды добавляют твин-80 из расчета 1 г/л.
Если в состав лекарственного средства входит вазелин, для промывания фильтров
используют жидкость № 3. Перед началом фильтрации через фильтр пропускают
200 мл жидкости № 3. Для максимальной эффективности процесса над
фильтром постоянно должен быть слой раствора во время фильтрации. После
фильтрации образца фильтр промывают тремя порциями жидкости № 3 (раздел
3.4) по 100 мл каждая.
3.3.4. Пробоподготовка препаратов в шприц-тюбиках
Содержимое каждого шприц-тюбика переносят в две воронки установки для
мембранной фильтрации или собирают общую пробу в стерильную пробирку
для последующего переноса на фильтр.
3.3.5. Пробоподготовка твердых лекарственных форм для инъекций
(кроме антибиотиков)
Готовят разведение в соответствии с инструкцией по применению.
Испытание проводят в соответствии с разделами 3.3.1 и 3.3.2.
3.3.6. Пробоподготовка стерильных аэрозольных препаратов
Содержимое препаратов в аэрозольной упаковке асептически извлекают и
помещают в стерильную колбу нажатием на шток распылительного клапана.
Если возможно, пропелент удаляют путем испарения. Добавляют в колбу жидкость
№ 2 и осторожно перемешивают.
Испытание проводят, как указано в разделах 3.3.1 и 3.3.2.
3.4. Жидкости для промывания мембранных фильтров при контроле лекарственных
средств, обладающих антимикробным действием
Для промывания фильтров можно использовать любой растворитель, не подавляющий
рост микроорганизмов:
• Раствор натрия хлорида изотонического 0,9 % стерильного рН 7,0.

• Жидкость № 1: 1 г ферментативного пептона растворяют в 1000 мл воды,
фильтруют или центрифугируют для осветления, разливают в сосуды и стерилизуют.
рН после стерилизации - 7,1 ± 0,2.
При фильтровании образцов пенициллинов или цефалоспоринов (если необходимо)
к жидкости № 1 добавляют определенное количество Р-лактамазы, указанное
в частной фармакопейной статье, достаточное для инактивации
остаточного антимикробного действия антибиотика на фильтре.
• Жидкость № 2: 1 мл твина-80 добавляют к 1000 мл жидкости № 1, разливают
в сосуды и стерилизуют.
рН после стерилизации - 7,1 ± 0,2.
• Жидкость № 3: 5 г ферментативного пептона, 3 г мясного экстракта и 10 г
твина-80 растворяют в 1000 мл воды, разливают в сосуды и стерилизуют.
рН после стерилизации - 6,9 ± 0,2.
3.5. Валидация метода мембранной фильтрации при контроле лекарственных
средств, обладающих антимикробным действием
Фильтруют определенный объем исследуемого образца, используя для одного
фильтра количество единиц (ампул, флаконов и т.д.), указанное в табл. 31.2.
Фильтр промывают как минимум тремя порциями соответствующей жидкости
по 100 мл каждая. В последнюю порцию жидкости для промывания вносят 1 мл
приготовленной микробной взвеси тест-микроорганизмов: B.subtilis
АТСС 6633 - для тиогликолевой среды; С.albicans NCTC 885-653 - для соево-
казеинового бульона или жидкой среды Сабуро. Концентрация тест-штаммов -
не более 100 КОЕ/мл. Фильтр помещают в колбу со 100 мл соответствующей
питательной среды или добавляют среду в канистру замкнутой системы.
Посевы инкубируют при соответствующей температуре в течение не более
3-х сут для бактерий и 5 сут. для грибов.
Определяют наличие роста тест-микроорганизма при визуальном просмотре.
При наличии роста считают, что антимикробное действие полностью инакти-
вировано, и проводят испытание на стерильность, используя то же количество
препарата, количество единиц (ампул, флаконов и т.п.), объем жидкости для промывания
и те же питательные среды.
При отсутствии роста тест-микроорганизма считают, что антимикробное действие
не инактивировано, и испытание повторяют, увеличивая объем жидкости
для промывания фильтра. Однако общий объем жидкости, пропущенный через
мембрану, не должен превышать 1000 мл.
3.6. Метод прямого посева
3.6.1. Пробоподготовка нефильтрующихся жидкостей
Асептически отбирают объем исследуемого образца (табл. 31.3), достаточный
для посева на питательные среды. Слегка перемешивают среду сразу после
посева, чтобы не вызвать сильную аэрацию. Далее проводят испытание, как указано
в разделе 3.7.
3.6.2. Пробоподготовка лекарственных средств, нерастворимых в изо-
пропилмиристате (ИПМ)
Растворы в маслах. В питательную среду предварительно добавляют 10 г/л
ХЕЭ

твина-80 или другого эмульгатора в концентрации, не оказывающей антимикробного
действия в условиях испытания.
Мази и кремы. Отбирают 20 образцов и разделяют их на 2 группы по 10 в каждой.
Исследуемые образцы эмульгируют в разведении 1:10с помощью подходящего
эмульгатора в соответствующем стерильном растворителе, например,
жидкости № 1. Полученную эмульсию вносят в питательную среду, не содержащую
эмульгатора.
Если исследуемый образец обладает антимикробным действием в условиях
испытания, его устраняют путем добавления подходящих инактиваторов (например,
твина-80, количество которого указывают в частной фармакопейной
статье) или увеличивают количество питательной среды.
Посевы образцов растворов в маслах ежедневно аккуратно перемешивают.
Однако в том случае, когда тиогликолевая или аналогичная ей среда применяется
для выявления анаэробных микроорганизмов, встряхивание или перемешивание
должно быть сведено к минимуму для того, чтобы не нарушать анаэробных
условий.
Если в состав лекарственного средства входят трудноэмульгируемые жиро-
содержащие продукты, допускается использование определенного эмульгатора
соответствующей концентрации в стерильном растворителе с одновременным
нагреванием образца до 40 °С (в исключительных случаях - до 45 °С) в течение
не более 30 мин.
3.6.3. Пробоподготовка твердых лекарственных форм
Лекарственное средство в виде порошка или суспензии (если в сосуд добавляют
стерильный растворитель) переносят в количестве, указанном в табл. 31.3,
в жидкую тиогликолевую среду, жидкую соево-казеиновую среду или жидкую
среду Сабуро и осторожно перемешивают. Далее проводят испытание, как указано
в разделе 3.7.
3.7. Условия инкубации посевов
Посевы инкубируют не менее 14 сут при температуре (32,5 ± 2,5) °С на жидкой
тиогликолевой среде и при температуре (22,5 ± 2,5) °С на жидкой соево-казе-
иновой среде или жидкой среде Сабуро (независимо от метода посева),
периодически просматривая питательные среды.
Наличие роста микроорганизмов определяют визуально. Если исследуемый
образец вызывает помутнение питательной среды и визуально нельзя определить
наличие или отсутствие роста микроорганизмов, через 14 сут. после начала
испытания переносят не менее 1 мл помутневшей среды в пробирки с той
же стерильной средой. Инкубируют исходные и повторные посевы. Общее время
инкубации должно составлять не менее чем 14 + 4 сут от начала испытания.
3.8. Интерпретация результатов испытания
При отсутствии роста микроорганизмов считают, что исследуемый образец
соответствует требованиям испытания.
При наличии роста микроорганизмов, наблюдаемом визуально и подтверждаемом
микроскопическим исследованием, считают, что исследуемый образец
не соответствует требованиям испытания на стерильность, если не доказана недостоверность
испытания, вызванная причинами, не связанными с исследуемым

образцом. Результаты испытания могут быть признаны недостоверными в случае,
если выполняется одно или несколько условий:
1) получены неудовлетворительные результаты микробиологического контроля
окружающей среды в ходе проведения испытания;
2) выявлены ошибки, допущенные в ходе испытания;
3) обнаружен рост микроорганизмов в отрицательном контроле;
4) после идентификации микроорганизмов, выделенных из исследуемого образца,
однозначно признано, что причиной возникновения роста этого вида
или видов являются материалы и/или технические приемы, использованные
при испытании;
5) если питательная среда нестерильна и/или ее ростовые свойства неудовлетворительны.
Если результаты испытания признаны недостоверными, его повторяют на том
же количестве образцов, что и первоначально.
Если в результате повторного испытания не обнаруживают роста микроорганизмов,
считают, что препарат выдерживает испытание на стерильность.
Если в результате повторного испытания обнаруживают рост микроорганизмов,
считают, что препарат не выдерживает испытание на стерильность.
4. Питательные среды
4.1. Состав и приготовление питательных сред
Для испытания используют жидкую тиогликолевую среду, жидкую соево-
казеиновую среду или жидкую среду Сабуро. Жидкую тиогликолевую среду
применяют для выявления аэробных и анаэробных бактерий. Жидкую соево-
казеиновую среду или жидкую среду Сабуро применяют для выявления грибов.
Используют питательные среды, приготовленные в лаборатории, или сухие
питательные среды промышленного производства. В этом случае следует строго
придерживаться методики приготовления, рекомендованной производителем.
Если нет других указаний в частной фармакопейной статье, среды стерилизуют
в автоклаве в течение 15 мин при температуре 121 °С, при условии вали-
дации процесса стерилизации.
Все среды проверяют на стерильность и определяют их ростовые свойства.
Жидкая тиогликолевая среда:
L-цистина - 0,5 г
Натрия хлорида - 2,5 г
Глюкозы моногидрата - 5,5 г
Агара гранулированного (влажность не более 15 %) - 0,75 г
Дрожжевого экстракта (водорастворимого) - 5,0 г
Панкреатического гидролизата казеина -15,0 г
Натрия тиогликолята - 0,5 г
или кислоты тиогликолевой - 0,3 г
Раствора резазурина натрия (1:1000) - 1,0 мл
свежеприготовленного
Воды -1000,0 мл
рН после стерилизации - 7,1 ± 0,2

Добавляют в воду L-цистин, агар, натрия хлорид, глюкозу, водорастворимый
дрожжевой экстракт и панкреатический гидролизат казеина и нагревают до полного
растворения. Добавляют натрия тиогликолят или тиогликолевую кислоту
и, если необходимо, доводят рН среды 1 М раствором натра едкого. Добавляют
раствор резазурина, перемешивают и разливают в пробирки соответствующего
объема. Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации.
Жидкая соево-казеиновая среда:
Панкреатического гидролизата казеина - 17,0 г
Папаинового гидролизата соевой муки - 3,0 г
Натрия хлорида - 5,0 г
Калия фосфата двузамещенного - 2,5 г
Глюкозы - 2,5 г
Воды -1000,0 мл
рН после стерилизации - 7,3 ± 0,2
Компоненты растворяют в воде, если необходимо при нагревании. Охлаждают
при комнатной температуре. Если требуется, добавляют 1 М раствор натра
едкого, чтобы после стерилизации рН среды был 7,3 ± 0,2. Фильтруют для получения
прозрачной среды, разливают по пробиркам и стерилизуют в автоклаве.
Жидкая среда Сабуро:
Пептона ферментативного - 10,0 г
Глюкозы моногидрата — 40,0 г
Воды -1000,0 мл
рН после стерилизации - 5,6 ± 0,2
Пептон и глюкозу добавляют в воду и полностью растворяют при слабом нагревании.
Охлаждают до комнатной температуры и доводят рН до требуемого
значения. Фильтруют, если необходимо, и разливают в пробирки. Стерилизуют
в автоклаве, валидируя процесс стерилизации.
Для определения стерильности некоторых антибиотиков (пенициллинов, це-
фалоспоринов) методом прямого посева асептически вносят в питательные
среды определенное количество Р-лактамазы, указанное в частной фармакопейной
статье, для инактивации антибиотика.
4.2. Стерильность питательных сред
После стерилизации не менее 5 % пробирок от каждой партии питательной
среды помещают в термостат и инкубируют в течение как минимум 14 сут. параллельно
с посевом на стерильность.
4.3. Определение ростовых свойств питательных сред
Ростовые свойства питательных сред определяют для каждой серии питательной
среды, выпущенной промышленностью и имеющей номер серии, и для
каждой партии среды, приготовленной в лаборатории.
В 2 пробирки со средой вносят культуру тест-штамма, каждого отдельно, в
количестве 10-100 КОЕ (табл. 31.4). Инкубируют в соответствии с условиями,
описанными в табл. 31.4. Если в течение времени инкубации в инокулированных
средах визуально отмечают рост микроорганизмов, среду считают пригодной
для использования.
ш

Таблица 31.4
Тест-микроорганизмы для определения ростовых свойств
питательных сред и определения антимикробного действия
Питательные
среды
Жидкая тиог-
ликолевая
среда
Жидкая
соево-казеино-
вая среда
Жидкая среда
Сабуро
Тест-микроорганизмы
Вид Штамм
Аэробные бактерии:
Bacillus subtilis ATCC 6633
Staphylococcus ATCC 6538-P
aureus
Pseudomonas ATCC 9027
aeruginosa
Анаэробные бактерии:
Clostridium ГИСК 272
sporogenes
Грибы:
Candida albicans NCTC 885-653
Aspergillus niger ATCC 9642
Условия инкубации
Температура
32,5 ± 2,5 °С
32,5 ± 2,5 °С
22,5 ± 2,5 °С
Время
инкубации
3 сут
3 сут
5 сут
АТСС - Американская коллекция типовых культур, США.
ГИСК - Государственная коллекция патогенных микроорганизмов
ГИСК им. Л.А.Тарасевича, Россия.
NCTC - Национальная коллекция типовых культур.
4.4. Хранение питательных сред
Питательные среды, приготовленные в лаборатории, хранят при температуре
от 2 до 25 °С в защищенном от света месте в течение не более 1 мес. Если при
хранении тиогликолевои среды, содержащей резазурин, верхний слой среды
(более 1/3 объема) окрасится в розовый цвет, то среду можно регенерировать нагреванием
на кипящей водяной бане в течение 10-15 мин до исчезновения розовой
окраски, с последующим быстрым охлаждением. Если окраска не исчезает
после нагревания, то среду считают не пригодной к употреблению. Регенерацию
среды можно проводить только один раз.
Питательные среды промышленного производства, готовые к употреблению,
хранят в плотно укупоренных сосудах при условии сохранения их стерильности
и ростовых свойств в течение срока годности.
Сухие питательные среды промышленного производства хранят в соответствии
с инструкцией по использованию и уничтожают по истечении срока годности,
указанного производителем.
пая

32. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА (ОФС 42-0067-07)
Нестерильные лекарственные средства (субстанции, различные формы препаратов
- таблетки, капсулы, гранулы, растворы, суспензии, сиропы, мази, суппозитории
и др., а также вспомогательные вещества) могут быть
контаминированы микроорганизмами. В них допускается наличие лимитированного
количества микроорганизмов, при отсутствии определенных видов бактерий,
представляющих опасность для здоровья человека.
Приведенные ниже методы определения микробиологической чистоты распространяются
на нестерильные лекарственные средства (субстанции и препараты),
вспомогательные вещества и полупродукты, а также используются при
определении эффективности антимикробных консервантов и мониторинге производственных
помещений фармацевтических предприятий и лабораторий контрольных
служб.
В табл. 32.1 и 32.2 приведены требования к лекарственным средствам (лекарственным
препаратам и субстанциям), а также вспомогательным веществам,
используемым в производстве лекарственных препаратов.
Таблица 32.1
Микробиологическая чистота лекарственных препаратов
Категория
1
1
2
Препараты
2
Препараты, к которым предъявляется
требование
«стерильность»
• Для применения местно, наружно,
интравагинально
• Для введения в полости
уха, носа
• Респираторно
• Трансдермальные пластыри
За исключением тех лекарственных
препаратов, которые должны
быть стерильными
Рекомендуемые требования
3
Препараты должны быть
стерильными
• Общее число аэробных бактерий
и грибов (суммарно) не более
102 в 1 г или в 1 мл, или на
1 пластырь (включая клейкую
сторону и основу)
• Отсутствие энтеробактерий и
других грамотрицательных бактерий
на 1 пластырь (включая
клейкую сторону и основу)
• Не более 101 энтеробактерий и
других грамотрицательных бактерий
в 1 г или в 1 мл остальных
препаратов
• Отсутствие Pseudomonas aeruginosa
в 1 г или в 1 мл, или на
1 пластырь (включая клейкую
сторону и основу)
• Отсутствие Staphylococcus aureus
в 1 г или в 1 мл, или на
1 пластырь (включая клейкую
сторону и основу)
ш

1
3
4
2
А. Для приема внутрь или введения
ректально
Б. Для приема внутрь - из сырья
природного происхождения (животного,
растительного или минерального),
уровень микробной
загрязненности которого невозможно
снизить в процессе предварительной
обработки и
относительно которого федеральный
орган контроля качества лекарственных
средств допускает
уровень микробной загрязненности
более 103 жизнеспособных микроорганизмов
в 1 г или в 1 мл.
Исключением являются лекарственные
растительные средства,
включенные в
Категорию 4
Лекарственные растительные средства,
состоящие из одного вида
сырья (фасованная продукция) или
нескольких (сборы), а также растительное
сырье «ангро»
А. Лекарственные растительные
средства или лекарственное сырье
«ангро», применяемые в виде настоев
и отваров, приготовленные с
использованием кипящей воды
Б. Лекарственные растительные
средства или растительное сырье
«ангро», приготовленные без использования
кипящей воды
3
• Общее число аэробных бактерий
не более 103 в 1 г или в 1 мл
• Общее число грибов не более
102 в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Escherichia coli в 1 г
или в 1 мл
• Общее число аэробных бактерий
не более 104 в 1 г или в 1 мл
• Общее число грибов не более
102 в 1 г или в 1 мл
• Энтеробактерий и других грам-
отрицательных бактерий не
более 102 в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Escherichia coli в 1 г
или в 1 мл
• Отсутствие Salmonella в 10 г
или в 10 мл
• Отсутствие Staphylococcus aureus
в 1 гили в1 мл
• Общее число аэробных бактерий
не более 107в 1 г
• Общее число грибов не более
105в 1г
• Escherichia coli не более 102 в 1 г
• Общее число аэробных бактерий
не более 105 в 1 г
• Общее число грибов не более
104в 1г
• Энтеробактерий и других грам-
отрицательных бактерий
не более 103в 1 г
• Отсутствие Escherichia coli в 1 г
• Отсутствие Salmonella в 10 г

Таблица 32.2
Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных веществ
для производства лекарственных препаратов
Категория
1
1.2
2.2
3.2
4.2
Субстанции, вспомогательные
вещества
2
Субстанции для производства:
A. Стерильных лекарственных препаратов,
которые не подвергаются
стерилизации
Б. Стерильных лекарственных препаратов,
которые подвергаются
стерилизации
B. Нестерильных лекарственных
препаратов, относящихся к Категории
2
Субстанции синтетического
происхождения для производства
нестерильных лекарственных препаратов
Субстанции природного происхождения
(растительного, животного
или минерального) для производства
нестерильных лекарственных
препаратов
Вспомогательные вещества (мука
пшеничная, крахмал, тальк и т.д.)
Рекомендуемые нормы
3
Субстанции должны быть стерильными
• Общее число аэробных бактерий
и грибов (суммарно) не более
102 в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие энтеробактерий в 1 г
или в 1 мл
• Отсутствие Pseudomonas aeruginosa
в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Staphylococcus aureus
в 1 г или в 1 мл
• Общее число аэробных бактерий
не более 103 в 1 г или в 1 мл
• Общее число грибов не более
102 в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Escherichia coli в 1 г
или в 1 мл
• Общее число аэробных бактерий
не более 104 в 1 г или в 1 мл
• Общее число грибов не более
102 в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Escherichia coli в 1 г
или в 1 мл
• Отсутствие Salmonella в 10 г
или в 10 мл
• Отсутствие Pseudomonas aeruginosa
в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Staphylococcus aureus
в 1 г или в 1 мл
• Энтеробактерий не более
102 в 1 г или в 1 мл
• Общее число аэробных бактерий
не более 103 в 1 г или в 1 мл
• Общее число грибов не более
102 в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Escherichia coli в 1 г
или в 1 мл
• Отсутствие Salmonella в 10 г
или в 10 мл
• Отсутствие Pseudomonas aeruginosa
в 1 г или в 1 мл
• Отсутствие Staphylococcus aureus
в 1 г или в 1 мл
• Других энтеробактерий- не
более 102 в 1 г или в 1 мл
ШГ

Примечания к табл. 32.1 и 32.2
1. В нормативных документах могут быть указаны в виде исключения и другие
нормы в зависимости от состава препарата и особенностей технологического
процесса производства.
2. В нормативных документах на препараты для детей должны быть введены
более жесткие нормы, а именно: количество аэробных бактерий в 1 г или в 1 мл -
в пределах от 100 до 500, количество грибов - от 10 до 50, отсутствие бактерий
семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.
3. При обнаружении во время проведения испытания других патогенных бактерий,
кроме указанных выше, считают, что качество лекарственных средств,
субстанций и вспомогательных веществ не соответствует требованиям по показателю
«микробиологическая чистота».
Испытание на микробиологическую чистоту включает способы подготовки
образцов различных лекарственных форм перед испытанием, отбор образцов
для анализа, методы количественного определения жизнеспособных бактерий
и грибов, выявление и идентификацию отдельных видов бактерий, наличие которых
недопустимо или ограничено в нестерильных лекарственных средствах,
а также питательные среды, растворы и реактивы.
Испытание проводят в асептических условиях, чтобы предотвратить контаминацию
исследуемых образцов.
1. Определение антимикробного действия лекарственного средства
Перед проведением контроля необходимо определить, обладает ли исследуемое
лекарственное средство в условиях испытания на микробиологическую
чистоту антимикробным действием, подавляющим рост отдельных видов бактерий
и грибов, так как это может привести к неправильной оценке результатов
анализа.
Для определения антимикробного действия используют тест-микроорганизмы,
представленные в табл. 32.3.
Таблица 32.3
Тест-микроорганизмы для определения антимикробного действия
Тест-штаммы
Bacillus subtilis ATCC 6633
Bacillus cereus ATCC 10702
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella abony IHE 103/39
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
(или Р. aeruginosa ГИСК 453)
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Candida albicans NCTC 885-653
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 9642
Источник получения
Государственная коллекция патогенных
микроорганизмов ГИСК им. Л.А. Тарасевича,
Россия, г. Москва
Всероссийский микологический Центр,
Россия, г. Санкт-Петербург
Всероссийская коллекция микроорганизмов
РАН, Россия, г. Москва
Кроме вышеперечисленных тест-штаммов можно использовать и другие микроорганизмы
из различных коллекций, типичные по культурально-морфоло-
гическим, тинкториальным и биохимическим свойствам. Набор
тест-микроорганизмов может быть уменьшен или увеличен в зависимости от
способа применения или состава испытуемого лекарственного средства.
1Ш

1.2. Работа с тест-микроорганизмами
Ампулы с лиофилизированными культурами бактерий и грибов вскрывают в
асептических условиях и вносят в них около 0,5 мл соответствующей жидкой
питательной среды (например, среда № 8 - для бактерий, жидкая среда Сабуро -
для C.albicans). Полученную взвесь тест-культур переносят в пробирки с теми же
жидкими питательными средами и инкубируют при соответствующей температуре
в течение 24 ч (бактерии) или 48 ч (C.albicans). После 2-3-х пассажей с
бульона на бульон культуру микроорганизмов пересевают с помощью бактериологической
петли на питательный агар в чашках Петри для получения изолированных
колоний. Выросшую культуру каждого тест-штамма проверяют
визуально на чистоту роста, изучают культурально-морфологические, тинкто-
риальные и биохимические свойства. Типичные колонии пересевают в пробирки
на скошенный агар того же состава и инкубируют, как было указано выше, считая
полученную культуру исходной.
Культуру A.niger пересевают на агар Сабуро и инкубируют при температуре
(22,5 ± 2,5) °С в течение 5-7 сут до появления конидий (экзогенных спор черного
или темно-коричневого цвета).
Культуры бактерий пересевают каждый месяц, грибов - каждые 3 месяца,
делая не более 5 пассажей с агара на агар, после чего используют новую ампулу
или исходную культуру со среды хранения.
Тест-штаммы бактерий хранят при температуре (5 ± 1) °С в лиофилизиро-
ванном состоянии или под слоем стерильного вазелинового масла на среде Романова.
Тест-культуру C.albicans хранят под слоем стерильного вазелинового масла
на среде № 2 (агар Сабуро), в которой количество агара уменьшено до 0,5 %.
Тест-культуру A.niger хранят на среде № 2.
При пересеве культур со сред хранения предварительно удаляют слой масла
над агаром, бактериологической петлей снимают верхний слой агара с выросшей
культурой и переносят его в пробирки со средой № 8 для бактерий, жидкой средой
Сабуро - для C.albicans. Посевы на среде № 8 инкубируют при температуре
(32,5 ± 2,5) °С в течение 18-24 ч, посевы на жидкой среде Сабуро - при температуре
(22,5 ± 2,5) °С в течение 48 ч для C.albicans. Для получения конидий
культуру A.niger пересевают на среду X» 2 и инкубируют при температуре
(22,5 ± 2,5) °С в течение 5-7 сут.
1.2.1. Приготовление спор B.subtilis
Если не удается получить гомогенную взвесь клеток B.subtilis, используют
споры, получаемые следующим образом.
Культуру B.subtilis выращивают в пробирке на скошенном соево-казеиновом
агаре или среде № 1 в течение 24 ч при температуре (32,5 ± 2,5) °С. Смывают
5 мл стерильного 0,9 % изотонического раствора натрия хлорида со стерильными
стеклянными бусами. Взвесь бактерий переносят в матрац с 300 мл скошенного
питательного агара, содержащего для ускорения спорообразования
марганца сульфат в количестве 1 мг/л среды. Посевы инкубируют в течение
7 сут. при температуре (32,5 ± 2,5) °С. Для подтверждения достаточного образования
спор выросшую культуру микроскопируют. Если в мазках, окрашенных

по Граму, имеется в поле зрения 80-90 % спор, делают смыв культуры, внося в
матрац 45 мл стерильного 0,9 % изотонического раствора натрия хлорида. Нагревают
полученную взвесь 30 мин на водяной бане при температуре 65 °С, центрифугируют
при 4300 об/мин в течение 15 мин, отмывают не менее 3 раз
стерильным 0,9 % изотоническим раствором натрия хлорида до полной прозрачности
надосадочной жидкости. Снова нагревают на бане при температуре
65 °С в течение 30 мин. Центрифугируют в течение 15 мин, ресуспендируют осадок
(споры) в том же растворе, определяют количество спор в 1 мл чашечным
агаровым методом. Хранят суспензию спор при (5 ± 1) °С в запаянных ампулах
или пробирках не менее 8 недель.
1.3. Проведение испытания
Испытание на наличие антимикробного действия проводят одним из описанных
ниже методов.
1.3.1. Разведение лекарственного средства
Готовят необходимые разведения лекарственного средства 1:10, 1:50, 1:100,
1:500 и 1:1000 методом последовательных разведений, используя фосфатный
буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном рН 7,0 (п. 4.2).
1.3.2. Приготовление инокулята
24-часовые бульонные культуры бактерий на соево-казеиновом бульоне или
среде № 8 и 48-часовую культуру C.albicans на бульонной среде Сабуро разводят
стерильным раствором натрия хлорида 0,9 % изотоническим 1:1000 (В.се-
reus, C.albicans) и 1:100000 (E.coli, S.abony, P.aeruginosa, S.aureus) до
концентрации около 104 КОЕ/мл. Взвесь спор B.subtilis также разводят до концентрации
104 в 1 мл. Культуру A.niger смывают со скошенного агара Сабуро
или со среды № 2 фосфатным буферным раствором с 0,05 % твина-80. Определяют
количество конидий в 1 мл смыва, используя камеру Горяева или чашечный
агаровый метод, и разводят до концентрации 104 КОЕ/мл.
1.3.3. Метод определения антимикробного действия в условиях испытания на
микробиологическую чистоту
Каждое разведение препарата в количестве 1 мл вносят в 6 чашек Петри диаметром
90 мм, в две из которых добавляют по 0,2 мл взвеси спор B.subtilis, в две
другие - по 0,2 мл взвеси культуры C.albicans, в 2 последние - 0,2 мл взвеси конидий
A.niger. Чашки с бактериями заливают 10-15 мл расплавленного и охлажденного
до (47,5 ± 2,5) °С питательного агара, чашки с культурами грибов -
тем же количеством среды Сабуро. По 1,0 мл каждого разведения препарата вносят
в пробирки с 10 мл жидких сред № 3 и № 8 (или аналогичных), куда затем
добавляют по 1 мл взвеси E.coli, S.abony, P.aeruginosa, S.aureus соответственно
средам, каждый микроорганизм отдельно. В контрольные чашки и пробирки
вместо разведений препарата вносят такое же количество растворителя. Опыт
ставят в двойной повторности. Посевы на средах № 1,3, 8 инкубируют при температуре
(32,5 ± 2,5) °С в течение 48 ч (среды № 3, 8) и 5 сут (среда № 1). Посевы
на среде № 2 инкубируют при температуре (22,5 ± 2,5) °С в течение 5 сут.
После окончания сроков инкубации отмечают появление типичного роста
тест-микроорганизмов в контрольных чашках и пробирках без препарата и наличие
или отсутствие роста тест-штаммов на средах с различными разведениями

препарата. В случае помутнения или изменения окраски среды, затрудняющи
учет результатов, делают пересевы на агаризованные среды. При росте типичных
колоний E.coli, S.abony, P.aeruginosa, S.aureus отмечают отсутствие антимикробного
действия исследуемого препарата.
1.3.4. Метод репликаций
Для водонерастворимых (суспензии, эмульсии и др.) или окрашенных соединений
предпочтительно использовать метод репликаций.
В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл каждого разведения исследуемого
препарата. В контрольные чашки вносят по 1 мл разбавителя, используемого
для получения разведений. В чашки Петри как в эксперименте, так и в контроле,
добавляют по 10-15 мл расплавленного и охлажденного до (45 ±2)°С соево-казе-
инового агара или среды № 1, в другие - такое же количество среды Сабуро и
тщательно перемешивают. Опыт ставят в двойной повторности.
После застывания агара чашки подсушивают для удаления конденсата с поверхности
среды, на которую затем бактериологической петлей, пипеткой или
репликатором наносят инокулят (п. 1.3.2) каждого тест-штамма бактерий и грибов
в виде бляшек на среды № 1 и № 2 (или аналогичные) соответственно.
Чашки с соево-казиновым агаром или средой № 1 инкубируют при температуре
(32,5 ± 2,5) °С в течение 48 ч. Чашки со средой Сабуро инкубируют при температуре
(22,5 ± 2,5) °С в течение не более 5 сут.
1.4. Учет и интерпретация результатов
Наличие такого же роста тест-микроорганизмов, как в контроле, обозначают
знаком «+», отсутствие роста - знаком «-», слабый, замедленный или угнетенный
рост - знаком «±». Если по сравнению с контролем на средах с препаратом
наблюдают заметное уменьшение количества колоний на чашках (более 70 %)
или отсутствие роста тест-микроорганизмов, делают заключение о наличии антимикробного
действия.
Первое из последовательных разведений препарата, в котором отсутствует
антимикробное действие, используют для посева на соответствующую питательную
среду.
1.5. Способы устранения антимикробного действия лекарственных
средств
Для устранения антимикробного действия препаратов применяют следующие
методы:
• Используют соответствующие специфические инактиваторы (например,
парааминобензойную кислоту (ПАБК) и Р-лактамазу), нейтрализующие антимикробное
действие препарата, но не угнетающие рост микроорганизмов,
контаминирующих НЛС.
• Используют неспецифические инактиваторы, добавляя в буферный раствор
и/или в питательные среды: твин-20, твин-80, соевый или яичный лецитин
и др. Для разведения лекарственного средства перед испытанием на микробиологическую
чистоту можно использовать стерильную нейтрализующую
жидкость.
Если разведение в вышеприведенном растворе не инактивирует антимикробные
свойства лекарственного средства, увеличивают концентрацию твина-80
П5БГ

или лецитина. Альтернативно допускается добавление в буферный раствор других
веществ, инактивирующих антимикробное действие лекарственных средств.
• Увеличивают разведение препарата, взяв больший объем растворителя в
пределах норм допустимой микробной загрязненности.
• Применяют метод мембранной фильтрации с последующей промывкой
фильтров, если позволяет природа исследуемого лекарственного средства,
т.е. препарат растворим в воде или в изопропилмиристате (ИПМ).
1.5.1. Инактивация некоторых антибиотиков
Для инактивации пенициллинов и цефалоспоринов, независимо от их лекарственной
формы, в буферный раствор, используемый для растворения, суспен-
дирования или эмульгирования образца, а также в питательные среды перед их
употреблением, асептически вносят стерильный раствор (3-лактамазы в количестве,
указанном в частной фармакопейной статье.
1.5.2. Инактивация сульфаниламидных препаратов
Для инактивации сульфаниламидных препаратов, независимо от их лекарственной
формы, в буферный раствор, используемый для растворения, суспен-
дирования или эмульгирования образца, а также в питательные среды до
стерилизации вносят парааминобензойную кислоту (ПАБК) из расчета 0,05 г/л
среды, если антимикробное действие не удается устранить путем разведения.
1.5.3. Инактивация консервантов, входящих в состав лекарственных
средств
Для инактивации консервантов, входящих в состав ряда лекарственных препаратов,
в буферный раствор, в котором эмульгируют образец, а также в питательные
среды до стерилизации вносят следующие неспецифические
инактиваторы: 3 % твина-80 или 0,3 % лецитина (яичного или соевого) от объема
среды. В случае, если в препарате имеется более 2 консервантов различной химической
структуры, в среду вносят 0,3 % лецитина; 3 % твина-80; 0,1 % L-ги-
стидина и 0,5 % натрия тиосульфата одновременно.
Инактиваторы антимикробного действия консервантов лекарственных
средств указаны в табл. 32.4.
Таблица 32.4
Инактиваторы антимикробного действия консервантов лекарственных средств
Химические
соединения
Фенолы
Ртутно-органи-
ческие соединения
Галогены
Четвертичные
соединения аммония
Ин активатор
•Натрия лаурилсульфат
•Твин-80 и лецитин
•Яичный желток
Натрия тиогликолят
Натрия тиосульфат
Яичный желток
Концентрация
4,0 г/л
30,0 г/л и 3,0 г/л
5,0-50,0 мл/л
0,5-5,0 г/л
5,0 г/л
5,0-50,0 мл/л
Примечание
Добавляют в стерильный
буферный раствор
с натрия хлоридом и
пептоном рН 7,0
—
Добавляют в стерильный
буферный раствор
с натрия хлоридом и
пептоном рН 7,0
па

В качестве растворителя для устранения антимикробного действия используют
также нейтрализующую жидкость лабораторного или промышленного изготовления
следующего состава:
Твина-80 - 30,0 г
Лецитина (яичного или соевого) - 3,0 г
Гистидина гидрохлорида - 1,0 г
Пептона (мясного или казеинового) - 1,0 г
Натрия хлорида - 4,3 г
Калия фосфата однозамещенного - 3,6 г
Натрия фосфата двузамещенного - 7,2 г
Воды очищенной - 1000 мл
Стерилизуют в автоклаве, валидируя
процесс стерилизации
рН после стерилизации - 7,6 ± 0,2
Если в связи с природой лекарственного средства, нерастворимого в воде или
изопропилмиристате, нельзя использовать метод мембранной фильтрации, а все
вышеперечисленные методы устранения его антимикробного действия в отношении
конкретного тест-микроорганизма неэффективны, этот вид испытания
не проводят.
2. Особенности отбора и подготовки образцов для анализа
От каждой исследуемой серии лекарственного средства, независимо от ее
объема, отбирают образец для анализа из достаточного количества разных упаковок
препарата (не менее 3-5).
2.1. Твердые лекарственные формы
2.1.1. Образец для анализа
При анализе препарата используют 10 г образца для определения общего
числа бактерий и грибов в 1 г препарата, для испытания на наличие P.aeruginosa,
S.aureus и E.coli, 10 г образца - для определения Salmonella, 10 г - для количественного
определения других энтеробактерий, если нет других указаний в
частной фармакопейной статье.
2.1.2. Таблетки, драже, гранулы, порошки и др.
10 г образца (если другое количество не указано в частной фармакопейной
статье) измельчают (в случае необходимости) в стерильных фарфоровых ступках
или с помощью специального оборудования и переносят в 100 мл буферного
раствора. Далее проводят количественное и качественное определение микроорганизмов.
2.1.3. Капсулы
10 г образца переносят в 100 мл буферного раствора, содержащего не более
5 % твина-80 и нагретого до температуры не выше 40 °С. После суспендирова-
ния капсул в буферном растворе проводят количественное и качественное определение
микроорганизмов.
2.2. Мягкие лекарственные формы
2.2.1. Образец для анализа
При анализе используют 10 г препарата для определения общего числа

бактерий и грибов, для испытания на наличие P.aeruginosa, S.aureus, E.coli в 1 г
препарата, 10 г образца - для испытания на наличие бактерий сем. Enterobacteriaceae
в 1 г препарата, если нет других указаний в частной фармакопейной
статье.
2.2.2. Мази, линименты, кремы, суппозитории, легко смешиваемые с
водой
10 г образца помещают в стерильную колбу, содержащую 100 мл буферного
раствора и стеклянные бусы диаметром 5-6 мм. Смесь нагревают на водяной
бане до температуры не выше 40 °С и энергично встряхивают до получения гомогенной
эмульсии, которую используют для количественного и качественного
определения микроорганизмов.
2.2.3. Мази, линименты, кремы, суппозитории, трудно смешиваемые с
водой
10,0 г образца смешивают со стерильным твином-80, количество которого не
должно быть более 1/2 объема образца (в данном случае 5 г). Смесь нагревают
на водяной бане или в термостате до температуры не выше 40 °С (в исключительных
случаях - до 45 °С) и осторожно перемешивают. При этом время нагревания
не должно превышать 30 мин. Добавляют необходимое количество
предварительно нагретого до соответствующей температуры стерильного фосфатного
буферного раствора и стеклянные бусы диаметром 5-6 мм. Смесь осторожно
перемешивают для получения гомогенной эмульсии в разведении 1:10,
которую используют для количественного и качественного определения микроорганизмов.
При необходимости готовят последующие десятикратные разведения, используя
фосфатный буферный раствор, содержащий соответствующую концентрацию
стерильного твина-80.
2.3. Жидкие лекарственные формы
2.3.1. Образец для анализа
При анализе препарата используют 10 мл образца для определения общего
числа бактерий и грибов в 1 мл препарата, для испытания на наличие P.aeruginosa,
S.aureus и E.coli, 10 мл образца - для количественного и качественного определения
E.coli и других энтеробактерий, 10 мл - для определения Salmonella.
2.3.2. Растворы, суспензии, сиропы, микстуры
10 мл образца переносят в 90 мл буферного раствора, перемешивают и проводят
количественное и качественное определение микроорганизмов.
2.3.3. Растворы в маслах, эмульсии
10 мл образца помещают в стерильную колбу, содержащую 90 мл буферного
раствора с твином-80 в количестве не более 5 % и стеклянные бусы диаметром
5-6 мм. Смесь нагревают на водяной бане до температуры не выше 40 °С и энергично
встряхивают до получения гомогенной эмульсии, которую используют
для количественного и качественного определения микроорганизмов.
2.4. Аэрозоли
2.4.1. Образец для анализа
При анализе препарата используют 3 г образца для определения общего числа
аэробных бактерий и грибов в 1 г препарата и испытания на наличие
шэ

P.aeruginosa, S.aureus, 3 г образца - для испытания на наличие бактерий семейства
Enterobacteriaceae. Образец отбирают путем многократных нажатий на
шток клапана (насадку).
2.4.2. Аэрозоли на основе спиртов
3 г образца (после испарения пропеллента) переносят в 30 мл буферного раствора,
перемешивают и проводят количественное и качественное определение
микроорганизмов.
2.4.3. Аэрозоли на основе масел
3 г образца (после испарения пропеллента) переносят в 30 мл буферного раствора
с твином-80 в количестве не более 5 % и стеклянные бусы диаметром
5-6 мм. Смесь нагревают на водяной бане до температуры не выше 40 °С и энергично
встряхивают до получения гомогенной эмульсии, которую используют
для количественного и качественного определения микроорганизмов.
2.4.4. Аэрозоли на основе твердых веществ
3 г образца (после испарения пропеллента) переносят в 30 мл буферного раствора,
перемешивают и проводят количественное и качественное определение
микроорганизмов.
2.5. Трансдермальные пластыри
2.5.1. Образец для анализа
При отборе трансдермальных пластырей используют образец, состоящий из
20 единиц.
2.5.2. С каждого из 10 пластырей снимают защитную пленку, пользуясь стерильными
инструментами. При необходимости разрезают пластырь стерильными
ножницами на более мелкие фрагменты, которые переносят в колбу
емкостью 1000 мл, содержащую 500 мл стерильного буферного раствора и стеклянные
бусы диаметром 5-6 мм, нагревают на водяной бане до температуры не
выше 40 °С, энергично встряхивают в течение 30 мин.
50 мл полученного смыва используют для количественного определения микроорганизмов
методом мембранной фильтрации, а также для выделения
P.aeruginosa, S.aureus.
Для выделения и количественного определения энтеробактерий используют
следующие 10 пластырей, которые вносят в лактозный бульон (среду № 11).
Если известно, что пластырь обладает антимикробным действием, в разбавитель
добавляют подходящий инактиватор (твин-80 и/или лецитин).
Если смыв с трансдермальных пластырей нерастворим и нельзя использовать
метод мембранной фильтрации, применяют метод прямого посева на питательные
среды.
2.6. Лекарственные растительные средства
Особенности пробоподготовки цельного, измельченного сырья, фильтр-пакетов,
брикетов представлены в ОФС «Методы микробиологического контроля лекарственных
растительных средств, состоящих из одного вида сырья или
нескольких (сборов) - фасованная продукция, а также растительного сырья
«ангро».
ИСТ

3. Методы количественного определения аэробных бактерий и грибов
Представленные методы предназначены для количественного определения
мезофильных бактерий и грибов, которые растут в аэробных условиях.
3.2. Количественное определение микроорганизмов
В зависимости от природы лекарственного средства и его физико-химических
свойств используют один из вариантов чашечного агарового метода (глубинный,
двухслойный, поверхностный, модифицированный глубинный), метод мембранной
фильтрации или пробирочный метод наиболее вероятных чисел (НВЧ).
3.2.1. Чашечный агаровый метод
Для культивирования микроорганизмов используют агаризованные питательные
среды: соево-казеиновый агар или среду № 1, сухую, для контроля микробной
загрязненности - для выращивания бактерий, агар Сабуро или среду
№ 2, сухую, для контроля микробной загрязненности - для выращивания грибов.
Если нет других указаний в частной фармакопейной статье, посевы на среде
для выращивания бактерий инкубируют при температуре (32,5 ± 2,5) °С, а на
среде для грибов - при температуре (22,5 ± 2,5) °С.
Для каждого разведения образца используют не менее 2-х чашек Петри с
определенной средой.
После расплавления среды охлаждают до температуры (45 ± 5) °С и вносят
в чашки Петри в необходимом количестве.
Глубинный метод
Образец, приготовленный для анализа, в количестве 1 мл вносят в стерильную
чашку Петри диаметром 90 мм. Добавляют 15-20 мл агаризованной питательной
среды и быстро перемешивают вращательными движениями. При большем диаметре
чашек Петри количество среды соответственно увеличивают. После застывания
агара чашки переворачивают и инкубируют посевы.
Двухслойный метод
Агаризованные питательные среды вносят в количестве 15-20 мл в каждую
стерильную чашку Петри диаметром 90 мм и оставляют до застывания. При
большем диаметре чашек Петри количество среды соответственно увеличивают.
Образец, приготовленный для анализа, в количестве 1 мл вносят в пробирку
с 4 мл соответствующей расплавленной и охлажденной питательной среды, быстро
перемешивают содержимое пробирки и переносят на поверхность застывшего
и подсушенного агара в чашке Петри, равномерно распределяя верхний
слой среды вращательными движениями. После застывания чашки переворачивают
и помещают в термостат для инкубации.
Поверхностный метод
Расплавленные и охлажденные питательные среды вносят в количестве
15-20 мл в каждую стерильную чашку Петри диаметром 90 мм и оставляют до
застывания. При большем диаметре чашек Петри количество среды соответственно
увеличивают. Поверхность агара в чашках подсушивают.
Образец, приготовленный для анализа, наносят на агар в количестве 0,1 мл и
равномерно распределяют шпателем по поверхности среды.
Чашки переворачивают и помещают в термостат для инкубации.
ша

Модифицированный глубинный метод
Образец, приготовленный для анализа, в количестве 1 мл вносят в стерильную
чашку Петри диаметром 90 мм. Добавляют 7-10 мл расплавленной и охлажденной
питательной среды и быстро перемешивают вращательными движениями.
После застывания агара чашки переворачивают и инкубируют. Учет результатов
производят через 48-72 ч.
Учет результатов посевов чашечными методами
Посевы просматривают ежедневно. Подсчет колоний производят через
48-72 ч (предварительный результат) и через 5 сут (окончательный результат).
Для получения достоверных результатов отбирают чашки, где число колоний
бактерий находится в пределах от 30 до 300, а колоний грибов - от 10 до 100.
Если при учете результатов двух последующих разведений число колоний на
чашках находится в указанных выше пределах, рассчитывают результаты из
меньшего разведения.
Если в среднем на чашках выросло более 300 колоний бактерий или более
100 колоний грибов, делают ряд дальнейших последовательных разведений образца,
выбирая подходящее для посева.
Если в среднем на чашках выросло менее 30 колоний бактерий и менее 10 колоний
грибов, делают расчет количественного содержания бактерий и грибов
по имеющимся результатам.
Если на питательной среде отсутствует рост микроорганизмов, результаты
отмечают следующим образом: при посеве лекарственного средства в разведении
1:10 - «В 1 г (или в 1 мл) лекарственного средства содержится менее 10 бактерий
(или грибов)», при посеве лекарственного средства в разведении 1:100 —
«В 1 г (или в 1 мл) лекарственного средства содержится менее 100 бактерий (или
грибов)» и т.д.
Количество микроорганизмов в 1 г или в 1 мл рассчитывают по формуле:
с
N= х d,
п
где: 7V- количество микроорганизмов в 1,0 г или в 1,0 мл; с - сумма колоний
на всех чашках; п - число чашек; d - коэффициент разведения образца.
При подсчете количества микроорганизмов в 1,0 г или в 1,0 мл образца, полученный
результат выражают в виде числа в пределах от 1,0 до 9,9, умноженного
на 10х, где х - соответствующий показатель степени основания 10.
Пример. При посеве из разведения 10~2 на двух чашках выросло 168 и 215 колоний:
168 + 215
N = х 102 = 19 150 .
2
Полученный результат округляют до двух значащих цифр - 19 000 и записывают
как 1,9 х ю4.
па

Интерпретация результатов
При необходимости подсчета общего количества микроорганизмов (бактерии
и грибов суммарно) в 1 г или в 1 мл лекарственного средства следует сложить
число аэробных бактерий с числом грибов.
3.2.2. Метод мембранной фильтрации
Метод мембранной фильтрации используют для количественного определения
микроорганизмов в лекарственных средствах, обладающих или не обладающих
антимикробным действием. Метод применим только для растворов и
водорастворимых лекарственных средств, а также для жиросодержащих препаратов,
растворимых в изопропилмиристате.
Для посева используют мембранные фильтры с диаметром пор не более
0,45 мкм, способные эффективно задерживать микроорганизмы, что подтверждается
валидацией. Установка для мембранной фильтрации должна быть такой
конструкции, из которой можно извлечь фильтры и перенести их на питательные
среды. Материал мембраны следует выбирать таким образом, чтобы компоненты
исследуемого препарата не влияли на его эффективность. Фильтры из
нитрата целлюлозы используют для водных, масляных и разбавленных спиртовых
растворов (менее 30 %), из ацетата целлюлозы - для спиртовых растворов
(более 30 %), кислот, щелочей. Мембранную фильтрацию проводят в асептических
условиях с помощью вакуума.
Образец, как правило, растворяют в буферном растворе в соотношении
1:10. В воронку фильтровальной установки вносят сначала промывную
жидкость (примерно 5 мл) для смачивания фильтра. Добавляют 10 мл препарата
в разведении 1:10, соответствующее 1 г образца, и немедленно фильтруют.
В случае наличия антимикробного действия лекарственного средства
для отмывания мембраны используют жидкости № 1 , 2 или 3. Через фильтр
пропускают минимум три порции по 100 мл подходящей стерильной промывной
жидкости. При необходимости к промывной жидкости могут быть
добавлены поверхностно-активные вещества (например, твин-80) или ина-
ктиваторы антимикробного действия. Через одну мембрану можно пропустить
не более 1000 мл жидкости. Допускается использование для
отмывания мембран менее трех порций промывной жидкости при условии
валидации метода.
Смыв с трансдермальных пластырей пропускают через мембранные фильтры
по 50 мл (соответствует 1 пластырю) через каждую мембрану. По окончании
процесса фильтрации мембраны переносят на соответствующие
питательные среды, разлитые в чашки Петри. Чашки с фильтрами переворачивают
и инкубируют в термостате.
Учет результатов
Подсчет колоний производят через 48-72 ч (предварительные результаты)
и через 5 сут (окончательные результаты). Отбирают чашки, где число колоний
бактерий на фильтрах не превышает 100, а грибов - 50, и рассчитывают
число микроорганизмов на 1,0 г, или на 1,0 мл образца, или на
1 пластырь. Если на фильтре большее количество микроорганизмов, то делают
ряд последовательных разведений образца и выбирают подходящее.

Для того, чтобы определить, полностью ли отмыты мембраны от фильтруемого
препарата, обладающего антимикробным действием, после фильтрации
раствора в последнюю порцию промывной жидкости вносят по
отдельности по 1 мл взвеси B.subtilis ATCC 6633 и С.albicans ATCC 885-653,
содержащей от 10 до 100 колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл.
Рост тест-штаммов на фильтрах подтверждает отсутствие антимикробного
действия лекарственного средства. Напротив, отсутствие роста определенного
микроорганизма свидетельствует о сохранении антимикробного
действия лекарственного средства в отношении данного вида микроорганизмов.
В этом случае используют специфические или неспецифические
инактиваторы или увеличивают объем промывной жидкости.
Жидкости для промывания фильтров
Раствор натрия хлорида изотонического 0,9 % стерильного рН 7,0.
Жидкость № 1: 1 г мясного пептона растворяют в 1000 мл воды, фильтруют
или центрифугируют для осветления, разливают во флаконы и стерилизуют.
рН после стерилизации - 7,0 ± 0,2.
Жидкость № 2: 1 мл твина-80 добавляют к 1000 мл жидкости № 1, разливают
во флаконы и стерилизуют. рН после стерилизации - 6,9 ± 0,2. Жидкость
применяют, если в составе препарата имеется масло.
Жидкость № 3: 5 г мясного пептона, 3 г мясного экстракта и 10 г твина-80
растворяют в 1000 мл воды. Разливают во флаконы и стерилизуют. рН после
стерилизации - 6,9 ± 0,2.
3.2.3. Метод наиболее вероятных чисел (НВЧ)
Исследуемый образец готовят в виде раствора, суспензии или эмульсии в
разведениях 1:10, 1:100, 1:1000, используя подходящий растворитель. Жидкую
питательную среду разливают в 12 стерильных пробирок, по 9 мл в каждую.
Пробирки ставят в штатив в 4 ряда по 3 пробирки.
В первый ряд пробирок вносят по 1 мл испытуемого образца в разведении
1:10, во второй ряд - по 1 мл в разведении 1:100, в третий ряд - по 1 мл в
разведении 1:1000. В пробирки четвертого ряда вносят по 1 мл разбавителя,
который используют для растворения, суспендирования или эмульгирования
образца. Посевы инкубируют в течение не более 5 сут.
Учет результатов
Отмечают число пробирок в первом, втором и третьем рядах, в которых
визуально наблюдают рост микроорганизмов. Среда в пробирках четвертого
ряда (контроль разбавителя) должна оставаться стерильной. Полученное
трехзначное число соответствует наиболее вероятному количеству жизнеспособных
микроорганизмов в 1,0 г или в 1,0 мл лекарственного средства,
приведенному в табл. 32.5.
DZ3

Наиболее вероятное число микроорганизмов
Таблица 32.5
Количество проросших пробирок в каждом ряду
Количество препарата в пробирке, в мг
100 мг
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
10 мг
3
3
3
3
2
2
2
2
1
1
1
1
0
0
0
0
1 мг
3
2
1
0
3
2
1
0
3
2
1
0
3
2
1
0
Наиболее вероятное
число
микроорганизмов, в 1 г
> 1100
1100
460
240
290
210
150
93
160
120
75
43
95
64
39
23
Пример. В первом ряду рост микроорганизмов наблюдается в 3-х пробирках,
во втором ряду - в 2-х пробирках, в третьем ряду - в 1 пробирке. Полученное
число «321» по табл. 32.5 соответствует цифре «150».
Следовательно, наиболее вероятное число бактерий в 1 г или 1 мл исследуемого
образца - 150. Если учет результатов не может быть определен точно в
связи с природой исследуемого препарата (помутнение среды, изменение ее цвета
и т.п.), делают пересев на соответствующую жидкую или агаризованную
среду, чтобы убедиться в наличии роста микроорганизмов.
Варианты чашечного агарового метода (глубинный, двухслойный и модифицированный
глубинный) можно использовать при испытании различных лекарственных
форм, независимо от уровня микробной загрязненности.
Поверхностный агаровый метод предпочтительнее использовать при испытании
нестерильных лекарственных средств с высоким уровнем микробной контаминации.
Для количественного определения в ускоренные сроки бактерий и грибов, колонии
которых склонны к сливному росту, используют модифицированный глубинный
агаровый метод посева.
Метод мембранной фильтрации используют при испытании растворов водорастворимых
лекарственных средств и жиросодержащих лекарственных
средств, растворимых в изопропилмиристате.
Метод НВЧ используют при испытании лекарственных средств с низким
уровнем микробной контаминации, а также в тех случаях, когда нельзя применить
другие методы. Метод НВЧ менее чувствителен и точен по сравнению с
чашечным агаровым методом или методом мембранной фильтрации. Метод
па

используется только для определения общего числа бактерий, так как результаты,
полученные для определения общего числа грибов, особенно плесневых,
считаются недостоверными.
3.2.4. Повторение испытания
В случае необходимости при повышенном уровне контаминации испытание
повторяют, используя удвоенное количество препарата.
4. Определение отдельных видов бактерий
Испытание включает использование селективных и дифференциально-диагностических
питательных сред, а также сред для предварительной инкубации
посевов исследуемых образцов.
4.1. Энтеробактерии и подобные им грамотрицательные микроорганизмы
При выявлении бактерий семейства Enterobacteriaceae могут быть выделены
другие подобные им виды микроорганизмов, например, бактерии рода
Aeromonas и рода Pseudomonas.
4.1.1. Выделение бактерий
Для восстановления жизнеспособности микроорганизмов, поврежденных во
время технологического процесса, используют предварительную инкубацию
образца в жидкой питательной среде.
10,0 г или 10,0 мл исследуемого образца переносят в 100 мл лактозного
бульона (среда № 11), перемешивают и инкубируют в течение, как правило, двух
) часов, но не более пяти. После инкубации перемешивают содержимое флакона
К (гомогенат А) и переносят 10 мл (количество, соответствующее 1 г или 1 мл об-
\ разца) в 100 мл среды обогащения (бульон Мосселя, среда № 3). Посев инкуби-
-J руют в течение 18-48 ч. При появлении роста делают пересев
\ бактериологической петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда № 4), кото-
/ рую инкубируют при той же температуре в течение 18-24 ч.
При испытании микробиологической чистоты трансдермальных пластырей
10 пластырей помещают в 500 мл лактозного бульона (среда № 11), осторожно
встряхивают, избегая вспенивания среды, в течение не менее 15 мин. 50 мл
смыва пропускают через стерильный мембранный фильтр из нитрата целлюлозы
с диаметром пор 0,45 мкм, который переносят в 100 мл среды обогащения
(бульон Мосселя, среда № 3) и инкубируют в течение 18-24 ч. При наличии роста
в жидкой среде пересевают петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда № 4),
которую инкубируют при той же температуре в течение 18-24 ч для выделения
энтеробактерии и других грамотрицательных микроорганизмов.
Появление на плотной среде колоний грамотрицательных палочек является
свидетельством того, что исследуемый образец контаминирован вышеупомянутыми
бактериями.
4.1.2. Количественное определение
Для посева используют три пробирки с 9 мл бульона Мосселя или среды № 3
в каждой. Гомогенат А в количестве 1 мл (соответствует ОД г образца) вносят в
первую пробирку, тщательно перемешивают и переносят 1 мл (соответствует
0 01 г образца) во вторую пробирку, снова перемешивают и переносят 1 мл
па

(соответствует 0,001 г образца) в третью пробирку, меняя пипетку после каждого
шага (рис. 32.1). Посевы инкубируют в течение 24-48 ч.
^ -^ ср. №3 ср. №3 ср. №3
ГомогенатА 0.1 г 0,01 г 0,001 г
Рис. 32.1. Схема количественного определения энтеробактерий
В случае роста, для подтверждения наличия энтеробактерий делают пересев
петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда № 4) и инкубируют чашки Петри
в течение 18-24 ч. Появление на плотной среде колоний грамотрицательных палочек
является положительным тестом, отсутствие роста этих колоний - отрицательным
тестом. Наиболее вероятное количество энтеробактерий и других
грамотрицательных микроорганизмов в 1 г или 1 мл образца определяют по
табл. 32.6.
Таблица 32.6
Определение количества энтеробактерий и
других грамотрицательных бактерий в образце
Соответствующее количество испытуемого образца
0,1 г
1 мл
гомогената 1
+
+
+
-
0,01 г
1 мл гомогената 1
в разведении 1:10
+
+
-
-
0,001 г
1 мл гомогената 1
в разведении 1:100
+
-
-
-
Наиболее
вероятное
количество
бактерий
в 1 г образца
Более 103
От102до103
От 101 до 102
Менее 101
Обозначения: (+) - положительный тест
(-) - отрицательный тест
4.2. Выявление Escherichia coli
Исследуемый образец, разведенный стерильным буферным раствором 1:10,
переносят в количестве 10 мл (соответствует 1 г или 1 мл) в 100 мл жидкой питательной
среды (соево-казеиновый бульон, среда № 8), перемешивают и инкубируют
в течение 18-48 ч. 1 мл содержимого флакона переносят в 10 мл бульона
Мак-Конки или среды № 3. Посевы инкубируют в течение 18-24 ч.
При наличии роста, в случае равномерного помутнения среды в пробирках,
делают пересев петлей на плотные среды - агар Мак-Конки или среду № 4. Посевы
инкубируют в течение 18-48 ч (агар Мак-Конки) или 18-24 ч (среда № 4).
На агаре Мак-Конки E.coli образует красные неслизистые колонии, на среде
№ 4 - малиновые колонии с металлическим блеском, окруженные малиновыми
зонами, неслизистые. Подозрительные на принадлежность к E.coli колонии на

плотных средах микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицатель-
ных палочек отдельные колонии отсевают на скошенный в пробирках
соево-казеиновый агар (среду № 1) и инкубируют в течение 18-24 ч.
Для подтверждения используют биохимические тесты. Из пробирок с чистой
культурой делают пересевы на агар Симмонса (среда № 14) и соево-казеиновый
бульон (среда № 15), а также проводят тест на наличие фермента цитохромок-
сидазы. Через 18-24 ч инкубации отмечают бактериальный рост или его отсутствие
на агаре Симмонса (среда № 14). Утилизацию цитрата устанавливают по
смещению рН-среды в щелочную сторону (изменению цвета среды из зеленого
в синий). Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности
соево-казеинового бульона (среды № 15) при добавлении реактива
Ковача.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки,
не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не утилизирующие цитрат
натрия и образующие индол, считают, что лекарственное средство контамини-
ровано Е.соИ.
4.2.1. Количественное определение E.coli
Количественное определение E.coli проводят таким же образом, как количественное
определение других энтеробактерий (раздел 4.1.2), делая пересев из
гомогената А в пробирки с бульоном Мак-Конки или средой № 3. В случае равномерного
помутнения среды в пробирках для подтверждения наличия E.coli из
каждой пробирки делают пересев петлей на плотную среду (агар Мак-Конки,
среда № 4). Посевы инкубируют в течение 18-48 ч (агар Мак-Конки) или 18-24 ч
(среда № 4).
Появление на средах характерных для E.coli колоний грамотрицательных палочек
(раздел 4.2) является положительным тестом, отсутствие роста этих колоний
- отрицательным тестом. Наиболее вероятное количество клеток Е.соИ в
1 г или в 1 мл образца определяют по табл. 32.6.
4.3. Выявление бактерий рода Salmonella
10,0 г или 10,0 мл исследуемого образца переносят в 100 мл соево-казеинового
бульона или среды № 8, перемешивают и инкубируют в течение 18-24 ч.
При наличии роста 1 мл после перемешивания переносят в 10 мл тетратионат-
ного бульона или среды № 12 и инкубируют в течение 16-24 ч. Делают пересев
петлей минимум на 2 из 4-х плотных диагностических сред (Дезоксихолат-цит-
рат агар, Ксилоза-лизин-дезоксихолат агар, Агар с бриллиантовым зеленым, феноловым
красным, с лактозой и сахарозой, Висмут-сульфит агар - среда № 5) и
инкубируют в течение 24-48 ч. На Дезоксихолат-цитрат агаре бактерии из рода
Salmonella образуют хорошо развитые бесцветные колонии. На Ксилоза-лизин-
дезоксихолат агаре - хорошо развитые красные колонии с черными центрами
или без них. На Агаре с бриллиантовым зеленым, феноловым красным, с лактозой
и сахарозой - мелкие, блестящие, бесцветные, розовые или опалово-белые
колонии, часто окруженные розовой или красной зоной. На Висмут-сульфит
агаре (среда № 5) бактерии из рода Salmonella образуют, как правило, черные
колонии с характерным металлическим блеском, при этом участок среды под
колонией прокрашивается в черный цвет.
шз

Колонии, подозрительные на принадлежность к роду Salmonella, микроско-
пируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек 2-3 характерные
колонии (каждую отдельно) пересевают на трехсахарный агар с солями
железа (среда № 13), нанося большое количество культуры петлей сначала на
скошенную часть агара, а потом уколом в столбик, не касаясь дна пробирки.
Через 24 ч инкубации отмечают изменение цвета из красного в желтый в столбике
питательной среды. Почернение среды свидетельствует об образовании сероводорода
- типичном признаке видов рода Salmonella. Параллельно ставят
тест на наличие фермента «цитохромоксидаза», используя чистую культуру со
скошенного соево-казеинового агара или среды № 1. Если требуется дополнительное
подтверждение, можно использовать подходящие биохимические и серологические
тесты.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки,
не обладающие ферментом «цитохромоксидаза», не ферментирующие
сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное
средство контаминировано бактериями рода Salmonella.
4.4. Выявление Pseudomonas aeruginosa
Исследуемый образец, разведенный стерильным буферным раствором 1:10,
переносят в количестве 10 мл (соответствует 1 г или 1 мл) в 100 мл жидкой питательной
среды (соево-казеиновый бульон, среда № 8), перемешивают и инкубируют
в течение 24-48 ч. При наличии роста пересевают петлей на
селективную питательную среду для выделения синегнойной палочки (цетри-
мидный агар, цетилпиридиний хлорид (ЦПХ) агар - среда № 16). Выросшие
колонии грамотрицательных палочек пересевают на среду № 9 для выявления
сине-зеленого пигмента пиоцианин. Посевы инкубируют в течение 24-48 ч.
Для подтверждения видовой принадлежности используют биохимический
тест на наличие фермента «цитохромоксидаза» и способность выделенной
культуры расти на соево-казеиновом бульоне или среде № 8 при температуре
(42 ± 1) °С в течение 18-24 ч.
При испытании микробиологической чистоты трансдермальных пластырей
10 пластырей помещают в 500 мл фосфатного буферного раствора, осторожно
встряхивают в течение не менее 15 мин. 50 мл смыва пропускают через стерильный
мембранный фильтр из нитрата целлюлозы с диаметром пор 0,45 мкм,
который переносят в 100 мл соево-казеинового бульона или среды № 8 и инкубируют
в течение 24-48 ч. После инкубации, при наличии роста, пересевают
петлей на селективные среды - цетримидный или ЦПХ-агары. Дальнейшую
идентификацию проводят, как указано выше.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки,
образующие сине-зеленый пигмент пиоцианин, обладающие ферментом
«цитохромоксидаза» и растущие при температуре (42 ± 1) °С, считают, что лекарственное
средство контаминировано P. aeruginosa.
4.5. Выявление Staphylococcus aureus
Исследуемый образец, разведенный стерильным буферным раствором 1:10,
переносят в количестве 10 мл (соответствует 1 г или 1 мл) в 100 мл жидкой питательной
среды (соево-казеиновый бульон или среда № 8), перемешивают и

инкубируют в течение 24-48 ч. При наличии роста пересевают петлей на селективные
питательные среды: агар Фогеля-Джонсона, Берда-Паркера или среду
№ 10 и инкубируют в течение 24-48 ч. Черные блестящие колонии грамполо-
жительных кокков, окруженные желтыми зонами, на среде Фогеля-Джонсона
черные колонии на среде Берда-Паркера или золотисто-желтые колонии, окруженные
желтыми зонами, на среде № 10 свидетельствуют о наличии S.aureus
Для идентификации используют реакцию плазмокоагуляции с чистой культурой
стафилококка, отсеянной на соево-казеиновый агар или среду № 1.
При испытании микробиологической чистоты трансдермальных пластырей,
10 пластырей помещают в 500 мл фосфатного буферного раствора, осторожно
встряхивают в течение не менее 15 мин.
50 мл смыва пропускают через стерильный мембранный фильтр из нитрата
целлюлозы с диаметром пор 0,45 мкм, который переносят в 100 мл соево-казе-
инового бульона или среды № 8 и инкубируют в течение 24-48 ч. После инкубации
при наличии роста пересевают петлей на агар Фогеля-Джонсона,
Берда-Паркера или среду № 10 для выделения S.aureus.
Если в образце обнаружены грамположительные кокки, ферментирующие
маннит (среда Фогеля-Джонсона, среда № 10), обладающие ферментом коагу-
лаза, считают, что лекарственное средство контаминировано S.aureus.
5. Биохимические тесты для идентификации микроорганизмов
5.1. Тест на наличие цитохромоксидазы
Реактив: 1% раствор ]Ч,М-диметил-пара-фенилендиамина дигидрохлорида.
Раствор хранят при температуре от 4 до 10 °С во флаконах нейтрального светозащитного
стекла. Раствор должен быть бесцветным.
Полоску фильтровальной бумаги смачивают реактивом. Платиновой петлей
или стеклянной палочкой наносят 24-часовую чистую культуру исследуемых
бактерий, выросших на соево-казеиновом агаре или среде № 1. Темно-красное
окрашивание, яоявляющееся в течение 1 мин, свидетельствует о положительной
оксидазной реакции. Положительным контролем служит культура P.aeruginosa,
отрицательным - культура E.coli.
5.2. Тест на наличие индола
Реактив Ковача:
Спирта амилового или изоамилового - 75 мл
Пара-диметиламинобензальдегида - 5 г
Хлористоводородной кислоты конц. - 20 мл
Навеску альдегида растворяют в спирте при легком нагревании (на водяной
бане при 50-55 °С), остужают и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в
защищенном от света месте при температуре от 4 до 10 °С. Реактив должен быть
желтого цвета. При неправильном хранении цвет реактива становится коричневым,
и реактив непригоден для использования.
В пробирку с соево-казеиновым бульоном или со средой № 15, в которой выросла
исследуемая культура, вносят 0,5 мл реактива Ковача и слегка встряхивают.
Через несколько минут при наличии индола наблюдают появление
0

красного кольца на поверхности среды в пробирке. Положительным контролем
является культура E.coli, отрицательным - культура S.abony.
5.3. Тест на наличие коагулазы (реакция плазмокоагуляции)
Сухую цитратную кроличью плазму разводят согласно приложенной инструкции
0,9 % стерильным раствором натрия хлорида изотоническим и разливают
по 0,5 мл в стерильные пробирки. В пробирку помещают 1 петлю
суточной культуры выделенных кокков, выращенных на соево-казеиновом
агаре или на среде № 1. Положительным контролем служит культура S.aureus,
отрицательным - культура S.epidermidis. Необходимо поставить также контроль
неконтаминированной плазмы. Пробирки инкубируют при температуре
(32,5 ± 2,5) °С. Реакцию плазмокоагуляции отмечают через каждый час в течение
4-6 ч, слегка наклоняя пробирку, но, не встряхивая ее.
При отсутствии положительной реакции плазмокоагуляции удлиняют время
инкубации до 24 ч для получения окончательных результатов.
Тест на наличие коагулазы считается положительным при коагуляции плазмы.
6. Питательные среды. Определение ростовых и селективных свойств
Для испытания лекарственных средств на стерильность и микробиологическую
чистоту используют питательные среды отечественного или зарубежного
производства.
Готовить питательные среды следует, строго придерживаясь приведенной рецептуры,
а сухие питательные среды - согласно инструкции по применению
предприятия-изготовителя. Необходимый рН питательных сред устанавливают
при температуре (25 ± 2) °С. Среды стерилизуют в автоклаве в течение 15 мин
при температуре 121 °С, если нет других указаний, при условии валидации процесса
стерилизации.
Определение ростовых и селективных свойств проводят для каждой серии
коммерческой среды (сухой и готовой к использованию), а также для каждой
партии среды, изготовленной в лаборатории.
Питательные среды должны обеспечивать рост и развитие микроорганизмов-
контаминантов лекарственных средств.
6.1. Рекомендуемые растворы и питательные среды
• Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном рН 7,0
Калия фосфата однозамещенного 3,6 г
Натрия фосфата двузамещенного 7,2 г
Натрия хлорида 4,3 г
Пептона (мясного или казеинового) 1>0 г
Воды очищенной 1000 мл
• Полужидкий агар для хранения тест-микроорганизмов
Панкреатического гидролизата казеина 8,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Агара 5,0 г
Воды очищенной 100° м л
РН после стерилизации 7,0±0,2

• Соево-казеиновый агар (Casein Soya Bean Digest Agar)
Панкреатического гидролизата казеина 15,0 г
Папаинового гидролизата бобов сои 5,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Агара 15,0 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 ± 0,2
Отечественная среда для выращивания аэробных бактерий - среда № 1 для
контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Агар Сабуро с глюкозой и антибиотиками (Sabouraud Glucose Agar
with antibiotics)
Пептона (мясного и казеинового) 10,0 г
Глюкозы моногидрата 40,0 г
Агара 15,0 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 5,6 ± 0,2
Отечественная среда для выращивания дрожжевых и плесневых грибов —
среда № 2 (агар Сабуро с глюкозой и антибиотиками) для контроля микробной
загрязненности, сухая, различных производителей.
Перед употреблением добавляют 0,1 г натриевой соли бензилпенициллина и
0,1 г тетрациклина на 1 л среды в виде стерильных растворов или добавляют
альтернативно 50 мг хлорамфеникола (левомицетина) на 1 л среды перед стерилизацией.
• Бульон Мосселя для обогащения энтеробактерий (Enterobacteria Enrichment
Broth - Mossel)
Панкреатического гидролизата желатина 10,0 г
Глюкозы моногидрата 5,0 г
Бычьей желчи сухой 20,0 г
Калия фосфата однозамещенного 2,0 г
Натрия фосфата двузамещенного 8,0 г
Бриллиантового зеленого 0,015 г
Воды очищенной 1000 мл
рН 7,2 ± 0,2
Среду нагревают при 100 °С в течение 30 мин с последующим быстрым охлаждением.
Отечественная среда обогащения для энтеробактерий - среда № 3 для
контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Агар Мосселя (Crystal violet, Neutral Red, Bile Agar )
Дрожжевого экстракта 3,0 г
Панкреатического гидролизата казеина 7,0 г
Солей желчи 1,5 г
Лактозы моногидрата 10,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Глюкозы моногидрата 10,0 г
Агара 15,0 г
Нейтрального красного 0,03 г
ЕЕЯГ

Кристаллического фиолетового 0,002 г
Воды очищенной 1000 мл
рН 7,4 ± 0,2
Нагревают до кипения. Нельзя нагревать в автоклаве.
Отечественная среда для выделения энтеробактерий - среда № 4 для контроля
микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Бульон Мак-Конки (MacConkey Broth)
Панкреатического гидролизата желатина 20,0 г
Лактозы моногидрата 10,0 г
Бычьей желчи сухой 5,0 г
Бромкрезолового пурпурного 10,0 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 ± 0,2
Отечественная среда обогащения для энтеробактерий - среда № 3 для
контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Агар Мак-Конки (MacConkey Agar)
Панкреатического гидролизата желатина 17,0 г
Пептона (мясного и казеинового) 3,0 г
Лактозы моногидрата 10,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Солей желчи 1,5 г
Агара 13,5 г
Нейтрального красного 0,03 г
Кристаллического фиолетового 0,001 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,1 ± 0,2
Перед стерилизацией кипятят 1 мин, постоянно встряхивая.
Отечественная среда для выделения энтеробактерий — среда № 4 для контроля
микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Дезоксихолат цитрат агар (Deoxycholate Citrate Agar)
Мясного экстракта 10,0 г
Мясного пептона 10,0 г
Лактозы моногидрата 10,0 г
Натрия цитрата 20,0 г
Железа цитрата 1,0 г
Натрия дезоксихолата 5,0 г
Агара 13,5 г
Нейтрального красного 0,02 г
Воды очищенной 1000 мл
рН 7,3 ± 0,2
Доводят до кипения на медленном огне и кипятят в течение 1 мин, охлаждают
до 50 °С и разливают в чашки Петри. Нельзя нагревать в автоклаве.
• Ксилоза, лизин, дезоксихолат агар (Xylose, Lisine, Deoxycholate Agar)
Ксилозы 3,5 г
L-лизина 5,0 г
1Ш

7 5 г
Лактозы моногидрата ' >^
Сахарозы ^г
Натрия хлорида ^ г
Дрожжевого экстракта ->>^ г
Фенолового красного °>°° г
Агара ,Р'5 г
Натрия дезоксихолата ^>-> г
Натрия тиосульфата ">° г
Железа аммоний цитрата 0,8 г
Воды очищенной 1000 мл
рН 7>4 ± °>2
Доводят до кипения, охлаждают до 50 °С и разливают в чашки Петри. Нельзя
нагревать в автоклаве.
• Агар с бриллиантовым зеленым, феноловым красным, лактозой и сахарозой
(Brilliant Green Agar Medium)
Пептона (мясного и казеинового) 10,0 г
Дрожжевого экстракта 3,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Лактозы моногидрата 10,0 г
Сахарозы 10,0 г
Агара 20,0 г
Фенолового красного 0,08 г
Бриллиантового зеленого 0,0125 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 6,9 ± 0,2
Кипятят 1 мин. Используют сразу после автоклавирования.
• Висмут-сульфит агар (Bismuth Sulfite agar)
Мясного экстракта 5,0 г
Мясного пептона 10,0 г
Глюкозы моногидрата 5,0 г
Натрия фосфата двузамещенного 4,0 г
Железа сульфата 0,3 г
Бриллиантового зеленого 0,025 г
Висмута сульфита 8,0 г
Агара 15,0 г
Воды очищенной 1000 мл
рН 7,6 ± 0,2
Среду не автоклавируют. Приготовленная среда мутная, зеленого цвета.
Отечественная среда для выделения сальмонелл - среда № 5 для контроля
микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Бульон с глюкозой (Dextrose Broth)
Мясного пептона 10,0 г
Мясного экстракта 3,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Глюкозы моногидрата 10,0 г
Бромкрезола пурпурного 0,02 г
Воды очищенной 1000 мл
*Ш

рН после стерилизации 7,2 ± 0,2
Отечественная среда для идентификации энтеробактерий - среда № б для
контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Нитратный бульон (Nitrate Broth)
Мясного пептона 8,6 г
Натрия хлорида 6,4 г
Калия нитрата 1,5 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 ± 0,2
Отечественная среда для идентификации энтеробактерий - среда № 7 для
контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Соево-казеиновый бульон (Casein Soya Bean Digest Broth)
Панкреатического гидролизата казеина 17,0 г
Папаинового гидролизата бобов сои 3,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Калия фосфата двузамещенного 2,5 г
Глюкозы моногидрата 2,5 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,3 ± 0,2
Отечественная среда для выращивания бактерий - среда № 8 для контроля
микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Цетримидный агар (Cetrimide Agar)
Панкреатического гидролизата желатина 20,0 г
Магния хлорида 1,4 г
Калия сульфата двузамещенного 10,0 г
Цетримида (цетилпиридиния бромида) 0,3 г
Агара 13,6 г
Глицерина 10,0 мл
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 ± 0,2
Отечественная среда для выделения синегнойной палочки - ЦПХ-агар для
выделения синегнойной палочки, сухая.
• ЦПХ-агар
Пептона сухого ферментативного 20,0 г
Калия сернокислого 7,6 г
Магния сернокислого семиводного 2,4 г
Соды кальцинированной 1,0 г
Фенозан-кислоты 0,2 г
ЦПХ (N-цетилпиридиния хлористого 1-водного) 0,3 г
Агара 8 г
Воды очищенной 1000 мл
рН 7,2 ± 0,2
Среду не стерилизуют.
ЕШ

• Агар для выявления пиоцианина Pseudomonas (Pseudomonas Agar
Medium for Detection ofPyocyanin)
Панкреатического гидролизата желатина 20,0 г
Магния хлорида безводного 1,4 г
Калия сульфата безводного 10,0 г
Агара 15,0 г
Глицерина 10,0 мл
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 ± 0,2
Все компоненты, кроме глицерина, растворяют в воде. Нагревают при перемешивании
и кипятят 1 мин. Добавляют глицерин и стерилизуют.
Отечественная среда для идентификации синегнойной палочки — среда № 9
для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Агар Берда-Паркера (Baird-Parker Agar)
Панкреатического гидролизата казеина 10,0 г
Мясного экстракта 5,0 г
Дрожжевого экстракта 1,0 г
Лития хлорида 5,0 г
Агара 20,0 г
Глицина 12,0 г
Натрия пирувата 10,0 г
Воды очищенной 950 мл
рН после стерилизации 6,8 ± 0,2
После стерилизации охлаждают до 45-50 °С и добавляют 10 мл стерильного
1 % раствора калия теллурита и 50 мл коммерческой желточной эмульсии.
• Агар Фогеля-Джонсона (Vogel- Johnson Agar Medium)
Панкреатического гидролизата казеина 10,0 г
Дрожжевого экстракта 5,0 г
Маннита 10,0 г
Калия фосфата двузамещенного 5,0 г
Лития хлорида 5,0 г
Глицина 10,0 г
Агара 16,0 г
Фенолового красного 0,025 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 7,2 ± 0,2
После стерилизации охлаждают до 45-50 °С и добавляют 20 мл 1% стерильного
раствора калия теллурита.
Отечественная среда для выделения золотистого стафилококка - среда № 10
для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Лактозный бульон (Lactose Monohydrate Broth)
Мясного экстракта 3,0 г
Панкреатического гидролизата желатина 5,0 г
Лактозы моногидрата 5,0 г
Воды очищенной 1000 мл
рН после стерилизации 6,9 ± 0,2
юз - -

После стерилизации следует быстро охладить среду.
Отечественная среда для предварительного обогащения энтеробакте-
рий - среда № 11 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных
производителей.
• Тетратионатный желчный бульон с бриллиантовым зеленым (Tetrathionate
Bile Brilliant Green Broth)
Пептона 8,6 г
Бычьей желчи сухой 8,0 г
Натрия хлорида 6,4 г
Кальция карбоната 20,0 г
Калия тетратионата 20,0 г
Бриллиантового зеленого 0,07 г
Воды очищенной 1000 мл
рН 7,0 ± 0,2
Нагревают до кипения. Нельзя перегревать. Перед употреблением к 1000 мл
среды добавляют 20 мл раствора йода с калия йодидом (6 г йода металлического,
5 г калия йодида, 20 мл воды очищенной).
Отечественная среда для выделения сальмонелл - среда №12 для контроля
микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
• Трехсахарный агар с солями железа (Triple Sugar - Iron -Agar)
Мясного экстракта 3,0 г
Дрожжевого экстракта 3,0 г
Пептона (казеинового и мясного) 20,0 г
Натрия хлорида 5,0 г
Лактозы моногидрата 10,0 г
Сахарозы 10,0 г
Глюкозы моногидрата 1,0 г
Железо-аммоний цитрата 0,3 г
Натрия тиосульфата 0,3 г
Фенолового красного 0,025 г
Агара 12,0 г
Воды очищенной Ю00 м л
рН после стерилизации 7,4 ± 0,2
Среду разливают в пробирки, наполняя их на 1/3 объема. После стерилизации
среду скашивают таким образом, чтобы образовались столбик и косяк.
Отечественная среда для идентификации сальмонелл - среда № 13 для контроля
микробной загрязненности, сухая, различных производителей^.
• Цитратный агар Симмонса
Натрия хлорида 5,0 г
Магния сульфата 0,2 г
Аммония дигидрофосфата 1 '0 г
Калия гидрофосфата 1 '0 г
Натрия цитрата 3,0 г
Бромтимолового синего 0,08 г
Агара 20 г
Воды очищенной 1000 мл
ш

рН после стерилизации 7,2 ± 0,2
Отечественная среда для идентификации Е. coli - среда №14 для контроля
микробной загрязненности, сухая, различных производителей.
Примечание. Входящие в состав питательных сред индикаторы и красители
добавляют в виде растворов определенной концентрации.
6.2. Ростовые и селективные свойства питательных сред
Основными биологическими критериями качества питательных сред
являются их ростовые и селективные свойства, определяемые с помощью микроорганизмов
и стандартных питательных сред. В качестве стандартных используют
среды, готовые к употреблению, с сертификатом производителя, а
также аттестованные в лаборатории среды высокого качества.
Ростовые свойства - это способность питательной среды обеспечивать эффективный
и типичный рост соответствующих микроорганизмов.
Селективные свойства - это способность питательной среды частично или
полностью подавлять рост сопутствующих микроорганизмов (ассоциантов) при
обеспечении роста тест-штаммов.
Тест-микроорганизмы, штаммы-ассоцианты и условия инкубации для определения
ростовых и селективных свойств питательных сред представлены в
табл. 32.7.
Приготовление рабочей взвеси микроорганизмов
Культуры бактерий и C.albicans смывают с поверхности скошенного агара стерильным
0,9 % раствором натрия хлорида. Готовят стандартные взвеси каждого
тест-штамма, соответствующие 10 Единицам по стандартному образцу мутности
ОСО 42-28-85. Для культур Bacillus subtilis, Bacillus cereus и Candida albicans
- это концентрация 107 КОЕ/мл, для Escherichia coli, Salmonella abony,
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus - 109 КОЕ/мл. Стандартные
взвеси методом последующих десятикратных разведений доводят стерильным
0,9 % раствором натрия хлорида до концентрации 102 и 103 КОЕ/мл. Для определения
фактической концентрации рабочих взвесей бактерий и C.albicans, высевают
поверхностным методом из концентрации 103 КОЕ/мл по 0,1 мл на
чашку с соответствующей агаризованной средой.
Для смыва конидий A.niger с агара Сабуро используют стерильный 0,9 % раствор
натрия хлорида, содержащий 0,05 % твина-80. Количество конидий в 1мл
взвеси определяют с помощью камеры Горяева или посевом подходящего разведения
на агар Сабуро.
Для посева готовят рабочую взвесь A.niger с концентрацией конидий 0,5-103
в 1 мл, которую высевают поверхностным методом по 0,1 мл на чашки с агаром
Сабуро.
Приготовленные рабочие взвеси монокультур используют для определения
ростовых и селективных свойств питательных сред. Для определения селективных
свойств дополнительно готовят посевную дозу, состоящую из равных количеств
рабочих взвесей тест-микроорганизма и штамма-ассоцианта, при этом
количество КОЕ штамма-ассоцианта должно быть на 2 порядка выше.
ш

Определение ростовых свойств агаризованных сред
Испытуемую и стандартную агаризованные среды разливают в чашки Петри
диаметром 90 мм по 15 мл, подсушивая агар после застывания. По 0,1 мл рабочей
взвеси тест-микроорганизма с концентрацией 103 КОЕ/мл засевают поверхностным
методом на чашки с испытуемой и стандартной средами в
тройной повторно сти.
На агаризованных средах после инкубации описывают морфологические особенности
колоний, подсчитывают колонии тест-микроорганизмов и определяют
коэффициент прорастания по формуле:
N
К = — ,
* N° где: N— среднее арифметическое число колонии на чашке с испытуемой
средой;
N0 - среднее арифметическое число колоний на чашке со стандартной
средой.
Испытуемая агаризованная среда считается годной к употреблению, если
коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной питательной
средой.
Определение ростовых свойств жидких сред
Жидкие испытуемые и стандартные питательные среды разливают в стерильные
пробирки размером 15х 150 мм по 10 мл. По 1,0 мл рабочей взвеси тест-
микроорганизма с концентрацией 102 КОЕ/мл засевают в 3 пробирки с каждой
средой. Рост микроорганизмов определяют визуально по помутнению и/или изменению
цвета среды после периода инкубации. Из пробирок, в которых наблюдается
рост, после предварительного разведения до 103 КОЕ/мл делают
пересев по 0,1 мл на соответствующую стандартную агаризованную среду.
После инкубации описывают морфологические особенности колоний, подсчитывают
колонии тест-микроорганизмов и определяют коэффициент прорастания
по указанной выше формуле.
Испытуемая жидкая среда считается годной к употреблению, если коэффициент
прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной жидкой питательной
средой.
Определение селективных свойств
Для оценки селективных свойств питательных сред испытуемую и стандартную
среды заражают взвесью тест-микроорганизмов (монокультура) и параллельно
смесью тест-штамма и штамма-ассоцианта в определенной пропорции.
В случае нескольких штаммов-ассоциантов каждый из них смешивают с тест-
микроорганизмом отдельно.
Посев на агаризованные среды осуществляют поверхностным методом. В 3
чашки с каждой средой (испытуемой и стандартной) вносят по 0,1 мл рабочей
взвеси монокультуры, содержащей около 103 КОЕ/мл. Параллельно в 3 чашки
с каждой средой вносят по 0,1 мл посевной дозы, содержащей взвеси тест-
микроорганизма и штамма-ассоцианта. На всех засеянных чашках после оптимального
срока инкубации при соответствующей температуре отмечают рост
пая

Таблица 32.7
Тест-микроорганизмы и условия инкубации для определения ростовых и селективных свойств питательных сред
Питательные среды
1
• Соево-казеиновый агар
• Среда № 1 для выращивания
бактерий
• Сабуро агар с глюкозой и
антибиотиками
• Среда № 2 для выращивания
грибов
• Бульон Мосселя
• Мак-Конки бульон
• Среда № 3 для обогащения
энтеробактерий
• Мак-Конки агар
• Мосселя агар
• Среда № 4 для выделения
энтеробактерий
Назначение
2
Аэробные бактерии
Дрожжи, плесени
Обогащение
энтеробактерий
Энтеробактерий
Тест-микроорганизмы
3
Bacillus subtilis ATCC 6633 или
Bacillus cereus ATCC 10702;
Escherichia coli ATCC 25922;
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Candida albicahsNCTC 885-653 или
Candida albicans ATCC 10231;
Aspergillus niger ATCC 9642
Штаммы-ассоцианты :
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Bacillus cereus ATCC 10702
Escherichia coli ATCC 25922;
Salmonella abony IHE 103/39
Штаммы-ассоцианты:
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Bacillus cereus ATCC 10702
Escherichia coli ATCC 25922;
Salmonella abony IHE 103/39
Штаммы-ассоцианты:
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Bacillus cereus ATCC 10702
Время и температура
инкубации
4
72 ч
(32,5 ± 2,5) °С
5 сут
(22,5 ± 2,5) °С
24-48 ч
(32,5 ± 2,5) °С
24-48 ч
(32,5 ± 2,5) °С

Продолжение таблицы 32.7
1 1 • Дезоксихолат-цитратныи агар
• Ксилоза-лизин-дезоксихолат агар
• Агар с бриллиантовым зеленым
• Висмут-сульфитный агар
• Среда № 5 для идентификации сальмонелл
• Бульон с глюкозой
• Среда № 6 для идентификации эн-
теробактерий
• Нитратный бульон
• Среда № 7 для идентификации энте-
робактерий
• Соево-казеиновый бульон
• Среда № 8 для выращивания бактерий
• Лактозный бульон
• Среда № 11 для предварительной инкубации
энтеробактерий
• Агар для выявления пиоцианина
P.aeruginosa
• Среда № 9 для идентификации
P.aeruginosa
• Цетримидный агар
• ЦПХ-агар
для выделения P.aeruginosa
2
Сальмонеллы
Энтеробактерий
Энтеробактерий
Аэробные
бактерии
Энтеробактерий
Синегнойная
палочка
Синегнойная
палочка
3
Salmonella abony IHE 103/39
Штаммы-ассоцианты:
Escherichia coli ATCC 25922
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Bacillus cereus ATCC 10702
Escherichia coli ATCC 25922;
Salmonella abony IHE 103/39;
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
(P. aeruginosa ГИСК 453)
Escherichia coli ATCC 25922;
Salmonella abony IHE 103/39;
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
(P. aeruginosa ГИСК 453)
Bacillus cereus ATCC 10702 или
Bacillus subtilis ATCC 6633;
Escherichia coli ATCC 25922:
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P;
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
(P. aeruginosa ГИСК 453)
Escherichia coli ATCC 25922;
Salmonella abony IHE 103/39
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
(P. aeruginosa ГИСК 453);
Escherichia coli ATCC 25922
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
(P. aeruginosa ГИСК 453)
Штаммы-ассоцианты:
Escherichia coli ATCC 25922;
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
4
24-48 ч
(32,5 ± 2,5) °C
24 ч
(32,5 ± 2,5) °C
24 ч
(32,5 ± 2,5) °C
24 ч
(32,5 ± 2,5) °C
24 ч
(32,5 ± 2,5) °C
24-48 ч
(32,5 ± 2,5) °C
24-48 ч
(32,5 ± 2,5) °C

/ *
/ • Фогель-Джонсона агар
/• Среда № 10 для выделения S. aureus
• Берда-Паркера агар
• Селенитовый бульон
• Тетратионатный бульон
• Среда № 12 для выделения
сальмонелл
• Трехсахарный агар с солями железа
• Среда № 13 для идентификации
сальмонелл
• Цитратный агар Симмонса
• Среда №14 для идентификации
E.coli
2
' Золотистый
стафилококк
Сальмонеллы
Сальмонеллы
Кишечная палочка
3 1
Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р;
Staphylococcus epidermidis АТСС 14990
Штаммы-ассоцианты:
Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027
(P. aeruginosa ГИСК 453);

Escherichia coli АТСС 25922
Escherichia coli АТСС 25922;
Salmonella abony IHE 103/39
Escherichia coli АТСС 25922;
Salmonella abony IHE 103/39
Escherichia coli ATCC 25922;
Salmonella abony IHE 103/39
Окончание таблицы 32.7
4 1
48 ч
(32,5 ± 2,5) °C
18-24ч
(32,5 ± 2,5) °C
24 ч
(32,5 ± 2,5) °C
24 ч
(32,5 ± 2,5) °C
*ATCC - Американская коллекция типовых культур (American Type Culture Collection), Соединенные Штаты Америки.
ГИСК - Всероссийский музей патогенных бактерий ГИСК им. Л.А. Тарасевича, Россия.
ШЕ - Институт гигиены и эпидемиологии, Прага, Чехия.
ССМ - Чешская коллекция микроорганизмов.

Требование к ростовым свойствам питательных сред
Испытуемая агаризованная среда считается годной к употреблению, если
коэффициент прорастания не менее 0,7 по сравнению со стандартной питательной
средой. Испытуемая жидкая (полужидкая) среда считается годной к употреблению,
если после инкубации рабочей взвеси и пересеве подходящего
разведения на агаризованную среду коэффициент прорастания не менее 0,7 по
сравнению со стандартной жидкой питательной средой.
Требование к селективным свойствам питательных сред
Испытуемая селективная питательная среда при посеве тест-микроорганизма
и штамма-ассоцианта должна обеспечивать доминирующий рост тест-микроорганизма
при частичном или полном угнетении роста штамма-ассоцианта.
Стерильность
Не менее 10 % емкостей (флаконов, пробирок) от каждой партии приготовленной
питательной среды контролируют на стерильность, выдерживая их при
соответствующей температуре в течение 48-72 ч. При обнаружении микробного
роста хотя бы в одной из емкостей, испытанию на стерильность подлежит вся
приготовленная партия среды.
Хранение питательных сред
Сухие питательные среды необходимо хранить в сухом, защищенном от света
месте при температуре 2-30 °С герметично закрытыми. После вскрытия упаковки
на флаконе необходимо написать дату и далее хранить при комнатной
температуре до окончания срока годности.
Приготовленные из сухих смесей и разлитые во флаконы питательные среды
хранятся 1 месяц при комнатной температуре или 3 месяца при
(5±1)°С.
Срок годности сред, разлитых в чашки, составляет 7 дней при температуре
(5 ± 1) °С.
Исключение составляют чашки со средой № 4, срок годности которых не
более 3 сут. без доступа света.
33. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ
АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАР
(ОФС 42-0068-07)
Определение антимикробной активности антибиотиков основано на их способности
угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят методом диффузии
в агар на плотной питательной среде путем сравнения размеров зон
угнетения роста тест-микробов, образующихся при испытании растворов определенных
концентраций Государственного стандартного образца * и испытуемого
препарата.
Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах действия
- ЕД или «мкг». Для большинства антибиотиков 1 ЕД или «мкг»
соответствуют 1 мкг активного вещества (кислоты или основания); для
* Далее «стандартный образец» следует читать «Государственный стандартный образец».

антибиотиков, имеющих иное количественное выражение единицы, соответствующие
указания даются в частных фармакопейных статьях.
При определении антимикробной активности антибиотиков используют
стандартные образцы, активность которых, как правило, устанавливают в соответствии
с Международными биологическими стандартами. При отсутствии
последних для указанных целей могут быть использованы международные
химические стандарты, антимикробную активность которых рассчитывают
на основании показателей качества, установленных физико-химическими методами.
Антимикробную активность стандартных образцов антибиотиков, не
имеющих аналогов в международной коллекции стандартов, рассчитывают
также на основании показателей качества, установленных физико-химическими
методами.
Стандартные образцы антибиотиков хранятся и используются в соответствии
с рекомендациями, указанными на этикетке стандартного образца.
Метод определения. Тест-микробы, растворители, буферные растворы, питательные
среды и прочие условия проведения испытания указаны в табл. 33.1.
В чашки Петри (стеклянные или пластмассовые), установленные на столиках
со строго горизонтальной поверхностью, разливают расплавленные питательные
среды определенного состава в один или два слоя. Для нижнего слоя используют
незасеянные среды, для верхнего или одного слоя - агаровую среду,
предварительно засеянную соответствующим тест-микробом. Если культура
представляет собой суспензию вегетативных клеток, то температура расплавленной
среды, в которую вносят тест-микроб, должна быть (49 ± 1) °С, при использовании
суспензии спор - 65-70 °С. К среде следует добавить такое
количество суспензии вегетативных клеток или спор, которое обеспечивает оптимальный
рост тест-микроба и четкость зон угнетения его роста.
Шесть стерильных цилиндров единого размера и массы, высотой
(10,0 ± 0,1) мм и внутренним диаметром (6,0 ±0,1) мм, из нержавеющей стали
или алюминия расставляют на поверхности засеянной среды на равном расстоянии
друг от друга и от края чашки. Вместо цилиндров могут быть использованы
лунки диаметром от 6 до 8 мм, сделанные в толще агара с помощью
стерильного сверла, либо другого соответствующего приспособления.
В цилиндры или лунки каждой чашки вносят равные объемы рабочих растворов
стандартного и испытуемого образцов. Основные растворы стандартных
и испытуемых образцов готовят в стерильных растворителях с
концентрацией 1 мг/мл. Затем из основных растворов в зависимости от применяемого
варианта метода диффузии в агар (трехдозного или с построением стандартной
кривой) готовят рабочие растворы трех или одной концентраций
испытуемого образца и растворы трех или пяти концентраций стандартного
образца.
Рабочие растворы испытуемых образцов готовят из основных растворов
таким образом, чтобы их концентрации не имели существенных отличий от концентраций
раствора стандартного образца.
Для уменьшения влияния колебаний во времени между закапыванием растворов,
используемых в опыте, рекомендуется после их внесения выдерживать

Характеристика культуральных свойств тест-микроба
Таблица 33.1
Название
тест-микроба
Staphylococcus
aureus 209 Р
Candida utilis
ЛИА-01
Bacillus subtilis,
var. JI2
Bacillus subtilis
ATCC 6633
При росте на плотной питательной среде
условия
выращивания
Среда № 1,
Т° (36±1)°С,
18-20 4, затем при
комнатной температуре
24 4
Среда № 3,
Т° (30 ± 1) °С,
48 4
Среда № 1,
Т°(36±1)°С,
18-20 4
Среда № 1,
Т°(36±1)°С,
18-20 4
описание
культуры
Гладкие с ровными
краями колонии, с равномерной
золотистой
пигментацией
Круглые, кремового
цвета с матовой поверхностью
колонии с
ровными краями
Колонии желтоватого
цвета, круглой формы,
влажно блестящие с
шагреневой поверхностью,
слегка зазубренными
краями и
приподнятым центром
Мелкие сероватые колонии
с зуб4атым
краем
При росте на жидкой питательной среде
условия
выращивания
Мясо-пептонный
бульон,
рН 7,2-7,4,
18-20 4
МПБ,
рН 7,2-7,4
с 1 %
глюкозой,
18-20 4
МПБ,
рН 7,2-7,4,
18-20 4
МПБ,
рН 6,8-7,0,
18-20 4
описание
культуры
Равномерное помутнение
бульона без пленки
и слизистого осадка на
дне
Рост в виде равномерной
мути и осадка на
дне
Рост в виде пленки с
осадком на дне
Рост в виде пленки с
осадком на дне
При микроскопическом
изучении мазка
агаровой культуры,
окрашенной
по Граму
Однородные по величине 1
и расположению в виде
гроздьев кокки с хорошо
выраженной грамположи-
тельной окраской
Овальные, иногда с
отростками клетки; расположены
отдельно, цепоч-
ками или группами
Палочки с закругленными
краями, располагающиеся
отдельно и цепочками с
хорошо выраженной грам-
положительной окраской
Тонкие палочки, располагающиеся
отдельно или
цепочками, с хорошо выраженной
грамположи-
тельной окраской

Продолжение таблицы 33.1
Bacillus cereus,
var. mycoides 537
Bacillus cereus,
var. mycoides
HB
Bacillus pumilus
NCTC 8241
Bordetella
bronchiseptica
ATCC 4617
Pseudomonas
aeruginosa
NCTC 2134
Среда № 2,
T°(36±1)°C,
18-20ч
Среда № 1,
T° (36 ± 1) °C,
18-20 4
Среда № 1,
T°(36±1)°C,
18-20 4
МПА,
pH 7,2-7,4
T°(36 ± 1) °C,
18-20 4
МПА,
pH 7,2-7,4,
T°(36 ± 1) °C,
18-20 4
Шероховатые колонии
с краем, сформированным
из переплетающихся
волокон
Гладкие колонии с
ровными краями
и сферической
поверхностью
Мелкие серовато-голубого
цвета колонии с
зазубренными краями
и приподнятым
центром
Мелкие, мутные,
белые, слегка выпуклые,
фарфоровидные
колонии
Широкие, расплывчатые,
прозра4ные
с неровным краем
колонии
МПБ,
рН 7,8-8,0,
18-20 4
МПБ,
рН 6,8-7,0,
18-20 4
МПБ,
рН 7,2-7,4,
18-20ч
МПБ,
рН 7,2-7,4
МПБ,
рН 7,2-7,4
Морщинистая пленка;
вся среда прозра4ная,
без
осадков
Равномерное помутнение
бульона
без образования
пленки и осадка
Равномерное помутнение
бульона без образования
пленки и осадка
Заметное помутнение,
серая пленка, тягучий
осадок
Заметное помутнение,
толстая пленка, среда
может приобретать желтовато-
зеленую окраску
Палочки с закругленными
концами, располагающиеся
отдельно или
цепо4ками, с хорошо выраженной
грамположи-
тельной окраской
Тонкие с закругленными
концами палочки, располагающиеся
отдельно или
короткими цепочками, с
хорошо выраженной грам-
положительной окраской
Тонкие, мелкие палочки с
закругленными концами,
располагающиеся отдельно
или короткими
цепо4ками, с хорошо выраженной
грамположи-
тельной окраской
Одиночные, короткие,
тонкие палочки с хорошо
выраженной грамотрица-
тельной окраской
Одиночные пал04ки либо
короткие цепочки
с хорошо выраженной
грамотрицательной
окраской

чашки при комнатной температуре в течение 1-2 ч. Затем чашки инкубируют
при температуре (36 ± 1)°С в течение 16-18 ч.
Диаметры зон угнетения роста тест-микроба при помощи соответствующих
приборов измеряют с точностью до 0,1 мм.
Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием
трехдозного варианта метода диффузии в агар. Для проведения испытания готовят
три раствора стандартного образца (С1? С2, С3) и три раствора испытуемого
образца (И15 И2, И3). Концентрации растворов, содержащих малую, среднюю и
большую дозы, должны находиться между собой в кратном соотношении (1:2:4).
При необходимости это соотношение может быть изменено. Концентрация раствора
С2 должна быть близка к контрольной концентрации раствора стандартного
образца, указанной в табл. 33.2.
Все растворы стандартного и испытуемого образцов вносят в цилиндры
или лунки одной чашки Петри таким образом, чтобы растворы с большими
концентрациями не соприкасались между собой. Предлагаемый вариант закапывания
- С1И3С2И1СзИ2.
Число чашек, используемых в каждом опыте, должно быть достаточным для
обеспечения статистической достоверности результатов, но не менее 6 чашек.
Последовательность внесения растворов стандартного и испытуемого образцов
в цилиндры или лунки каждой чашки должна быть следующей: первым вносят
раствор с малой концентрацией стандартного образца (Cj) и соответствующий
раствор испытуемого образца (И]). Затем растворы со средней концентрацией
(С2 и И2), последними вносят растворы с большими концентрациями (С3 и И3).
Расчет активности и дисперсионный анализ при использовании трехдозного
варианта метода диффузии в агар осуществляется в соответствии со статьей «Статистическая
обработка результатов химического эксперимента и биологических
испытаний». Растворы определенных концентраций стандартного (С) и испытуемого
(И) образцов обозначены Ds и Du соответственно.
Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием
стандартной кривой. Постановка о п ы т а. В день постановки анализа из основного
раствора готовят пять рабочих растворов стандартного образца Cl5 C2,
С3, С4, С5 с концентрациями, увеличивающимися в геометрической прогрессии
(Z), обычно в соотношении 1:1,25. Средняя концентрация (С3) является контрольной
и должна быть близка к концентрации, указанной в табл. 33.2: концентрация
Cj - наименьшая, С5 - наибольшая. Для исследования растворов каждой
концентрации (кроме контрольной) используют по три чашки. Раствор контрольной
концентрации С3 закапывают в три цилиндра (или лунки) каждой из взятых
в опыт чашек, в три другие цилиндра (лунки) закапывают раствор одной из концентраций
стандартного образца, чередуя его с раствором контрольной концентрации.
Таким образом, для построения стандартной кривой используют 12 чашек.
ш

Тест-микроорганизмы и условия для биологического определения активности антибиотиков ТаблиЧ * 33.2
(
Антибиотик1
Ампициллин
Амфотерицин В
Бензилпенициллин
Гелиомицин
Тест-микроорганизмы2
Staphylococcus
aureus
209 Р
Candida utilis
ЛИА-01
Staphylococcus
aureus
209 P
Вас. subtilis
ATCC 6633
Среда для
определения активности3,4
нижний
слой
№11
№11
№17
верхний
слой
№7
+ 0 , 1%
глюкозы
№16
+ 0,1 %
глюкозы
№7
+ 0 , 1%
глюкозы
№17
Количество
среды на каждую
чашку, мл5
нижний
слой
10
10
верхний
слой
5
15
5
15
Посевная
доза6
40 млн микробных
клеток на
1 мл среды
3 мл рабочей
взвеси
на 100 мл
среды
40 млн микробных
клеток на
1 мл среды
100 млн
спор на
1 мл среды
Стандартный
образец
Ампициллина
тригидрат
Амфотерицин
В
Бензилпе-
нициллина
натриевая
соль
Гелиомицин
Растворитель для приготовления
растворов
стандартного
и испытуемого образцов
основной
раствор
Буфер
№1
Диметил-
сульфоксид
Буфер
№1
0,1 н.
раствор
натрия ги-
дроксида13
рабочий
раствор
Буфер № 1
Буфер
№1"
Буфер
№1
0,1 н.
раствор
натрия
гидроксида
Срок годности
основного
раствора
стандартного
образца при
температуре
от 4 до
10 °С, сут.
3
1
3
10
Контрольная
концентрация
раствора
стандартного
образца7,8
в
мкг/мл акт.
вещества
или ЕД/мл
1 мкг/мл
0,5 мкг/мл
1 ЕД/мл
4 мкг/мл

Продолжение таблицы 33.2
Гентамицин
Грамицидин С
Дактиномицин
Дигидрострептоми-
цин
Диклоксациллин
Доксициклин
Канамицин В10
Вас. pumilus
NCTC 8241
Вас. cereus
var. mycoides
537
Вас. cereus,
var. mycoides
HB
Вас. cereus,
var. mycoides
537
Staphylcoccus
aureus
209 P
Вас. sutilis,
Var. Л2
Вас. subtilis
ATCC 6633
№11
№12
№9
№ 13
№ 14
№9
№7
+ 0,1%
глюкозы
№6
+1%
глюкозы
№8
20
10
10
5
10
10
10
5
10
5
50 млн
спор на
1 мл среды
8 млн спор
на 1 мл
среды
20 млн спор
на 1 мл
среды
20 млн спор
на 1 мл
среды
40 млн микробных
клеток
на 1 мл
среды
30 млн спор
на 1 мл
среды
100 млн
спор на 1 мл
среды
Гентами-
цина
сульфат
Грамицидин
С
Дактиномицин
Дигидро-
стрепто-
мицина
сульфат
Диклокса-
циллина
натриевая
соль
Доксици-
клина гидрохлорид
Канами-
цина
моносульфат
Буфер № 4
Этиловый
спирт
96%
Дистиллированная
вода9
Буфер № 3
Буфер № 1
0,01 н.
раствор
хлористоводородной
кислоты
Дистиллированная
вода
Буфер № 4 14
Дистиллированная
вода
Буфер № 4
Буфер № 4
Буфер № 1
Буфер № 2
Буфер № 4
30
15
2 мкг/мл
100 мкг/мл
4 мкг/мл
30 1 2 мкг/мл
6
7
30
8 мкг/мл
0,5 мкг/мл
1 мкг/мл

Продолжение таблицы 33.2 1 1 Канамицин
Карбенициллин
Карминомицин
Леворин
Линкомицин
Метациклин
Метициллин
Вас. pumilus
NCTC 8241
Pseudomonas
aeruginosa
NCTC 2134
Вас. cereus,
var. mycoides
537
Candida utilis
ЛИА-01
Вас. subtilis
ATCC 6633
Вас. subtilis
var. Л2
Staphylo-coccus
N 11 aureus
209 P
№8 №8
№7
№5
№16
+1%
глюкозы
№8
№6
+1%
глюкозы
№7
+0,1%
глюкозы
15
10
5
15
15
15
10
10
5
40 млн спор
на 1 мл
среды
10 мл
бульонной
культуры на
100 мл
среды
100 млн
спор на 1 мл
среды
2-2,5 мл
рабочей
взвеси на
100 мл
среды
100 млн
спор на
1 мл среды
30 млн спор
на 1 мл
среды
40 млн микробных
клеток на

1 мл среды
Канами-
цина
моносульфат
Карбени-
циллина
динатрие-
вая соль
Кармино-
мицина
гидрохлорид
Леворин
Линкоми-
цина
гидрохлорид
Метаци-
клина
гидрохлорид
Метицил-
лина
натриевая
соль
Дистиллированная
вода
Буфер № 1
Дистиллированная
вода
Диметил-
сульфоксид
Дистиллированная
вода
0,01 н.
раствор
хлористоводородной
кислоты
Буфер № 1
Буфер № 4
Буфер № 2
Буфер № 4
Диметилсуль-
фоксид до концентрации
100
мкг/мл, а затем
в буфере
№1"
Буфер № 4
Буфер № 2
Буфер № 1
30
3
10
3(10)
30
7
3
10 мкг/мл
10 мкг/мл
15 мкг/мл
0,5 мкг/мл
100 мкг/мл
0,5 мкг/мл
20 мкг/мл

Продолжение таблицы 33.2
Микогептин
Мономицин
Неомицин
Нистатин
Оксациллин
Окситетрациклин
Олеандомицин
Candida utilis
ЛИА-01
Вас. cereus,
var. mycoides
537
Вас. cereus,
var. mycoides
537
Candida utilis
ЛИА-01
Staphylo-coccus
Aureus
209 P
Вас. subtilis,
var. Л2
Вас. cereus,
var. mycoides
HB
№11
№16
+1%
глюкозы
№9
№9
№16
+1%
глюкозы
№7
+ 0 , 1%
глюкозы
№6
+1%
глюкозы
№9
20
10
15
10
5
15
5
10
10
2,5-3 мл рабочей
взвеси на
100 мл
20 млн спор
на 1 мл
среды
20 млн
спор на
1 мл среды
3-3,5 мл рабочей
взвеси на
100 мл
среды
40 млн
микробных
клеток на
1 мл среды
30 млн спор
на 1 мл
среды
20 млн
спор на
1 мл среды
Микогептин
Мономицин
Неоми-
цина
сульфат
Нистатин
Оксацил-
лина
натриевая
соль
Окситет-
рациклина
гидрохлорид
Олеандо-
мицина
фосфат
Диметил-
сульфоксид
Дистиллированная
вода
Буфер
№4
Диметил-
формамид
Буфер
№ 1
0,01 н. раствор
хлористоводородной
кислоты
Буфер
№3
Диметилсуль-
фоксид до
концентрации
50 мкг/мл, а
затем буфер
№4"
3 % раствор
хлорида
калия
Буфер № 4
Буфер № 3
Буфер № 1
Буфер № 2
Буфер № 4
З12
30
30
3
3
7
7
1 мкг/мл
2 мкг/мл
4 мкг/мл
20ЕД/мл
4 мкг/мл
1 мкг/мл
4 мкг/мл

Продолжение таблицы 33.2 1 Оливомицин
Полимиксин В
Полимиксин М
Рифампицин
Рубомицин
Вас. subtilis
АТСС 6633
Bordetella
Bronchiseptica
АТСС 4617
Bordetella
Bronchiseptica
АТСС 4617
Вас. subtilis
АТСС 6633
Вас. cereus,
var. mycoides
537
Сизомицин S ^ r ^f NCTC 8241
№11
№12
№18
№15
№15
№ 10
+0,1 %
глюкозы
№5
№8
10
20
5
10
10
10
15
5
10 млн
спор
на 1 мл среды
40-60 млн
микробных
клеток на
1 мл среды
40-60 млн
микробных
клеток на
1 мл среды
40 млн
спор на
1 мл среды
10 млн спор
на
1 мл среды
50 млн спор
на 1 мл среды
Оливоми-
цин-
кислота
Полимиксин
В
сульфат
Полимиксин
М
сульфат
Рифампицин
Рубоми-
цина
гидрохлорид
Сизоми-
цина
сульфат
Стандартный образец
в этиловом
спирте из расчета
5 мг в 1 мл,
затем буфер № 1,
испытуемый образец
в дистиллированной
воде
Буфер
№3
Буфер
№3
1 мл диметил-
формамида на
10 мг навески,
затем дистиллированная
вода
Дистиллированная
вода
Буфер
№4
Буфер
№ 1
Буфер № 5
Буфер № 5
Буфер № 3
Буфер № 4
Буфер № 4
14
14
14
4
10
14
I
2 мкг/мл
ЮОЕД/мл
ЮОЕД/мл
5 мкг/мл
20 мкг/мл
2 мкг/мл

Продолжение таблицы 33.2
Стрептомицин
Тетрациклин
Феноксиметилпе-
нициллин
Флоримицин
Фузидин
Цефалексин
Вас. cereus,
var. mycoides
537
Вас. subtilis
var Л2
Staphylococcus
aureus
209 P
Вас. subtilis
ATCC 6633
Вас. cereus,
var. mycoides
HB
Вас. subtilis
ATCC 6633
№11
№11
№9
№6
+ 1%
глюкозы
№7
+ 0,1 %
глюкозы
№8
№10
+ 1%
глюкозы
№7
+ 0 , 1%
глюкозы
10
10
10
10
5
10
10
5
20 млн
спор на
1 мл среды
30 млн спор
на 1 мл
среды
40 млн микробных
клеток на
1 мл среды
20 млн спор
на 1 мл
среды
50 млн
спор на
1 мл среды
100 млн
спор на
1 мл среды
Стрептомицина
сульфат
Тетрациклина
гидрохлорид
Фенокси-
метилпе-
нициллин
Флорими-
цина
сульфат
Фузидие-
вая
кислота
Цефалексин
Буфер № 3
0,01 н. раствор
хлористоводородной
кислоты
Буфер № 1
Дистиллированная
вода
Стандартный
образец - в
этиловом
спирте из
расчета
10 мг/мл,
затем буфер
№4;
испытуемый
образец - в
буфере
№4
Буфер № 1
Буфер № 4
Буфер № 2
Буфер № 1
Буфер № 4
Буфер № 3
Буфер № 1
30
7
7
7
7
3
2 мкг/мл
2 мкг/мл
1 ЕД/мл
10 мкг/мл
5 мкг/мл
5 мкг/мл

После инкубации в термостате измеряют диаметры зон угнетения роста тест-
микробов. Далее вычисляют среднюю величину диаметров зон для раствора контрольной
концентрации стандартного образца в каждой группе из трех чашек,
затем среднюю величину диаметров зон для раствора контрольной концентрации
стандартного образца из всех 12 чашек (общую среднюю из 36 зон). По разности
между средней величиной зоны контрольной концентрации,
установленной из 12 чашек, и средней величиной зоны контрольной концентрации,
установленной из 3 чашек с каждой отдельной концентрацией, находят
поправку к величине зоны данной концентрации. Найденную поправку прибавляют
к средней величине диаметра зоны данной концентрации, если она положительная,
и вычитают, если она отрицательная.
Ир и мер. Общая средняя величина зоны для раствора контрольной концентрации
стандартного образца 1 мкг/мл, рассчитанная из 36 зон, равна 19,2 мм. Средняя величина
зоны для раствора той же концентрации, установленная из 3 чашек, на которых
испытывался раствор с концентрацией 0,83 мкг/мл стандартного образца, равна 19 мм.
Следовательно, величина поправки будет +0,2 мм. Средняя величина зоны для концентрации
0,83 мкг/мл равна 17,9 мм; прибавляя поправку +0,2 мм, получаем величину
18,1 мм. Таким образом, исправляют значение величины зон для растворов всех
концентраций стандартного образца и получают величины dj, d2, d4, d$
Для исследования активности испытуемого образца проводят несколько определений,
используя для каждого по 3 чашки, в которые закапывают раствор контрольной
концентрации стандартного образца и раствор испытуемого образца с
концентрацией, близкой к контрольной. Внесение растворов контрольной концентрации
стандартного и испытуемого образцов в каждой группе из трех чашек
должно проводиться одномоментно. После инкубации измеряют зоны угнетения
роста тест-микроба, образуемые растворами контрольной концентрации
стандартного и испытуемого образцов. Находят среднее значение величин зон из
3 чашек.
Расчет антимикробной активности испытуемых образцов по стандартной кривой
может быть проведен двумя способами: графическим методом или путем
непосредственного расчета с использованием соответствующих формул.
Расчет активности испытуемого образца графическим методом. По исправленным
значениям диаметров зон dj, d2, d4, d5 для всех концентраций растворов
стандартного образца Сь С2, С4, С5 и общей средней величине
диаметров зон для контрольной концентрации d3 вычисляют с использованием
метода наименьших квадратов размеры зон Dmjn и Dmax для низкой и высокой
концентраций растворов стандартного образца:
Dmin = (3d! + 2d2 + d3 - d5 ) : 5;
Dmax = (3d5 + 2d4 + d 3 - d 1 ) : 5 ,
по которым затем строят стандартную кривую на полулогарифмической сетке
расчета биологической активности антибиотиков, откладывая на оси абсцисс
величины зон, на оси ординат - соответствующие им концентрации растворов
стандартного образца. Разность между найденными средними величинами зон
угнетения роста тест-микроба раствором испытуемого образца и раствором контрольной
концентрации стандартного образца из тех же чашек прибавляют к

значению величины зоны, соответствующей контрольной концентрации на кривой
(D3). Затем по кривой находят концентрацию, соответствующую найденной
величине зоны. Умножением полученной концентрации на степень разведения
получают активность в 1 мл основного раствора или в 1 мг испытуемого образца.
Пр им ер. Средний размер зон для раствора испытуемого образца при разведении
1:300 составляет 18,7 мм, средний размер зон для раствора стандартного образца, содержащего
2 мкг/мл (контрольная концентрация) из тех же чашек- 18,5 мм. Следовательно,
разность составляет +0,2 мм. Эту разность прибавляют к величине зоны для
раствора в концентрации 2 мкг/мл по стандартной кривой, которая равна D3 = 18,6 мм,
и получают величину 18,8 мм. Находят на кривой концентрацию, соответствующую
данному размеру зоны - 2,36 мкг/мл. Эту величину умножают на степень разведения
и получают содержание активного вещества в 1 мл основного раствора, т.е.
2,36 мкг/мл х 300 = 708 мкг/мг.
Так как концентрация основного раствора составляла 1 мг/мл, то активность испытуемого
образца равна 708 мкг/мл: 1 мг/мл = 708 мкг/мл.
Определение активности испытуемого образца расчетным путем. Кривая,
отражающая зависимость между активностью антибиотика и размером зоны
угнетения роста тест-микроба, после перехода к координатам «логарифм концентрации
(lgC) - диаметр зоны (D)» преобразуется в прямую, уравнение которой:
D = а + Ъ х lgC,
где: а - свободный член; Ъ - угловой коэффициент.
По исправленным значениям величин диаметров зон d\, d2, dA, d5 для растворов
стандартного образца с концентрациями ChC2, Сф С5 и общей средней
величине диаметра зоны а?3, соответствующей контрольной С3, рассчитывают
величины а и Ъ с применением метода наименьших квадратов. Так как концентрации
Cj, C2, С3, С4, С5 составляют геометрическую прогрессию, формулы для
вычисления коэффициентов а и Ь могут быть записаны в виде:
Ь = (- 2dx -d2 + d4 + 2d5)/10 x lgZ;
a = d - b lgC3,
где Z - знаменатель прогрессии разведения;
d~ = (dx +d2 + d2 + d4 + d5)/5.
Пример. Пусть знаменатель прогрессии разведения Z = 1,25; С3 = 5,0; а
средние значения диаметров зон (в мм) равны: dx = 17,64; d2= 18,15; d1> = 19,03;
d4= 19,58; d5 = 20,09.
Ea

Тогда:
b = (-2 • 17,64 - 18,15 + 19,58 + 2 • 20,09) : (10 * lg 1,25) = 6,33 : 0,969 = 6,532;
= (18,61 + 18,3 + 18,12): 3 = 18,34;
d» = (18,44 + 18,1 + 18,3): 3 = 18,28;
lg Cu = 0,6990 + (18,28 - 18,34): 6,532 = 0,6990 - 0,0092 = 0,6898;
Си = antilg(0,6898) = 4,896;
Аи = 4,896160 = 783.
в

Поскольку микробиологическое исследование активности антибиотиков подвержено
вариабельности, следует проводить не менее 6 повторных испытаний
в разные дни (не менее 2 дней), так как средняя активность отдельных определений,
проведенных в разные дни, - более надежная величина, чем средняя активность,
полученная в результате такого же количества определений,
проведенных одновременно.
Расчет ошибки определения логарифма концентрации испытуемого образца
в пределах одного опыта приведен в приложении 1 к настоящей статье. Объединение
результатов отдельных опытов проводят в соответствии с формулами,
приведенными в приложении 2 к настоящей статье.
Во всех сомнительных случаях и при определении активности стандартных
образцов должен использоваться только трехдозный вариант метода диффузии
в агар.
Для определения содержания активного вещества во флаконе, активность,
найденную в 1 мг, умножают на массу содержимого флакона, выраженную в
миллиграммах. При исследовании раствора, приготовленного из всего содержимого
флакона или ампулы, активность, найденную в 1 мл этого раствора, умножают
на его объем. В случае необходимости определения содержания
активного вещества в 1 мг испытуемого образца, следует величину, характеризующую
содержание активного вещества во флаконе, разделить на массу содержимого
флакона, выраженную в миллиграммах.
При определении содержания активного вещества в таблетках или капсулах
их количество, а также подготовка для анализа должны соответствовать требованиям
общей фармакопейной статьи на данные лекарственные формы.
В дальнейшем основной раствор испытуемого образца готовят из расчета 1 мг
в 1 мл. После перемешивания раствору дают отстояться или центрифугируют.
Рабочий раствор испытуемого образца готовят разведением надое ад очной жидкости
основного раствора. Для определения содержания активного вещества в
1 таблетке или капсуле активность 1 мг порошка растертых таблеток или содержимого
капсул умножают на среднюю массу таблетки или содержимого капсулы,
выраженную в миллиграммах.
При исследовании таблеток, покрытых оболочкой, активность определяют в
нескольких растворенных таблетках, количество которых и растворитель
должны быть указаны в частной фармакопейной статье. Активность, найденную
в 1 мл основного раствора, умножают на его объем и делят на количество
растворенных в этом объеме таблеток.
Выращивание и хранение культур тест-микробов*. Все культуры тест-микробов
сохраняют в запаянных пробирках на соответствующих плотных питательных
средах в течение 15-30 сут при температуре от 4 до 10 °С, после чего
пересевают на свежую питательную среду. Тест-микробы можно сохранять и в
лиофилизированном состоянии.
* Штаммы тест-микробов, за исключением Candida utilis ЛИА-01, применяемые для определения антимикробной активности
антибиотиков, хранятся в музее патогенных и условно патогенных культур при Государственном научно-исследовательском
институте стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича. Candida utilis ЛИА-01 хранится
во Всесоюзном научно-исследовательском технологическом институте антибиотиков и ферментов медицинского назначения
(ВНИТИАФ).
14. Зак. 2768
Щ}

Для характеристики культурных свойств микроорганизмов (см. табл. 33.1)
производится их высев в пробирки с мясо-пептонным бульоном (МПБ), затем
через 18-20 ч инкубации при температуре (36 ± 1) °С культуры высевают на
чашки Петри с плотной средой для выделения типичных колоний, которые затем
пересевают на соответствующие питательные среды для получения в дальнейшем
взвесей вегетативных клеток или спор. Взвесь хранят в запаянных стеклянных
пробирках при температуре от 4 до 10 °С в течение определенного
срока.
В полученной взвеси определяют концентрацию клеток (спор) по оптическому
стандарту мутности** или нефелометрически (основная взвесь). Из этой
взвеси по мере надобности готовят рабочую взвесь в соответствии с посевной
дозой, предусмотренной для каждого тест-микроба.
Культуру тест-микроба Staphylococcus aureus 209P высевают на чашки Петри
со средой № 1 и после выращивания в течение 18-20 ч при (36 ± 1) °С, оставляют
при комнатной температуре на 24 ч для наблюдения за образованием пигмента.
Отбирают типичные колонии и пересевают их в пробирки со скошенным
агаром того же состава.
Для определения активности используют взвесь 18-20-часовой культуры стафилококка,
выращенной в пробирке на скошенном агаре. Возможно также применение
в течение длительного времени взвеси культуры, полученной
следующим образом: культуру выращивают в течение 18-20 ч на скошенном
агаре в пробирке, смывают ее 5-10 мл стерильного раствора натрия хлорида изотонического
0,9 %. Полученной взвесью засевают матрац с 300 мл среды № 1 (со
скошенной поверхностью), выращивают в течение 2 сут [сутки при (36 ± 1) °С
и сутки при комнатной температуре], смывают примерно 50 мл стерильного раствора
натрия хлорида изотонического 0,9 %. Взвесь культуры можно хранить
в запаянных пробирках в течение 5-7 нед. при температуре от 4 до 10 °С.
Культуру тест-микроба Bordetella bronchiseptica (ATCC 4617, гладкая форма)
выращивают так же, как указано для Staphylococcus aureus 209P, за исключением
времени инкубации, которое составляет для Bordetella bronchiseptica 30-36 ч.
Посевным материалом служит культура, выращенная в пробирках со скошенным
агаром и хранящаяся при температуре от 4 до 10 °С не более 2 нед. Для
длительного применения взвеси клеток культуру смывают с питательной среды
5-10 мл стерильного раствора натрия хлорида изотонического 0,9 %, засевают
матрац со средой № 1 (со скошенной поверхностью) и далее поступают так же,
как при подготовке культуры Staphylococcus aureus 209P. Взвесь клеток Bordetella
bronchiseptica ATCC 4617 может храниться в течение 7 сут.
Культуру тест-микроба Pseudomonas aeruginosa NCTC 2134 выращивают на
чашках Петри со средой № 1 в течение 18-20 ч при температуре (36 ± 1) °С, отбирают
типичные колонии, пересевают их на мясо-пептонный бульон с рН от
7,2 до 7,4 и выращивают в вышеуказанных условиях. Полученная культура служит
посевным материалом для приготовления суточной культуры, используемой
при определении активности в каждом конкретном опыте, и может
храниться в течение 30 сут. при температуре от 4 до 10 °С.
** Оптические стандарты мутности и инструкция по их использованию выпускаются и рассылаются Государственным научно-
исследовательским институтом стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича.
ни

Культуру тест-микроба Candida utilis ЛИА-01 выращивают на чашках Петри
со средой № 3 в течение 48 ч при температуре (30 ± 1) °С, отбирают типичные
колонии, пересевают их в пробирки со скошенным агаром того же состава и выращивают
в указанных выше условиях. Полученная культура служит посевным
материалом для приготовления взвеси клеток, применяемой в течение длительного
времени. Для этого культуру с поверхности среды смывают 5-10 мл стерильного
раствора натрия хлорида изотонического 0,9 % и засевают матрац с
300 мл среды № 3 (со скошенной поверхностью). Через 2 сут культуру смывают
50 мл стерильного раствора натрия хлорида изотонического 0,9 %. По мере надобности
готовят рабочую взвесь, густота которой должна быть такой, чтобы
при разведении ее в 30 раз 0,9 % раствором натрия хлорида изотонического оптическая
плотность составляла 0,22-0,23. Для определения густоты взвеси используют
нефелометр с нейтральным светофильтром и кюветы с толщиной слоя
3 мм. Рабочая взвесь может храниться в течение 30 сут.
При использовании спорообразующих культур тест-микробов процесс выращивания
на чашках Петри, отбор типичных колоний, пересев на пробирки со
скошенным агаром и на матрацы осуществляют так же, как указано для Staphylococcus
aureus 209P.
Для выращивания культур тест-микробов Вас. subtilis, var. Л2 и Вас. pumilus
N СТС 8241 на чашках Петри и пробирках используют среду № 1, при выращивании
на матрацах - среду № 4; для выращивания культур тест-микробов Вас.
cereus, var.mycoides НВ и Вас. subtilis АТСС 6633 на чашках Петри и пробирках
используют среду № 1, при выращивании на матрацах - среду № 5; для выращивания
культуры тест-микроб Bac.cereus, var. mycoides 537 на чашках Петри и
на пробирках используют среду № 2, при выращивании на матрацах - среду № 4.
Для получения взвеси спор культуру, выращенную в пробирках, смывают
5-10 мл стерильного раствора натрия хлорида изотонического 0,9 %, засевают ею
несколько матрацев с 300 мл питательной среды (со скошенной поверхностью)
и выращивают в течение 5-7 сут. В процессе выращивания периодически производят
микроскопический контроль культуры, и если в мазках, окрашенных по
Граму, имеется в поле зрения 80-90 % спор, производят смыв стерильной дистиллированной
водой.
Полученную взвесь спор прогревают при температуре от 60 до 70 °С в течение
30 мин. Затем промывают стерильной дистиллированной водой при центрифугировании
до полной прозрачности надосадочной жидкости. Промытую
взвесь спор вновь прогревают в течение 30 мин при температуре от 60 до 70 °С.
Взвесь спор хранят в запаянных стеклянных пробирках при температуре от 4 до
10 °С и используют до тех пор, пока интенсивность роста и четкость зон при
определении антимикробной активности препаратов удовлетворяют предъявляемым
требованиям.
Для заражения питательных сред допускается использование лиофилизиро-
ванных тест-культур с точно известным содержанием количества микробных
клеток (спор) в ампуле, которые после суспендирования в соответствующем растворителе
(изотоническом растворе натрия хлорида 0,9 % или дистиллированной
воде) вносят в питательную среду без предварительного пересева.
тап

Таблица 33.3
Состав питательных сред для выращивания тест-культур, получения спор и определения активности антибиотиков
Ингредиенты
Номера сред
1 2 3 4 5 б 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
Содержание каждого ингредиента
Мясо-пептонный
бульон 1:2
Ферментативный ги-
дролизат биомассы микроорганизмов
без
оболочек
Агар-агар
Глюкоза
Натрия фосфат двуза-
мещенный
Калия фосфат
однозамещенный
Натрия хлорид
Калия хлорид
Мочевина
Аммония цитрат
двузамещенный
Аммония хлорид
Вода
дистиллированная
рН после
стерилизации
1000
мл
20 г
7,0-7,2
1000
мл
20 г
7,8-8,0
1000
мл
17г
Юг
5г
7,0-7,2
5г
250 г
*
6,0-6,2
5г
25 г
*
7,8-8,0
*
6,8-7,0
5г
10-12 г
Зг
*
6,8-7,0
5г
10-12 г
Зг
*
7,8-8,0
5г
15 г
Зг
*
7,8-8,0
5г
10-15 г
25 г
*
6,0-6,2
15-20 г
Зг
*
6,8-7,0
15-20 г
Зг
*
7,8-8,0
5г
20 г
20 г
*
7,0-7,2
5г
15 г
*
7,8-8,0
5г
15 г
25 г
*
7,0-7,2
18-20 г
5г
20 г
20 г
5г
*
5,8-6,0
18г
5г
15г
2г
2г
*
7,8-8,0
5г
15-20 г
5г
30 г
*
6,8-7,0
*1000 мл

Питательные среды и буферные растворы. В табл. 33.3 представлен состав
сред, используемых при определении активности антибиотиков.
Для приготовления сред № 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 16 применяют ферментативный
гидролизат биомассы микроорганизмов без оболочек. Методика
приготовления состоит в следующем: 5 г сухого ферментативного гидролизата
размешивают в 1 л дистиллированной воды, прибавляют агар-агар, расплавленный
в открытом котле или автоклаве текучим паром или под давлением 0,05 МПа
и температуре (111 ± 1)°Св течение 30 мин. В случае необходимости в среду
прибавляют соли в количестве, указанном в прописи сред; рН сред определяют
потенциометрически со стеклянными электродами или колориметрически. рН
корригируют хлористоводородной кислотой или раствором натрия гидроксида.
Готовые среды разливают в соответствующую посуду и стерилизуют в автоклаве
при 0,1 МПа и температуре (120 ± 1) °С в течение 15 мин.
Мясо-пептонный бульон (среда № 1) готовят на водопроводной воде обычным
способом, изложенным в руководствах по микробиологии.
Примечания
1. Количество агар-агара в средах указано для цилиндрочашечной модификации. В случае
применения лунок количество агар-агара увеличивают до 20-25 г на 1000 мл среды.
2. Допускается уменьшение или увеличение содержания агар-агара в средах в зависимости
от его качества.
3. Допускается использование взамен сред с ферментативным гидролизатом биомассы микроорганизмов
(без оболочек) сред с другими источниками аминного азота:
а) сухих сред на основе сухого рыбного бульона. При использовании данной среды в отдельных
случаях необходимо изменение посевной дозы тест-микроба и увеличение концентрации
растворов стандартных и испытуемых образцов;
б) сред на основе панкреатического гидролизата мяса (по Хоттингеру) глубокого расщепления.
Среды № 6, 7, 8, 10 должны содержать 130-140 мг% аминного азота, а среды № 4, 5, 9,
13-30-35 мг% аминного азота. Для приготовления сред с гидролизатом мяса применяют дистиллированную
воду. Панкреатический гидролизат мяса и среды на его основе готовят обычным
способом, изложенным в руководствах по микробиологии. Условия проведения анализа
на средах с панкреатическим гидролизатом не отличаются от условий проведения анализа на
средах с ферментативным гидролизатом биомассы микроорганизмов без оболочек.
При контроле активности антибиотиков применяются буферные растворы,
состав которых приведен в табл. 33.4.
Таблица 33.4
Состав буферных растворов
Ингредиенты буферов
Калия фосфат однозамещенный, г
Калия фосфат двузамещенный, г
Натрия фосфат двузамещенный, г
Натрия цитрат трехзамещенный, г
Кислота хлористоводородная
концентрированная, г
Вода дистиллированная, до 1000 мл
рН буферного раствора
Содержание ингредиентов
1
3,63
7,13
—
—
1000 мл
6,8-7,0
2
—
—
—
20,6
1,81
1000 мл
5,8-6,0
3
7,72
—
1,78
—
—
1000 мл
6,0-6,2
4
0,68
10,99
—
—
1000 мл
7,8-8,0
5
32
8
—
1000 мл
6,0-6,2
НЕЗ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Вычисление ошибки логарифма активности испытуемого SlgCn проводится по
общей фармакопейной статье «Статистическая обработка результатов
химического эксперимента и биологических испытаний».
Сначала вычисляют величину дисперсии Sft, характеризующую разброс значений
dj, d2, d3, d4, d5 относительно прямой D = a + b lgC:
SI = ( S <* - <* + M* G))2) : 3.
«..ctf-V#(w + | +
J2\ 4d0 - dl) ¦ ) ¦ + ^
4 * = - l f = l /
где: и - число параллельных испытаний величины Си, приведенных в опыте
с одной стандартной кривой;
cln - среднее значение диаметра зон задержки роста для испытуемого,
полученное по п испытаниям;
ds - среднее значение диаметра зон задержки роста для контрольной концентрации,
полученное по тем же п испытаниям.
Число степеней свободы величины S\gCu равно 3.
Пр и м ер. Вычислим SigCu с использованием данных примера, приведенного
в основном тексте статьи для иллюстрации вычисления параметров стандартной
кривой.
Расчеты SQ удобно проводить с помощью следующей таблицы.
q,
3,2
4,00
5,00
6,25
7,8
Суммы по
столбцам
igq
0,5051
0,6021
0,6990
0,7959
0,8921
3,4942
di
17,64
18,15
19,03
19,58
20,09
а + b lg Ci5
17,63
18,26
18,90
19,53
20,16
[dr(a+b lgCj)2
0,0001
0,0121
0,0169
0,0025
0,0049
0,0365
ig2q
0,2551
0,3625
0,4886
0,6334
0,7958
2,5354
При вычислении значений а + b lg C{ необходимо брать достаточное число
знаков для а и Ь.
Пусть число испытаний образца в опыте п = 1, ds = 18,61 и du = 18,44.
Тогда Zs = ds= 18,61;Зц = du = 18,44.
BET

Найдем SlgCu:
S$ = 0,0365:3=* 0,01217;
с -x/OjHgii'/ 5(18,44-18,61)* \ ,
Stf cu - V "б^зГ- V0,2 + ' + 6,532^5.2,5355 -3,4943)»; ~ °'0185'
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Объединение результатов п опытов, выполненных с одним и тем же разведением
образца уи, проводится с усреднением значений логарифмов активностей испытуемого
с учетом ошибок их определения в каждом опыте по формуле:
>g Си - ( X Si lg Си,) : 2 *h
где А = 1 : Sa Jg CU(.
Ошибка определения величины lg Су при этом будет равна:
5lgCu=l: V 2ft-
Доверительный интервал для величины логарифма истинной активности записывается
с учетом значения критерия Стьюдента, взятого из таблиц для дове-
N
рительной вероятности Р = 0,95 и числа степеней свободы/= ^ fy где. - число
степеней свободы величины S lg Сщ.
lg Cv±t{P,f).S]gC{).
Up им ер. Проведены два опыта по определению активности препарата. Разведение
испытуемого уи = 200. В первом опыте два испытания дали следующие
результаты:
Jg G, _ 0>622I; S fg С, ~ 0,0170 при /, « 3.
Во втором опыте по четырем испытаниям имели:
lg Си — 0,6305; S]g с, = 0,0099 при f2 = 3.
Для объединения результатов проводят следующие вычисления:
* - 1 : 0,017* = 3460;
&**= 1 :0,009а* = 10203;
8х + 82 - 13663;
lg Си'*. (3460-0.6J21 + 10203-0,6305): 13663 = 0,6284;
$ lg Cv = \ : V13663 = 0,0086.
Границы доверительного интервала для логарифма истинной активности образца
получают с использованием величины t (0,95; 6) = 2,45:
0,6284 ± 2,45-0,0086 = 0,6284 ± 0,0211.
на

Таким образом, нижняя граница - 0,6073, верхняя граница - 0,6495.
Потенцируя, найдем среднее значение и границы доверительного интервала
для истинной активности основного рабочего раствора испытуемого: 4,250;
4,049; 4,462. Учет степени разведения при получении основного рабочего раствора
позволяет получить среднее значение, а также нижнюю и верхнюю границу
несимметричного доверительного интервала для истинной активности
испытуемого: 850; 810; 892.
Точность определения должна быть такова, чтобы доверительные границы
при Р = 95 % отклонялись от среднего значения не более чем на ± 5 %. В данном
случае, используя верхнюю границу доверительного интервала, имеем:
892 -- 850
850
42 , | 0 ° % = W ' 1 0 0 % *" 4f94 % < 5 %-
34. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИМИКРОБНЫХ
КОНСЕРВАНТОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ (ОФС 42-0069-07)
Антимикробные консерванты - это вещества, обладающие антимикробным
действием, которые добавляют в лекарственные средства для предотвращения
роста и развития микроорганизмов, которые могут попасть в них во время технологического
процесса или при неоднократном употреблении лекарственного
средства. Консерванты входят в состав лекарственных средств. Для защиты пациента
эффективная концентрация консерванта в готовом лекарственном средстве
должна быть значительно ниже дозы, токсичной для человека.
Испытание эффективности антимикробных консервантов состоит из искусственного
заражения лекарственного средства суспензиями определенных тест-
микроорганизмов, инкубации контаминированных образцов при определенной
температуре, отбора проб через указанные интервалы времени и подсчете жизнеспособных
клеток микроорганизмов в 1 г или в 1 мл лекарственного средства
на протяжении периода испытания. Предлагаемый метод определения эффективности
консервантов применяется для готовых лекарственных средств в неповрежденной
упаковке. Все лекарственные средства, в состав которых входят
консерванты, разделены на четыре категории (табл. 34.1).
Таблица 34.1
Категории лекарственных средств, в состав которых входят консерванты
Категория
1
2
3
4
Лекарственные средства
Инъекционные и другие парентеральные лекарственные средства,
включая эмульсии. Лекарственные средства для введения в полость
уха, носа (стерильные), офтальмологические средства,
водорастворимые или приготовленные на водной основе
Лекарственные средства, применяемые местно, нестерильные
лекарственные средства для введения в полость носа, эмульсии, в
том числе и на слизистые
Лекарственные средства для приема внутрь, за исключением антаци-
дов, водорастворимые или приготовленные на водной основе
Антацидные лекарственные средства, приготовленные на водной основе
ягг

Тест-микроорганизмы
Антимикробное действие консервантов определяют в отношении некоторых
видов бактерий и грибов: Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas
aeruginosa ATCC 9027, Staphylococcus aureus ATCC 6538-P,
Candida albicans NCTC 885-653, Aspergillus niger ATCC 9642.
Примечания
1. Помимо вышеперечисленных тест-штаммов можно использовать другие
типовые штаммы одноименных видов микроорганизмов из национальных коллекций.
2. Набор тест-микроорганизмов может быть уменьшен или увеличен в зависимости
от способа применения или состава испытуемого лекарственного
средства.
Все культуры микроорганизмов, полученные из Национальных коллекций в
ампулах, следует оживлять согласно прилагаемым инструкциям. Условия
культивирования тест-микроорганизмов для приготовления инокулята представлены
в табл. 34.2.
Таблица 34.2
Условия культивирования тест-микроорганизмов для приготовления инокулята
Микроорганизм
Escherichia coli ATCC
25922
Pseudomonas
aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus
ATCC 6538-P
Candida albicans
NCTC 885-653
Aspergillus niger ATCC
9642
Питательная
среда*
Соево-казеиновый
агар или среда № 1,
сухая
Соево-казеиновый
бульон или среда
№ 8, сухая
Сабуро-глюкоза
агар или среда № 2,
сухая жидкая среда
Сабуро
--//--
Температура
инкубации посевов
(32,5 ± 2,5) °С
(22,5 ± 2,5) °С
(22,5 ± 2,5) °С
Время инкубации
посевов
от 18 до 24 ч
от 44 до 52 ч
от 6 до 10 сут.
* Допускается использование альтернативных жидких и агаризованных питательных
сред отечественного и зарубежного производства, зарегистрированных в РФ.
Приготовление инокулята
Выросшие культуры тест-штаммов бактерий и C.albicans смывают с поверхности
скошенного агара стерильным изотоническим раствором натрия хлорида
0,9 %. Концентрацию клеток бактерий доводят до 109, a C.albicans до 107 КОЕ в
1 мл, используя отечественный стандартный образец мутности 10 ЕД
ОСО 42-28-59-85 или международный стандарт мутности (The International Reference
Preparation of Opacity of 10 International Units), или инструментальный, в
том числе турбодиметрический метод.
ОН

Для смыва конидий A.niger используют стерильный 0,9 % раствор натрия хлорида,
содержащий 0,05 % твина-80. Количество конидий A.niger в 1 мл смыва
определяют с помощью камеры Горяева или чашечным агаровым методом. Полученную
взвесь разводят до концентрации 107 конидий в 1 мл.
Стандартизованные суспензии всех тест-микроорганизмов разводят до концентрации
107-108 КОЕ/мл.
Техника испытания
Отбирают препараты в конечной, неповрежденной упаковке. В 5 стерильных
флаконов помещают по 20 мл исследуемого препарата. В каждый флакон вносят
по 0,1 мл одного из приготовленных инокулятов тест-микроорганизмов: E.coli,
P.aeruginosa, S.aureus, С.albicans, A.niger и перемешивают. Лекарственные средства
категорий 1,2,3 (табл. 34.1) контаминируют тест-микроорганизмами в конечной
концентрации 105-106 КОЕ в 1 мл или 1 г. Для категории 4 (табл. 34.1)
конечные концентрации тест-микроорганизма для искусственной контаминации
лекарственного средства должны быть в пределах от 103 до 104 КОЕ в 1 мл
или 1 г.
Лекарственные средства, приготовленные на твердой мазевой основе, нагревают
до температуры от (47,5 ± 2,5) °С. Используя стерильные стеклянные бусы
или шпатель, смешивают каждый инокулят стандартизованной микробной суспензии
с образцом лекарственного средства в течение не менее 1 мин до достижения
гомогенной эмульсии. Для улучшения смешивания можно добавить
стерильное поверхностно-активное вещество, например твин-80, если оно не
влияет на жизнеспособность микроорганизмов или на эффективность консерванта.
Фактическую исходную концентрацию бактерий и грибов в контаминиро-
ванных образцах определяют сразу после контаминации чашечным агаровым
методом посева на соответствующие питательные среды (табл. 34.2), используя
подходящие разведения для получения на чашке от 30 до 300 колоний бактерий
и от 10 до 100 колоний грибов. Можно также применять для этой цели метод
мембранной фильтрации.
Контаминированные образцы лекарственного средства выдерживают при
температуре (22,5 ± 2,5) °С в защищенном от света месте. Через 7, 14 и 28 сут.
после инокуляции для препаратов 1 категории и через 14, 28 сут. для препаратов
2-4 категории определяют количество жизнеспособных микроорганизмов в 1 мл
образца.
В случае необходимости вводят инактиватор (нейтрализатор) на определенное
антимикробное вещество в чашки с питательной средой или в соответствующее
разведение лекарственного средства перед посевом на чашки.
Результаты испытания и их интерпретация
Чашечным агаровым методом определяют количество КОЕ/мл для каждого
тест-микроорганизма через указанные выше сроки инкубации контаминиро-
ванного лекарственного средства. Изменение количества микробных клеток по
сравнению с исходной концентрацией в 1 мл выражают в десятичных логарифмах
(log10). Для оценки эффективности антимикробного действия консервантов
используют критерии, указанные в табл. 34.3.
ЕПТ

Увеличение КОЕ/мл не фиксируется, если последующее измерение превышает
предыдущее менее чем на 0,5 log10 единицы измерения.
Консерванты считают эффективными, если они соответствуют критериям,
описанным в табл. 34.3.
Таблица 34.3
Критерии оценки эффективности антимикробных консервантов
лекарственных средств
В контаминированном образце
Категория
1
2
3
Бактерии
По сравнению с исходной концентрацией
уменьшение логарифма
числа бактерий в 1 мл через 7 сут
должно быть не менее, чем на 1,
через 14 сут - не менее, чем на 3,
ас 14 до 28 сут не должно быть увеличения
числа бактерий
По сравнению с исходной концентрацией
уменьшение логарифма
числа бактерий в 1 мл через 14 сут
должно быть не менее, чем на 2, а с
14 до 28 сут не должно быть увеличения
числа бактерий
По сравнению с исходной концентрацией
уменьшение логарифма
числа бактерий в 1 мл через 14 сут
должно быть не менее, чем на 1,
ас 14 до 28 сут не должно быть
увеличения числа бактерий
Грибы
По сравнению с исходной концентрацией
через 7, 14, 28 сут
не должно быть увеличения
числа грибов
По сравнению с исходной концентрацией
через 14 и 28 сут не
должно быть увеличения числа
грибов
По сравнению с исходной концентрацией
через 14 и 28 сут не
должно быть увеличения числа
грибов
Бактерии и грибы
4 По сравнению с исходной концентрацией через 14 и 28 сут не должно
быть увеличения числа бактерий и грибов
но

РЕАКТИВЫ
35. РЕАКТИВЫ. ИНДИКАТОРЫ (ОФС 42-0070-07)
Агар. Пористые пластины толщиной не более 20 мм или пленки толщиной не
более 0,5 мм белого или светло-желтого цвета; допускается слегка сероватый
оттенок.
Потеря в массе при высушивании - не более 20 %.
Содержание тяжелых металлов - не более 40 ppm Pb.
Агароза для хроматографии. 4 % суспензия в воде набухших гранул диаметром
от 60 до 140 мкм. Используют в гель-хроматографии для разделения белков
с молекулярными массами от 6 х 104 до 20 х 106 и полисахаридов с молекулярными
массами от 3 х 103 до 5 х 106.
Агароза поперечно-сшитая для хроматографии (1)
Получают из агарозы реакцией с 2,3-дибромпропанолом в сильно щелочной
среде.
4 % суспензия в воде набухших гранул диаметром от 60 до 140 мкм. Используют
в гель-хроматографии для разделения белков с молекулярными массами от
6 х 104 до 20 х Ю6 и полисахаридов с молекулярными массами от 3 х Ю3
до5х Ю6.
Агароза поперечно-сшитая для хроматографии (2)
Получают из агарозы реакцией с 2,3-дибромпропанолом в сильно щелочной
среде.
4 % суспензия в воде набухших гранул диаметром от 60 до 140 мкм. Используют
в гель-хроматографии для разделения белков с молекулярными массами от
7 х ю4 до 40 х Ю6 и полисахаридов с молекулярными массами от 1 х ю5
до2х Ю7.
Агароза для электрофореза
Нейтральный линейный полисахарид, основной компонент которого получают
из агара.
Порошок белого или почти белого цвета.
Практически нерастворима в холодной воде, очень мало растворима в горячей
воде.
Агароза-ДЭАЭ для ионообменной хроматографии
Поперечно-сшитая агароза, с замещенными диэтиламиноэтильными группами,
в виде шарообразных гранул.
Агароза/поперечно-сшитый полиакриламид
Агароза в поперечно-сшитой полиакриламидной матрице. Используют для разделения
глобулярных белков с молекулярными массами от 2 х Ю4 до
35 х Ю4.
Аденозин. C10H13N5O4. (М.м. 267,25). 6-Амино-9-Р-0-рибофуранозил-9Н-
пурин.
Кристаллический порошок белого цвета.
Мало растворим в воде, практически нерастворим в ацетоне, спирте 96 % и
эфире; растворяется в разведенных растворах кислот.
РЯЯ

Температура плавления. Около 234 °С.
Адипиновая кислота. С6Н10О4. (М.м. 146,14).
Кристаллы в виде призм.
Легко растворима в метаноле, растворима в ацетоне, практически нерастворима
в петролейном эфире.
Температура плавления. Около 152 °С.
Азометин Н. C17H12NNa08S2. (М.м. 445,4). Натрия 4-гидрокси-5-(2-гидрокси-
бензилиденамино)-2,7-нафталиндисульфонат кислый.
Бесцветный или белый кристаллический порошок.
Растворим в воде и спирте 96 %.
Азометин Н раствор
0,45 г азометина Н и 1 г аскорбиновой кислоты растворяют в воде при слабом
нагревании и доводят объем раствора тем же растворителем до 100 мл.
Азот. N2. (М.м. 28,01). Азот промытый и высушенный.
Азот особой чистоты. Содержит не менее 99,999 % (об/об) N2.
Углерода монооксид. Не более 5 ррт.
Кислород. Не более 5 ррт.
Азот ДЛЯ хроматографии. Содержит не менее 99,95 % (об/об) N2.
Азот, свободный от кислорода
Азот очищают от кислорода пропусканием через раствор пирогаллола щелочной.
Азота закись. N20. (М.м. 44,01). Содержит не менее 99,99 % (об/об) N20.
Азота монооксид. Не более 1 ррт.
Углерода монооксид. Не более 1 ррт.
Азота монооксид. NO. (М.м. 30,01). Содержит не менее 98,0 % (об/об) NO.
Азотная кислота концентрированная. HN03. (М.м. 63,01). Содержит не менее
63,0 % (м/м) и не более 70,0 % (м/м) HN03.
Прозрачная, бесцветная или почти бесцветная жидкость, смешивается с водой.
dl .От 1,384до 1,416.
Раствор 10 г/л является сильной кислотой и дает реакцию на нитраты.
Прозрачность. Азотная кислота должна быть прозрачной.
Цветность. Окраска азотной кислоты должна быть не интенсивнее эталона Y6.
Хлориды. Не более 0,00005 % (0,5 ррт). К 5 г азотной кислоты концентрированной
прибавляют 10 мл воды и 0,3 мл 1,7 % раствора серебра нитрата, выдерживают
в течение 2 мин в защищенном от света месте. Полученный раствор
должен выдерживать испытание на хлориды. Эталон готовят с использованием
смеси 13 мл воды, 0,5 мл азотной кислоты концентрированной,
0,5 мл эталонного раствора хлорида (5 ррт О) и 0,3 мл 1,7 % раствора серебра
нитрата.
Сульфаты. Не более 0,0002 % (2 ррт). К 10 г азотной кислоты концентрированной
прибавляют 0,2 г натрия карбоната и выпаривают досуха; остаток растворяют
в 15 мл воды дистиллированной. Полученный раствор должен
выдерживать испытание на сульфаты. Эталон готовят с использованием 2 мл
эталонного раствора сульфата (10 ppm S04) и 13 мл воды дистиллированной.
Мышьяк (метод А). Не более 0,000002 % (0,02 ррт). К 50 г азотной кислоты

концентрированной прибавляют 0,5 мл серной кислоты концентрированной и
осторожно нагревают до появления белых паров; к остатку прибавляют 1 мл
10 % раствора гидроксиламина гидрохлорида и доводят водой до объема 2 мл.
Полученный раствор должен выдерживать испытание на мышьяк. Эталон готовят
с использованием 1,0 мл эталонного раствора мышьяка (1 ppm As).
Тяжелые металлы. Не более 0,0002 % (2 ррт). 10 мл раствора, приготовленного
для испытания на железо, доводят водой до объема 20 мл. 12 мл полученного
раствора должны выдерживать испытание на тяжелые металлы. Эталон готовят
с использованием эталонного раствора свинца (2 ppm Pb).
Железо. Не более 0,0001 % (1 ррт). Осадок, полученный при испытании на сульфатную
золу, растворяют в 1 мл хлористоводородной кислоты разведенной
7,3 % и доводят объем раствора водой до 50 мл. 5 мл полученного раствора
доводят водой до объема 10 мл. Полученный раствор должен выдерживать испытание
на железо.
Сульфатная зола. Не более 0,001 %. 100 г кислоты азотной концентрированной
осторожно выпаривают досуха; остаток смачивают несколькими каплями серной
кислоты концентрированной и нагревают до бледно-красного цвета.
Количественное определение. К 1,50 г кислоты азотной концентрированной прибавляют
около 50 мл воды и титруют 1 М раствором натрия гидроксида, используя
в качестве индикатора 0,1 мл 0,05 % раствора метилового красного.
1 мл 1 М раствора натрия гидроксида соответствует 63,0 мг HN03.
Хранят в защищенном от света месте.
Азотная кислота, свободная от свинца
Азотная кислота концентрированная должна выдерживать следующее дополнительное
испытание.
К 100 г азотной кислоты концентрированной прибавляют 0,1 г натрия карбоната
безводного и выпаривают досуха; остаток растворяют в воде при слабом нагревании
и доводят объем раствора тем же растворителем до 50,0 мл. Содержание
свинца определяют методом атомно-абсорбционной спектрометрии. Интенсивность
поглощения измеряют при длине волны 283,3 нм или 217,0 нм, используя
в качестве источника излучения лампу с полым свинцовым катодом и воздушно-
ацетиленовое пламя. Не более 0,00001 % (0,1 ppm Pb).
Азотная кислота, свободная от свинца и кадмия
Азотная кислота концентрированная должна выдерживать следующие дополнительные
испытания.
Испытуемый раствор. К 100 г азотной кислоты концентрированной прибавляют
0,1 г натрия карбоната безводного, выпаривают досуха; остаток растворяют в
воде при слабом нагревании и доводят объем раствора тем же растворителем
до 50,0 мл.
Кадмий. Не более 0,00001 % (0,1 ррт). Содержание кадмия определяют методом
атомно-абсорбционной спектрометрии. Интенсивность поглощения измеряют
при длине волны 228,8 нм, используя в качестве источника излучения лампу с
полым кадмиевым катодом и воздушно-ацетиленое или воздушно-пропановое
пламя.
Свинец. Не более 0,00001 % (0,1 ррт). Содержание свинца определяют методом
шз

атомно-абсорционной спектрометрии. Интенсивность поглощения измеряют
при длине волны 283,3 нм или 217,0 нм, используя лампу с полым свинцовым
катодом и воздушно-ацетиленовое пламя.
Азотная кислота. Содержит 31-34 % HN03.
Смешивают 1 г азотной кислоты концентрированной и 1 г воды.
Плотность. 1,186-1,210.
Азотная кислота разведенная 12,5 %. Содержит около 125 г/л HN03.
20 г кислоты азотной концентрированной доводят водой до объема 100 мл.
Азотная кислота разведенная 16 %. Содержит азотной кислоты 15,5-17,0 %.
Смешивают 1 г азотной кислоты и 1 г воды.
Плотность. 1,087-1,096.
Азотная кислота дымящая
Прозрачная жидкость, слегка желтоватого цвета, дымящая на воздухе.
dw .Около 1,5.
Азотной кислоты 2 М раствор
193,8 мл азотной кислоты концентрированной разбавляют водой до
объема 1000,0 мл.
Азотной кислоты 0,1 М раствор
9,7 г азотной кислоты концентрированной разбавляют водой до объема 1000,0 мл.
Акриламид. C3H5NO. (М.м. 71,08). Пропенамид.
Бесцветные или белого цвета хлопья или кристаллический порошок белого или
почти белого цвета.
Очень легко растворим в воде и метаноле, легко растворим в этаноле.
Температура плавления. Около 84 °С.
Акриламид-бисакриламида (29:1) 30 % раствор
290 г акриламида и 10 г метиленбисакриламида растворяют в 1 л воды и фильтруют.
Акриламид-бисакриламида (36,5:1) 30 % раствор
292 г акриламида и 8 г метиленбисакриламида растворяют в 1 л воды и фильтруют.
Акриловая кислота. С3Н402 (М.м. 72,06). Проп-2-еновая кислота. Винилму-
равьиная кислота.
Содержит не менее 99 % С3Н402. Стабилизирована 0,02 % раствором монометилового
эфира гидрохинона.
Бесцветная или слегка желтоватая едкая жидкость.
Смешивается с водой, спиртом 96 % и эфиром.
Легко полимеризуется в присутствии кислорода.
. Около 1,05.
20
Пи .Около 1,421.
Температура кипения. Около 141 °С.
Температура плавления. От 12 до 15 °С.
Р-Аланин. См. З-Аминопропионовая кислота.
Алеуриновая кислота. С16Н3205. (М.м. 304,42). (9RS, 10RS)-9,10,16-TpH-
гидроксигексадекановая кислота.
ЕВЗ

Порошок белого цвета, жирный на ощупь. Растворима в метаноле.
Температура плавления. Около 101 °С.
Ализарин S. C14H7Na07SH20. (М.м. 360,26). Натрия 1,2-дигидроксиантра-
хинон-3-сульфонат, моногидрат. Натрия 3,4-дигидрокси-9,10-диоксо-9 10-
дигидроантрацен-2-сульфонат, моногидрат.
Порошок оранжево-желтого цвета.
Легко растворим в воде и спирте 96 %, практически нерастворим в бензоле, хлороформе
и эфире.
Ализариновый красный С. См. Ализарин S
Ализарина S раствор 0,1 %. Раствор 1 г/л.
Испытание на чувствительность. Реактив изменяет окраску от желтой до оранжево-
красной при установлении титра 0,05 М раствора бария перхлората.
Переход окраски от желтой до фиолетовой в интервале рН 3,7-5,2.
Ализариновый желтый. C13H8N3Na05. (М.м. 309,21). Натриевая соль 5-
(Т\Г-нитрофенил)азосалициловой кислоты.
Кристаллический порошок светло-коричневого, темно-коричневого или красно-
коричневого цвета.
Мало растворим в воде и спирте 96 %, легко растворим при нагревании.
Переход окраски раствора от светло-желтой к красно-оранжевой в интервале рН
от 10,0 до 12,0.
Раствор индикатора. 0,1 % раствор. Растворение проводят при нагревании на
водяной бане.
Алюминий. Al. (A.M. 26,98).
Мягкий, ковкий металл белого с голубоватым оттенком цвета в виде брусков,
листов, порошка, ленты или проволоки. На воздухе образуется окисная пленка,
которая защищает металл от коррозии.
Аналитической чистоты.
Алюминия-калия сульфат. Алюмокалиевые квасцы. A1K(S04)2"12H20
(М.м. 474,4).
Содержит не менее 99,0 % и не более 100,5 % A1K(S04)2-12H20.
Гранулированный порошок или бесцветная кристаллическая масса.
Легко растворим в воде, очень легко растворим в кипящей воде, растворим в
глицерине, практически нерастворим в этаноле.
Алюминия нитрат. A1(N03)39H20. (М.м. 375,15). Алюминия нитрат, нонагидрат.
Кристаллы, расплывающиеся на воздухе.
Очень легко растворим в воде и спирте 96 %, очень мало растворим в ацетоне.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Алюминия оксид безводный
Алюминия оксид, состоящий из у-А12Оэ, обезвоженный и активированный нагреванием.
Размер частиц - от 75 до 150 мкм.
Алюминия оксид основной
Алюминия оксид безводный основной формы пригоден для хроматографиче-
ских колонок.
рН. От 9 до 10 (суспензия, полученная встряхиванием 1 г с 10 мл воды в течение
5 мин).
ЕШ

Алюминия оксид нейтральный. А12Оэ. (Мм. 102,0).
Гранулированный порошок белого цвета.
Обменная емкость. 1,00 г прокаина гидрохлорида растворяют в спирте
(90 %, об/об) и доводят объем раствора тем же растворителем до 100 мл.
20,0 мл полученного раствора и 5,0 г испытуемого реактива помещают в колбу
вместимостью 100 мл с притертой стеклянной пробкой, выдерживают в течение
15 мин, периодически встряхивая, и фильтруют. К 10,0 мл фильтрата прибавляют
10 мл воды, 0,05 мл 0,05 % раствора бромфенолового синего и титруют
0,1 М раствором хлористоводородной кислоты до зеленого окрашивания. Окраска
раствора должна измениться при прибавлении не более 1,4 мл 0,1 М раствора
хлористоводородной кислоты.
Водорастворимые вещества. Не более 0,2 %. Используют хроматографическую
колонку с внутренним диаметром 1 см, длиной 40 см, нижний конец которой
сужен до диаметра от 2 до 3 мм и снабжен пористым стеклянным фильтром (100)
или хлопковым тампоном выше суженной части. Колонку заполняют 10,0 г испытуемого
реактива и 25 мл воды, элюируют водой до получения 20 мл прозрачного
элюата, который выпаривают и сушат при температуре 150 °С; масса
остатка не должна превышать 20 мг.
Раствор S. Остаток, полученный в испытании «Водорастворимые вещества»,
растворяют при нагревании в воде, фильтруют и доводят объем фильтрата водой
до 100 мл.
Хлориды. Не более 0,05 %. 1 мл раствора S доводят водой до объема 15 мл. Полученный
раствор должен выдерживать испытание на хлориды.
Сульфаты. Не более 0,1 %. 1 мл раствора S доводят водой до объема 15 мл. Полученный
раствор должен выдерживать испытание на сульфаты. Эталон готовят
с использованием 10 мл эталонного раствора сульфата (10 ppm S04).
Хроматографическая разделяющая способность. Хроматографическую колонку,
описанную в испытании «Водорастворимые вещества», заполняют испытуемым
реактивом до высоты 5 см. Через колонку пропускают 5 мл раствора азобензола
и 5 мл метоксиазобензола, затем промывают 20 мл смеси растворителей бензол
- петролейный эфир (1:4). В верхней части колонки образуется слой метоксиазобензола
ярко-желтого цвета толщиной от 3 до 5 мм, а ниже его
наблюдается слой азобензола бледно-желтого цвета толщиной 2 см.
Алюминия хлорид. А1С13 • 6Н20. (М.м. 241,42). Алюминия хлорид гексагидрат.
Содержит не менее 98,0 % А1С13 • 6Н20.
Кристаллический порошок от белого до слегка желтоватого цвета, гигроскопичен.
Легко растворим в воде и спирте 96 %, растворим в эфире.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Алюминия хлорида раствор
65,0 г алюминия хлорида растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем
до 100 мл. Прибавляют 0,5 г угля активированного, перемешивают
в течение 10 мин и фильтруют. К фильтрату при непрерывном перемешивании
прибавляют достаточное количество 1 % раствора натрия гидроксида (около
60 мл) до получения рН около 1,5.
15.3ак.2768

Алюминия хлорида реактив
2,0 г алюминия хлорида растворяют в 100 мл 5 % (об/об) раствора уксусной кислоты
ледяной в метаноле.
Алюминия хлорида спиртовой раствор 5 %
5 г алюминия хлорида растворяют в 40 мл спирта 96 % в мерной колбе вместимостью
100 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки.
Алюминия хлорида спиртовый раствор 2 %
2 г алюминия хлорида растворяют в 40 мл спирта 96 % в мерной колбе вместимостью
100 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки.
Алюминия хлорида раствор 1 %
1 г алюминия хлорида растворяют в 40 мл спирта 96 % в мерной колбе вместимостью
100 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки.
Алюминия хлорида спиртовый раствор (около 0,05 М)
12,5 г алюминия хлорида растворяют в 100 мл спирта 96 % и доводят объем раствора
тем же спиртом до 1000,0 мл.
Проверки титра не требуется.
Амидо-черный 10В. C22H14N6Na209S2. (М.м. 616,5). Динатрия 5-амино-4-
гидрокси-6-[(4-нитрофенил)азо]-3-(фенилазо)нафталин-2,7-дисульфонат.
Порошок от темно-коричневого до черного цвета.
Умеренно растворим в воде; растворим в спирте 96 %.
Амидо-черного 10В раствор 0,5 %
Раствор 5 г/л амидо-черного 10В в смеси растворителей 30 % уксусной кислоты-
метанол (10:90).
н-Амиловый спирт. См. Пентанол.
м/>ет-Амиловый спирт. См. /я/?е/я-Пентиловый спирт.
Амилацетат. СНзСООС5Ни. (М.м. 130,19). Амиловый эфир уксусной кислоты.
Бесцветная, прозрачная жидкость с фруктовым запахом.
Хорошо смешивается с этанолом и эфиром; смешивается с водой 0,18 : 100.
i20
d* . 0,879.
Температура кипения. Около 148 °С.
Аминоазобензол. С^Нц^. (М.м. 197,24). 4-(Фенилазо)анилин.
Игольчатые кристаллы коричневато-желтого с голубоватым оттенком цвета.
Мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 128 °С.
4-Аминоантипирин. См. аминопиразолон.
4-Аминобензойная кислота. C7H7N02. (М.м. 137,14).
Кристаллический порошок белого цвета.
Мало растворима в воде, легко растворима в спирте 96 %, практически нерастворима
в петролейном эфире.
Температура плавления. Около 187 °С.
Хранят в защищенном от света месте.
4-Аминобензойной кислоты раствор
1 г 4-аминобензойной кислоты растворяют в смеси 18 мл уксусной кислоты безводной,
20 мл воды и 1 мл фосфорной кислоты концентрированной.
шз

Непосредственно перед использованием полученный раствор смешивают с ацетоном
(2:3).
2-Аминобензойная кислота. C7H7N02. (М.м. 137,14). Антраниловая кислота.
Кристаллический порошок от белого до бледно-желтого цвета.
Умеренно растворима в холодной воде, легко растворима в горячей воде,
спирте 96 %, эфире и глицерине.
Растворы в спирте 96 % или эфире и в особенности в глицерине обнаруживают
фиолетовую флуоресценцию.
Температура плавления. Около 145 °С.
Аминобутанол. C4HnNO. (М.м. 89,14). 2-Аминобутанол.
Маслянистая жидкость.
Смешивается с водой, растворим в 96 % спирте.
с%. Около 0,94.
По ¦ Около 1,453.
Температура кипения. Около 180 °С.
6-Аминогексановая кислота. C6H13N02. (М.м. 131,17). 6-Аминокапроновая
кислота.
Бесцветные кристаллы.
Легко растворима в воде, умеренно растворима в метаноле, практически нерастворима
в этаноле.
Температура плавления. Около 205 °С.
Аминогидроксинафталинсульфоновая кислота. C10H9NO4S. (М.м. 239,24).
4-Амино-З-гидроксинафталин-1 -сульфоновая кислота.
Игольчатые кристаллы белого или серого цвета, под действием света приобретают
розовый цвет, в особенности влажные.
Практически нерастворима в воде, спирте 96 % и эфире, растворима в растворах
гидроксидов щелочных металлов и горячих растворах натрия метабисульфита.
Хранят в защищенном от света месте.
Аминогидроксинафталинсульфоновой кислоты раствор
Смешивают 5,0 г натрия сульфита безводного, 94,3 г натрия гидросульфита и
0,7 г аминогидроксинафталинсульфоновой кислоты. 1,5 г полученной смеси растворяют
в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до 10,0 мл.
Срок годности раствора - 1 сут.
Аминогиппуровая кислота. C9H10N2O3. (М.м. 194,19). (4-Аминобенз-
амидо)уксусная кислота.
Порошок белого или почти белого цвета.
Умеренно растворима в воде, растворима в спирте 96 %, очень мало растворима
в эфире.
Температура плавления. Около 200 °С.
Аминогиппуровой кислоты реактив
3 г фталевой кислоты и 0,3 г аминогиппуровой кислоты растворяют в спирте
96 % и доводят объем раствора тем же растворителем до 100 мл.
Аминометилализариндиуксусная кислота. C19H15N08 • 2Н20.
(М.м. 421,4). 2,2'-[(3,4-Дигидроксиантрахинон-3-ил)метиленнитрило]диук-
сусная кислота, дигидрат.
^

Мелкокристаллический порошок от светлого коричневато-желтого до оранжево-
коричневого цвета.
Практически нерастворима в воде, растворима в растворах гидроксидов щелочных
металлов.
Температура плавления. Около 185 °С.
Потеря в массе при высушивании. Не более 10,0 %. Определение проводят
из 1,000 г.
Аминометилализариндиуксуснои кислоты раствор
0,192 г аминометилализариндиуксуснои кислоты растворяют в 6 мл свежеприготовленного
1 М раствора натрия гидроксида, прибавляют 750 мл воды, 25 мл
сукцинатного буферного раствора рН 4,6 и по каплям 0,5 М раствор хлористоводородной
кислоты до изменения окраски раствора от фиолетово-красной до
желтой (рН от 4,5 до 5), затем прибавляют 100 мл ацетона и доводят объем раствора
водой до 1000 мл.
Аминометилализариндиуксуснои кислоты реактив
Раствор I. 0,36 г церия(Ш) нитрата растворяют в воде и доводят объем раствора
тем же растворителем до 50 мл.
Раствор П. 0,7 г аминометилализариндиуксуснои кислоты суспендируют в
50 мл воды, прибавляют до растворения около 0,25 мл раствора аммиака концентрированного,
затем прибавляют 0,25 мл уксусной кислоты ледяной и доводят
объем раствора водой до 100 мл.
Раствор III. 6 г натрия ацетата растворяют в 50 мл воды, прибавляют 11,5 мл уксусной
кислоты ледяной и доводят объем раствора водой до 100 мл.
К 33 мл ацетона прибавляют 6,8 мл раствора III, 1,0 мл раствора II, 1,0 мл раствора
I и доводят объем полученного раствора водой до 50 мл.
Испытание на чувствительность. К 1,0 мл эталонного раствора фторида
(10 ppm F) прибавляют 19,0 мл воды и 5,0 мл реактива аминометилализариндиуксуснои
кислоты. Через 20 мин должно появиться голубое окрашивание.
Срок годности раствора - 5 сут.
1-Амино-2-нафтол-4-сульфоновая кислота. C10H9NO4S. (М.м. 239,2).
Кристаллы от белого до желтого цвета.
Легко растворима в воде, растворима в этаноле.
Аминонитробензофенон. C13H10N2O3. (М.м. 242,23). 2-Амино-5-
нитробензофенон.
Кристаллический порошок желтого цвета.
Практически нерастворим в воде, растворим в тетрагидрофуране, мало растворим
в метаноле.
Температура плавления. Около 160 °С.
А']см
%. От 690 до 720. Определение проводят при длине волны 233 нм, используя
раствор 0,01 г/л в метаноле.
Аминопиразолон. CnH13N30. (М.м. 203,24). 4-Амино-2,3-диметил-1-фенил-
пиразолин-5-он. 4-Аминоантипирин.
Игольчатые кристаллы или порошок светло-желтого цвета.
Умеренно растворим в воде, легко растворим в спирте 96 %, мало растворим в
эфире.
ЕШ

Температура плавления. Около 108 °С.
Аминопиразолона раствор 0,1 %. Раствор 1 г/л в буферном растворе рН 9,0.
Аминополиэфир. C18H36N206. (М.м. 376,49). 4,7,13,16,21,24-Гекса-окса-1,10-
диазабицикло [8,8,8]гексакозан.
Бесцветные кристаллы или белый кристаллический порошок.
Нерастворим в воде, мало растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. От 70 до 73 °С.
З-Аминопропанол. C3H9NO. (М.м. 75,11). З-Аминопропан-1-ол.
Прозрачная, бесцветная, вязкая жидкость.
dl . Около 0,99.
20
nD .Около 1,461.
Температура плавления. Около 11 °С.
З-Аминопропионовая кислота. С3Н7Ж)2. (М.м. 89,10). р-Аланин.
Содержит не менее 99 % C3H7N02.
Кристаллический порошок белого цвета.
Легко растворима в воде, мало растворима в спирте 96 %, практически нерастворима
в ацетоне и эфире.
Температура плавления. Около 200 °С с разложением.
Аминоуксусная кислота. H2NCH2COOH (М.м. 75,07). Гликокол. Глицин.
Белый кристаллический порошок.
Легко растворима в воде; нерастворима в эфире; очень мало растворима в
спирте 96 %.
Температура плавления. Около 234 °С с разложением.
Аминоуксусная буферная смесь
Растворяют в воде 8,4 г натрия гидрокарбоната, 10 г калия гидрокарбоната, 7,5 г
аминоуксуснои кислоты, 4 мл раствора аммиака концентрированного и доводят
объем раствора водой до 100,0 мг; рН около 8,3.
4-Аминофенол. C6H7NO. (М.м. 109,13).
Белый или слегка окрашенный кристаллический порошок.
Умеренно растворим в воде, растворим в этаноле.
Температура плавления. Около 186 °С с разложением.
Хранят в защищенном от света месте.
Аминохлорбензофенон. C13H10C1NO. (М.м. 231,68). 2-Амино-5-хлорбензофенон.
Кристаллический порошок желтого цвета.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в ацетоне, растворим в
спирте 96 %.
Температура плавления. Около 97 °С.
Хранят в защищенном от света месте.
Аммиак водный. Аммиака раствор концентрированный 25 %. NH4OH (М.м.
35,05). Содержит от 25 до 28 % NH3.
Бесцветная, прозрачная жидкость с характерным острым (резким) запахом. Обращаться
с осторожностью.
Аммиака раствор. Содержит не менее 17 % (170 г/л) и не более 18 %
(180 г/л) NH3 (М.м. 17,03).
тая

67 г раствора аммиака концентрированного доводят водой до объема 100 мл
dl .От 0,931 до 0,934.
Аммиака раствор, используемый в испытании на предельное содержание железа,
должен выдерживать следующее дополнительное требование: 5 мл раствора
аммиака выпаривают на водяной бане досуха. К сухому остатку
прибавляют 10 мл воды, 2 мл 20 % раствора лимонной кислоты, 0,1 мл тиогли-
колевой кислоты и раствора аммиака до щелочной реакции, доводят объем полученного
раствора водой до 20 мл. Раствор не должен окрашиваться в розовый
цвет.
Хранят при температуре ниже 20 °С, защищая от углерода диоксида.
Аммиака раствор 10 %
41 г раствора аммиака концентрированного доводят водой до объема 100 мл.
Аммиака раствор 5 %
500 мл 10 % раствора аммиака разбавляют водой до 1000,0 мл.
Аммиака раствор 1 %
4 г раствора аммиака концентрированного доводят водой до объема 100 мл.
Аммиака раствор разведенный 3 %. Содержит не менее 3,3 % (33 г/л) и не
более 3,5 % (35 г/л) NH3 (М.м. 17,03).
14 г раствора аммиака концентрированного доводят водой до объема 100 мл.
Аммиака раствор разведенный 0,18 %. Содержит не менее 0,16 %
(1,6 г/л) и не более 0,18 % (1,8 г/л) NH3 (М.м. 17,03).
0,7 г раствора аммиака концентрированного доводят водой до объема 100 мл.
Аммиака раствор концентрированный 32 %. Содержит не менее 32,0 % (м/м)
NH3 (М.м. 17,03).
Прозрачная, бесцветная жидкость.
dl . От 0,883 до 0,889.
Количественное определение. 50,0 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты
помещают в колбу с притертой пробкой, точно взвешивают, прибавляют
2 мл раствора аммиака концентрированного и снова взвешивают. Титруют 1 М
раствором натрия гидроксида, используя в качестве индикатора 0,5 мл смешанного
раствора метилового красного.
1 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 17,03 MTNH3.
Хранят при температуре не выше 20 °С, защищая от углерода диоксида.
Аммиака раствор 13,5 М
920,0 мл аммиака водного разбавляют водой до 1000,0 мл.
Аммиака раствор 10 М
681,2 мл аммиака водного разбавляют водой до объема 1000,0 мл.
Аммиака раствор 6 М
408,7 мл аммиака водного разбавляют водой до объема 1000,0 мл.
Аммиака водно-спиртовый раствор
1 мл раствора аммиака концентрированного смешивают с 9 мл спирта 96 %-
Аммиачный буферный раствор
54 г аммония хлорида растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 л,
прибавляют 350 мл раствора аммиака концентрированного и доводят объем
раствора водой до метки. рН полученного раствора от 9,5 до 10,0.
ЕЕЯГ

Аммоний азотнокислый. См. Аммония нитрат.
Аммония ацетат. СН3 COONH4 (М.м. 77,09). Аммоний уксуснокислый.
Бесцветные кристаллы, очень легко расплывающиеся на воздухе.
Очень легко растворим в воде и спирте 96 %.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Аммония ацетата раствор 15 %
150 г аммония ацетата растворяют в воде, прибавляют 3 мл уксусной кислоты ледяной
и доводят объем раствора водой до 1000 мл.
Срок годности - 7 сут.
Аммония ацетата насыщенный раствор
Растворяют достаточное количество аммония уксуснокислого в воде до получения
раствора, содержащего не менее 61,5 % аммония уксуснокислого.
Аммония ацетата насыщенный раствор, нейтрализованный раствором натрия
гидроксида
Аммония ацетата насыщенный раствор нейтрализуют сначала 30 % раствором
натрия гидроксида до розового окрашивания по фенолфталеину, затем избыток
натрия гидроксида нейтрализуют насыщенным раствором аммония ацетата до
слабо-розового окрашивания.
Аммония ванадат. NH4V03. (М.м. 116,98). Аммония триоксованадат (V). Аммоний
ванадиевокислый мета. Аммония ванадат мета.
Кристаллический порошок от белого до слегка желтоватого цвета.
Мало растворим в воде, растворим в 10 % растворе аммиака.
Аммония ванадата раствор 1,2 %
1,2 г аммония ванадата растворяют в 95 мл воды и доводят объем раствора серной
кислотой концентрированной до 100 мл.
Аммония ванадата раствор 0,5 % в серной кислоте концентрированной
0,05 г аммония ванадата растворяют в 10 мл серной кислоты концентрированной.
Аммония гидрокарбонат. NH4HC03. (М.м. 79,06). Содержит не менее 99 %
NH4HC03.
Бесцветные кристаллы или белый кристаллический порошок.
Легко растворим в холодной воде, реагирует в горячей воде, практически нерастворим
в спирте 96 % и ацетоне.
Аммония дигидрофосфат. (NH4)H2P04. (М.м. 115,03). Аммония фосфат одно-
замещенный.
Кристаллический порошок белого цвета или бесцветные кристаллы.
Легко растворим в воде.
рН. Около 4,2 (2,3 % раствор).
(Ш)-(-)-Аммония 10-камфоросульфонат. C10H19NO4S. (М.м. 249,32).
Содержит не менее 97,0 % C10H19NO4S.
Бесцветные кристаллы или белый кристаллический порошок.
Легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96 %.
[ a f . 18 °± 2 °(5 % раствор).
Аммония карбонат. (NH4)2C03 (М.м. 96,09). Аммоний углекислый.
Бесцветные мелкие кристаллы, в массе белого цвета.
тая

Очень легко растворим в воде, реагирует в горячей воде, практически нерастворим
в спирте 96 %
Аммония карбоната раствор 15,8 %. Раствор 158 г/л.
Аммония карбоната раствор 10 %
10 г аммония карбоната растворяют в 30 мл воды, прибавляют 10 мл 10 % раствора
аммиака и доводят объем раствора водой до 100 мл.
Аммония молибдат. (NH4)6Mo7024 ' 4Н20. (М.м. 1235,9). Аммоний молибде-
новокислый.
Бесцветные кристаллы или кристаллы от слегка желтоватого до зеленоватого
цвета.
Растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96 %.
Аммония молибдата раствор 10 %. Раствор 100 г/л.
Аммония молибдата раствор (рН 7,0)
5,0 г аммония молибдата растворяют при нагревании в 30 мл воды, затем охлаждают
и доводят рН до 7,0 раствором аммиака разведенным 3 %, объем полученного
раствора доводят водой до 50 мл.
Аммония молибдата спиртовой сернокислый раствор
Раствор I. 5 г аммония молибдата растворяют при нагревании в 20 мл воды.
Раствор П. Смешивают 150 мл спирта 96 % со 150 мл воды. При охлаждении
прибавляют 100 мл серной кислоты концентрированной.
Непосредственно перед использованием к раствору I прибавляют раствор II в
соотношении 20:80.
Аммония молибдата раствор в ацетоне
1,0 г аммония молибдата растворяют в воде, доводят тем же растворителем до
объема 40 мл, прибавляют 3 мл 25 % хлористоводородной кислоты и доводят
объем раствора ацетоном до 100 мл.
Хранят в защищенном от света месте.
Срок годности - 1 мес.
Аммония молибдата раствор в 15 % серной кислоте
1,0 г аммония молибдата растворяют в 40,0 мл 15 % (об/об) раствора серной кислоты
концентрированной.
Срок годности - 1 сут.
Аммония молибдата реактив. Последовательно смешивают по 1 объему 2,5 %
раствора аммония молибдата, 10 % раствора аскорбиновой кислоты и 29,45 %
раствора серной кислоты, затем прибавляют 2 объема воды.
Хранят во флаконах оранжевого стекла. Срок годности - 1 сут.
Аммония молибдата раствор в серной кислоте концентрированной (реактив
Фреде)
0,1 г аммония молибдата растворяют в 100 мл серной кислоты концентрированной.
Хранят в банках оранжевого стекла. Срок годности - 6 мес.
Аммония молибдата раствор в азотной кислоте
Растворяют 6,5 г мелкораздробленной молибденовой кислоты в смеси 14 мл
воды и 14,5 мл аммиака раствора концентрированного. Раствор охлаждают и постепенно
при перемешивании прибавляют к смеси 32 мл охлажденного раствора
ЕЕЕГ

азотной кислоты концентрированной и 40 мл воды и оставляют на 40 ч, затем раствор
фильтруют через плотный фильтр. Если при хранении раствора выделится
осадок, его отделяют декантацией.
Аммония нитрат. NH4N03. (М.м. 80,04).
Кристаллический порошок белого цвета или бесцветные кристаллы; гигроскопичен.
Очень легко растворим в воде, легко растворим в метаноле, растворим в
спирте 96 %.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Аммония оксалат. (COONH4)2 - H20. (М.м. 142,12). Аммоний щавелевокислый.
Бесцветные кристаллы. Растворим в воде.
Аммония оксалата раствор 4 %. Раствор 40 г/л.
Аммония персульфат. (NH4)2S208. (М.м. 228,20). Аммоний надсернокислый.
Белый кристаллический порошок. Легко растворим в воде.
Аммония персульфата раствор 20 %
20 г аммония персульфата растворяют в воде и доводят объем раствора водой
до 100,0 мл. Раствор должен быть свежеприготовленным.
Аммония пирролидиндитиокарбамат. C5H12N2S2. (М.м. 164,29). Аммония
1 -пирролидинилдитиоформат.
Кристаллический порошок от белого до светло-желтого цвета.
Умеренно растворим в воде, очень мало растворим в спирте 96 %.
Хранят в контейнере, содержащем небольшое количество аммония карбоната в
полотняном мешочке.
Аммоний пурпурнокислый. C8H8N606 • Н20. (М.м. 302,20). Мурексид. Аммониевая
соль 5,5'-нитрилодибарбитуровой кислоты, моногидрат.
Мелкокристаллический порошок пурпурно-красного или красно-коричневого
цвета с характерным зеленоватым металлическим блеском.
Мало растворим в воде.
При рН > 11,0 раствор мурексида имеет фиолетовую окраску, а его комплекс с
ионом кальция в тех же условиях оранжевого цвета.
Переход окраски при прямом титровании ионов кальция от оранжевой к фиолетовой.
Индикаторная смесь. 0,25 г индикатора и 25 г натрия хлорида растирают в
ступке и перемешивают.
Аммония рейнекат. NH4[Cr(NCS)4(NH3)2] ¦ Н20. (М.м. 354,44). Аммония тет-
ратиоцианатодиамин хромат(Ш), моногидрат.
Порошок или кристаллы красного цвета.
Умеренно растворим в холодной воде, растворим в горячей воде и спирте 96 %.
В водном растворе разлагается с выделением свободного цианистого водорода
(осторожно!).
Аммония рейнеката раствор 1 %. Раствор 10 г/л.
Готовят непосредственно перед использованием.
Аммоний роданистый. Аммония роданид. См. Аммония тиоцианат.
рта

Аммония роданида раствор 5 %
5 г аммония роданида (аммония тиоцианата) растворяют в воде и доводят объем
раствора.
Аммония сульфамат. NH2S03NH4. (М.м. 114,12). Аммоний сульфаминовокис-
лый. Аммония сульфаминат.
Кристаллический порошок белого цвета или бесцветные кристаллы: гигроскопичен.
Очень легко растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. Около 130 °С.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Аммония сульфат. (NH4 )2S04. (М.м. 132,14). Аммоний сернокислый.
Бесцветные кристаллы или гранулы белого цвета.
Очень легко растворим в воде, практически нерастворим в ацетоне и спирте 96 %.
рН. От 4,5 до 6,0 (5 % раствор).
Сульфатная зола. Не более 0,1 %.
Аммония тиоцианат. NH4 SCN. (М.м. 76,12). Аммония роданид.
Бесцветные кристаллы, расплывающиеся на воздухе.
Очень легко растворим в воде, растворим в спирте 96 %.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Аммония тиоцианата раствор 7,6 %. Раствор 76 г/л.
Аммония формиат. CH5N02. (М.м. 63,06).
Расплывающиеся кристаллы или гранулы.
Очень легко растворим в воде, растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. От 119 до 121 °С.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Аммония фосфат. (NH4)2HP04. (М.м. 132,06). Диаммония гидрофосфат.
Кристаллы или гранулы белого цвета: гигроскопичен.
Очень легко растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96 %.
рН. Около 8 (20 % раствор).
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Аммония хлорид. NH4C1. (М.м. 53,49). Аммоний хлористый.
Белый кристаллический порошок.
Легко растворим в воде, растворим в спирте 96 %.
Аммония хлорида раствор 10,7 %. Раствор 107 г/л.
Аммония хлорида раствор 10 %
10 г аммония хлорида растворяют в воде и доводят объем раствора водой
до 100,0 мл.
Аммония церия(1У) нитрат. (NH4)2Ce(N03)6. (М.м. 548,2).
Кристаллический порошок оранжево-желтого цвета или прозрачные кристаллы
оранжевого цвета.
Растворим в воде.
Аммония церия(1У) сульфат. (NH4)4Ce(S04)4 • 2Н20. (М.м. 632,6).

Кристаллический порошок или кристаллы оранжевого-желтого цвета.
Медленно растворим в воде.
Аммония цитрат. C6H14N207. (М.м. 226,19). Диаммония гидроцитрат.

Аммоний лимоннокислый двузамещенныи. Аммония цитрат двузамещен-
ный.
Кристаллический порошок белого цвета или бесцветные кристаллы.
Легко растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %.
рН. Около 4,3 (2,26 % раствор).
Ангидрид уксусный. См. Уксусный ангидрид.
Ангидрида уксусного раствор 12 % (об/об) в безводном пиридине
12 мл уксусного ангидрида смешивают с 88 мл безводного пиридина.
Хранят в банках оранжевого стекла с притертыми пробками.
Ангидрид фталевый. См. Фталевый ангидрид.
Анетол. С10Н12О. (М.м. 148,20). 1-Метокси-4-(проп-1-ил)бензол.
Кристаллическая масса белого цвета при температуре до 20-21 °С, при температуре
выше 23 °С - жидкость.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в этаноле, эфире, этилаце-
тате и петролейном эфире.
dio . Около 1,56.
Температура кипения. Около 230 °С.
Хроматографическая чистота анетола, используемого в газовой хроматографии,
должна быть не менее 99,0 %.
^ис-Анетол. С10Н12О. (М.м. 148,20). (2)-1-Метокси-4-(пропенил-1)-бензол.
Кристаллическая масса белого цвета при температуре до 20-21 °С, при температуре
выше 23 °С - жидкость.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в этаноле, растворим в эфире,
этилацетате и петролейном эфире.
25
nD . Около 1,56.
Температура кипения. Около 230 °С.
Хроматографическая чистота i/wc-анетола, используемого в газовой хроматографии,
должна быть не менее 92,0 %.
и-Анизидин. C7H9NO. (М.м. 123,15). 4-Метоксианилин.
Содержит не менее 97,0 % C7H9NO.
Кристаллы белого цвета.
Умеренно растворим в воде, растворим в этаноле.
Вызывает раздражение кожи; сенсибилизатор.
Хранят в защищенном от света месте при температуре от 0 до 4 °С.
При хранении гс-анизидин темнеет вследствие окисления. Окисленный
й-анизидин может быть восстановлен и обесцвечен следующим образом:
20 г и-анизидина растворяют в 500 мл воды при температуре 75 °С, прибавляют
1 г натрия сульфита и 10 г угля активированного, перемешивают в течение
5 мин и фильтруют. Полученный фильтрат охлаждают и отстаивают
при температуре около 0 °С не менее 4 ч, затем фильтруют, полученные кристаллы
промывают небольшим количеством воды, охлажденной до температуры
0 °С, и сушат в вакууме над фосфора(У) оксидом.
Анилин. C6H5NH2. (М.м. 93,13). Бензоламин.
Бесцветная или желтоватого цвета жидкость.
Растворим в воде, смешивается со спиртом 96 % и эфиром.

dv, . Около 1,02.
Температура кипения. От 183 до 186 °С.
Хранят в защищенном от света месте.
Анионообменная смола
Смола в хлоридной форме, содержащая четвертичные аммониев
[CH2N+ (CH3)3], присоединенные к полимерной решетке, состоящей6 ГРУПЛы
стирола поперечно-сшитого 2 % дивинилбензола. Выпускают в виде m Поли"
мер которых должен быть указан в частных статьях. ' раз~
Смолу промывают на стеклянном фильтре (40) 1 М раствором натрия г
сида до отрицательной реакции на хлориды в промывном растворе, затем
мывают водой до получения нейтральной реакции в промывной во
Суспендируют в свежеприготовленной воде, свободной от аммиака, и защищают
от углерода диоксида.
Анионообменная смола сильноосновная
Гелеобразная смола в ОН-форме, содержащая четвертичные аммониевые группы
[CH2N+ (CH3)3, тип I], присоединенные к полимерной решетке, состоящей из
полистирола поперечно-сшитого 8 % дивинилбензола.
Прозрачные гранулы коричневого цвета.
Размер частиц: от 0,2 до 1,0 мм.
Содержание влаги. Около 50 %.
Статическая обменная емкость (СОЕ). Не менее 1,2 мэкв/мл.
Анионообменная смола сильноосновная для хроматографии
Смола с четвертичными аммониевыми группами, присоединенными к решетке
латекса поперечно-сшитого дивинилбензолом.
Анисовый альдегид. С8Н802. (М.м. 136,14). 4-Метоксибензальдегид.
Маслянистая жидкость.
Очень мало растворим в воде, смешивается со спиртом 96 % и эфиром.
Температура кипения. Около 248 °С.
Хроматографическая чистота анисового альдегида, используемого в газовой хроматографии,
должна быть не менее 99,0 %.
Анисового альдегида раствор уксуснокислый в метаноле
Последовательно смешивают 0,5 мл анисового альдегида, 10 мл уксусной кислоты
ледяной, 85 мл метанола и 5 мл серной кислоты концентрированной.
Анисового альдегида раствор спиртовый сернокислый
10 мл анисового альдегида смешивают с 90 мл спирта 96 %, прибавляют
10 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают.
Анолит для изоэлектрофокусировки рН от 3 до 5 (0,1 М раствор кислоты глу-
таминовой и 0,5 М раствор кислоты фосфорной)
К раствору 14,71 г глутаминовой кислоты в воде, прибавляют 33 мл фосфорной
кислоты концентрированной и доводят объем раствора водой до 1000 мл.
Антимонила калия тартрат. C4H4K07Sb • 0,5 Н20. (М.м. 333,93). Калия
аква[тартрато(4-)-0' ,02,03]-антимониат(Ш), полугидрат.
Гранулированный порошок белого цвета или прозрачные, бесцветные кристаллы.
Растворим в воде и глицерине, легко растворим в кипящей воде, практически

нерастворим в спирте 96 %.
Водный раствор имеет слабокислую реакцию.
Антрацен. С14Н10. (М.м. 178,22).
Кристаллический порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде, мало растворим в хлороформе.
Температура плавления. Около 218 °С.
Антрон. С14Н10О. (М.м. 194,24). 9-(ЮН)-Антраценон.
Кристаллический порошок светло-желтого цвета.
Нерастворим в воде, растворим в спирте 96 %, растворим в бензоле.
Температура плавления. Около 155 °С.
Арабиноза. С5Н10О5. (М.м. 150,13). Ь-(+)-Арабиноза.
Кристаллический порошок белого цвета.
Легко растворима в воде.
[#]„ . От +103 до +105 ° (5 % раствор в воде, содержащей около 0,05 % NH3).
Арбутин. Ci2H1607. (М.м. 272,25). Арбутозид. 4-Гидроксифенил-Р-В-глюко-
пиранозид.
Мелкие, блестящие, игольчатые кристаллы белого цвета.
Легко растворим в воде, очень легко растворим в горячей воде, растворим в
спиоте 96 %, практически нерастворим в эфире.
[а]™ . Около -64° (2 % раствор).
Температура плавления. Около 200 °С.
Аргон. Аг. (А.м. 39,95).
Содержит не менее 99,995 % (об/об) Аг.
Аскорбиновая кислота. С^Н806. (М.м. 176,12).
Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы,
изменяют окрашивание под воздействием света и влаги.
Легко растворима в воде, растворима в спирте 96 %, практически нерастворима
в эфире.
Аскорбиновой кислоты раствор 0,1 %
50 мг аскорбиновой кислоты растворяют в 0,5 мл воды и доводят объем раствора
диметилформамидом до 50 мл.
Ь-Аспартил-Ь-фенилаланин. C13H16N205. (М.м. 280,28).
(S)-3-AMHHO-N-[(S)- 1-карбокси-2-фенилэтил]янтарная кислота.
Порошок белого цвета.
Температура плавления. Около 210 °С с разложением.
Ацеталь. С6Н1402. (М.м. 118,17). Ацетальдегида диэтилацеталь. 1,1-Диэтокси-
этан.
Прозрачная, бесцветная, летучая жидкость.
Смешивается с водой и спиртом 96 %.
dZ . Около 0,824.
20
По .Около 1,382.
Температура кипения. Около 103 °С.
Ацетальдегид. СН3СНО. (М.м. 44,05). Этаналь.
Прозрачная, бесцветная, воспламеняющаяся жидкость. Смешивается с водой и
спиртом 96 %.

dl . Около 0,788.
nt .Около 1,332.
Температура кипения. Около 21 °С.
Ацетилацетамид. C4H7N02. (М.м. 101,11)- 3-Оксобутанамид.
Легко растворим в этаноле и ацетоне.
Температура плавления. От 53 до 56 °С •
Ацетилацетон. СН3СОСН2СОСН3. (М.м. 100,11). 2,4-Пентандион.
Бесцветная или слегка желтоватого цвета, легко воспламеняющаяся жидкость.
Легко растворим в воде, смешивается с ацетоном, спиртом 96 %, эфиром и уксусной
кислотой ледяной.
nl .От 1,452 до 1,453.
Температура кипения. От 138 до 140 °С.
Ацетилацетона реактив
К 100 мл раствора аммония ацетата прибавляют 0,2 мл ацетилацетона.
Ацетилирующая смесь
Смешивают 1 часть уксусного ангидрида и 3 части перегнанного пиридина
(фракция с температурой кипения от 114 до 115 °С). Смесь должна быть бесцветной.
Смесь применяют свежеприготовленной. Обращаться с осторожностью.
N-Ацетил-г-капролактам. C8H13N03- (М.м. 155,19). N-Ацетилгексан-б-
лактам.
Бесцветная жидкость. Смешивается с этанолом.
,20
U 20 . Около 1,100.
20
По . Около 1,489.
Температура кипения. Около 135 °С.
N-Ацетилнеураминовая кислота. CnHi9 N 09- (М.м. 309,27). О-Сиаловая кислота.
Игольчатые кристаллы белого цвета.
Растворима в воде и метаноле, мало растворима в спирте 96 %, практически нерастворима
в ацетоне и эфире.
[а\ . Около -36° (1 % раствор).
Температура плавления. Около 186 °С с разложением.
Ацетилтирозина этиловый эфир. С13Ии N04 H20. (М.м. 269,29).
N-Ацетил-Ь-тирозина этиловый эфир, моногидрат. Этил-(8)-2-ацетамидо-3-(4-
гидроксифенил)пропионат, моногидрат.
Кристаллический порошок белого цвет& пригоден для количественного определения
химотрипсина.
[afd . От +21 до +25° (1 % раствор в сп*фте 96 %).
У4[* . От 60 до 68. Определение проводят" при длине волны 278 нм в спирте 96 %.
Ш1

Ацетилтирозина этилового эфира 0,2 М раствор
0,54 г ацетилтирозина этилового эфира растворяют в спирте 96 % и доводят
объем раствора тем же растворителем до 10,0 мл.
N-Ацетилтриптофан. С13Н14 N203 • Н20. (М.м. 246,26). 2-Ацетил-амино-З-
(индол-З-ил)пропионовая кислота.
Порошок белого или почти белого цвета или бесцветные кристаллы.
Мало растворим в воде, растворим в разведенных растворах гидроксидов щелочных
металлов.
Температура плавления. Около 205 °С.
Ацетилхлорид. СН3СОС1. (М.м. 78,48). Ацетил хлористый.
Прозрачная, бесцветная, воспламеняющаяся жидкость.
Разлагается в воде и спирте 96 %, смешивается с эфиром и бензолом, растворим
в ацетоне, хлороформе и толуоле.
Обращаться с осторожностью.
Около 1,10.
Температурные пределы перегонки. От 49 до 53 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
Ацетилхолина хлорид. C7H16C1N02. (М.м. 181,66).
Кристаллический порошок.
Очень легко растворим в холодной воде и спирте 96 %, практически нерастворим
в эфире; разлагается в горячей воде и растворах щелочей.
Хранят при температуре -20 °С.
Ацетилэвгенол. С12Н1403. (М.м. 206,23). 2-Метокси-4-(2-пропенил)фенил-
ацетат.
Маслянистая жидкость желтого цвета.
Легко растворим в спирте 96 % и эфире, практически нерастворим
в воде.
20
По .Около 1,521.
Температура кипения. От 281 до 282 °С.
Хроматографическая чистота ацетилэвгенола, используемого в газовой хроматографии,
должна быть не менее 98,0 %.
Ацетон. СН3СОСН3. (М.м. 58,08). Пропан-2-он.
Бесцветная, прозрачная, легко воспламеняющаяся жидкость с характерным запахом.
Температура кипения. 56,24 °С.
Растворим в хлороформе, смешивается с водой, 96 % спиртом и эфиром.
При необходимости используют ацетон особой чистоты.
Обращаться с осторожностью.
Ацетон безводный
Ацетон сушат над безводным сульфатом натрия в течение 12 ч.
Ацетонитрил. CH3CN. (М.м. 41,05). Метилцианид. Этаннитрил.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Смешивается с водой, ацетоном, эфиром и метанолом.
1*20 . Около 0,78.
таая

n„ . Около 1,344.
Раствор 100 г/л ацетонитрила имеет нейтральную реакцию по лакмусовой бумаге.
Температурные пределы перегонки. От 80 до 82 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
Ацетонитрил, используемый для спектрофотометрии, должен выдерживать следующее
дополнительное испытание.
Минимальное пропускание. 98 %. Определение проводят в области длин
волн от 255 до 420 нм, используя в качестве раствора сравнения жидкости
воду.
Ацетонитрил для хроматографии
Ацетонитрил, используемый в хроматографии, должен выдерживать следующее
дополнительное испытание.
Минимальное пропускание. 98 %. Определение проводят при длине волны
240 нм, используя в качестве раствора сравнения воду.
Минимальная чистота. 99,8 %.
Барбитуровая кислота. C4H4N2O3. (М.м. 128,1). 1Н,ЗН,5Н-Пиримидин-2,4,6-
трион.
Бария гидроксид. Ва(ОН)2 • 8Н20. (М.м. 315,48). Бария гидроокись, октаги-
драт.
Белые или бесцветные кристаллы.
Растворим в воде. Ядовит.
Бария гидроксида раствор 4,73 %. Раствор 47,3 г/л.
Бария гидроксида раствор 5 %. Баритовая вода
5 г бария гидроксида взбалтывают со 100 мл свежепрокипяченной и охлажденной
воды. Раствор применяют свежеприготовленным. Ядовит.
Бария карбонат. ВаС03. (М.м. 197,35). Барий углекислый.
Порошок белого цвета или рассыпчатая масса.
Практически нерастворим в воде, спирте 96 %, растворим в аммония хлориде.
Бария нитрат. Ba(N03)2- (М.м. 261,35). Барий азотнокислый.
Бесцветные кристаллы. Растворим в холодной воде; легко растворим в горячей
воде. Ядовит.
Бария нитрата раствор 5 %. 5 г бария нитрата растворяют в воде и доводят
объем раствора водой до 100 мл. Раствор фильтруют. Ядовит.
Бария сульфат. BaS04. (М.м. 233,40). Барий сернокислый.
Белый порошок.
Практически нерастворим в воде.
Бария хлорид. ВаС12 • 2Н20. (М.м. 244,28). Бария дихлорид. Барий хлористый.
Бесцветные прозрачные кристаллы.
Легко растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %. Ядовит.
Бария хлорида раствор 6,1 %. Раствор 61 г/л.
Бария хлорида раствор 3,65 %. Раствор 36,5 г/л.
Бария хлорида раствор 5 %
5 г бария хлорида растворяют в воде и доводят объем раствора водой до 100 мл.
Раствор фильтруют. Ядовит.
ЕШ

Бензальдегид. С6Н5СНО. (М.м. 106,13).
Бесцветная или слегка желтоватого цвета жидкость, сильно преломляющая свет,
с запахом горького миндаля.
Мало растворим в воде, смешивается со спиртом 96 % и эфиром.
dZ . Около 1,05.
20 п" . Около 1,545.
Температурные пределы перегонки. От 177 до 180 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
Хранят в защищенном от света месте.
Бензальдегида раствор насыщенный
1 мл бензальдегида взбалтывают в склянке с 250 мл воды. Смесь оставляют до
следующего дня, время от времени взбалтывая. Перед применением сливают
прозрачную жидкость.
Раствор применяют свежеприготовленным.
Бензидин. NH2C6H4C6H4NH2. (М.м. 184,24).
Белые или слегка желтоватые мелкоигольчатые кристаллы.
Практически нерастворим в воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
Обращаться с осторожностью.
Бензил. С14Н10О2. (М.м. 210,2). Дифенилэтандион.
Кристаллический порошок желтоватого цвета.
Нерастворим в воде, растворим в спирте 96 %, этилацетате и толуоле.
Температура плавления. 95 °С.
Бензилбензоат. С14Н1202. (М.м. 212,24).
Бесцветные или почти бесцветные кристаллы или бесцветная или почти бесцветная
маслянистая жидкость.
Практически нерастворим в воде, смешивается со спиртом 96 %, эфиром, мети-
ленхлоридом, с жирными и эфирными маслами.
Бензилкоричный эфир. С16Н1402 . (М.м. 238,27). Бензил-З-фенилпроп-2-еноат.
Бензилциннамат.
Бесцветные или желтоватого цвета кристаллы.
Практически нерастворим в воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 39 °С.
Бензиловый спирт. С6Н5СН2ОН. (М.м. 108,13).
Прозрачная, бесцветная, холодящая, маслянистая жидкость.
Растворим в воде; смешивается со спиртом 96 %, эфиром, жирными и эфирными
маслами.
2-Бензилпиридин. C12HnN. (М.м. 169,22).
Содержит не менее 98,0 % C^H^N.
Жидкость желтого цвета.
Температура плавления. От 13 до 16 °С.
Бензоиларгинина этилового эфира гидрохлорид. C15H23C1N403.
(М.м. 342,83). N-Бензоил-Ь-аргинин этилового эфира гидрохлорид. Этил(8)-2-
бензамидо-5-гуанидиновалерата гидрохлорид.
Кристаллический порошок белого цвета.
16. Эак. 2768 ЕЛ

Очень легко растворим в воде и этаноле, практически нерастворим в эфире.
Г Iм
L«L . От -15 до -18 °(1 % раствор).
Температура плавления. Около 129 °С.
Aic« . От 310 до 340. Определение проводят при длине волны 227 нм, используя
0,001 % раствор.
Бензоилхлорид. С6Н5СОС1. (М.м. 140,57).
Бесцветная, слезоточивая жидкость.
Растворим в эфире, разлагается в воде и спирте 96 %.
Обращаться с осторожностью.
dZ ¦ Около 1,21.
Температура кипения. Около 197 °С.
Бензоин. С6Н5СНОНСОС6Н5. (М.м. 212,25). 2-Гидрокси-1,2-дифенилэтанон.
Кристаллы слегка желтоватого цвета.
Очень мало растворим в воде, легко растворим в ацетоне, растворим в горячем
спирте 96 %, умеренно растворим в эфире.
Температура плавления. Около 137 °С.
Бензойная кислота. С6Н5СООН. (М.м. 122,12).
Бесцветные игольчатые кристаллы или белый мелкокристаллический порошок.
Мало растворима в воде, легко растворима в спирте 96 % и растворима в хлороформе
и бензоле.
Температура плавления. От 121 до 124 °С
Бензол. С6Н6. (М.м. 78,12).
Прозрачная, бесцветная, воспламеняющаяся жидкость.
Практически нерастворим в воде, смешивается со спиртом 96 % и эфиром.
Температура кипения. Около 80 °С.
Бензофенон. (С6Н5)2СО. (М.м. 182,22). Дифенилметанон.
Кристаллы в виде призм.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в спирте 96 % и эфире, растворим
в хлороформе.
Температура плавления. Около 48 °С.
1,4-Бензохинон. С6Н402. (М.м. 108,10). и-Хинон, и-Бензохинон. Циклогекса-
2,5-диен-1,4-дион.
Желтоватые призмы или кристаллический порошок.
Очень мало растворим в воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
Бензэтония хлорид. C27H42CINO2 • Н20- (М.м. 466,1). Бензилдиметил-[2-[2-
[4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)фенокси]этокси]-этил]-аммония хлорид, моногидрат.
Мелкокристаллический порошок белого цвета или бесцветные кристаллы.
Растворим в воде и спирте 96 %, мало растворим в эфире.
Температура плавления. Около 163 °С.
Хранят в защищенном от света месте.
Е2ЭГ

Бергаптен. С12Н804. (М.м. 216,18). 5-Метоксипсорален.
Бесцветные кристаллы.
Практически нерастворим в воде, умеренно растворим в спирте 96 % и мало растворим
в уксусной кислоте ледяной.
Температура плавления. Около 188 °С.
Бертолетова соль. См. Калия хлорат.
Бисбензимид. C25H27C13N60 • 5 Н20. (М.м. 624). 4-[5-[5-(4-Метилпиперазин-
1 -ил)бензимидазол-2-ил] бензимидазол-2-ил] фенола тригидрохлорид, пентаги-
драт.
Бисбензимида исходный раствор 0,005 %
5 мг бисбензимида растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем
до 100 мл.
Хранят в темном месте.
Бисбензимида рабочий раствор
Непосредственно перед использованием 100 мкл исходного раствора бисбензимида
доводят фосфатным забуференным физиологическим раствором рН 7,4
до объема 100 мл.
Биурет. C2H5N302. (М.м. 103,09).
Кристаллы белого цвета; гигроскопичны.
Растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96 %, очень мало растворим в
эфире.
Температура плавления. От 188 до 190 °С с разложением.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Биуретовый реактив
1,5 г меди(И) сульфата и 6,0 г калия-натрия тартрата растворяют в 500 мл
воды, прибавляют 300 мл 10 % раствора натрия гидроксида, свободного от
карбонатов, доводят объем раствора тем же растворителем до 1000 мл и перемешивают.
Бифенил-4-ол. С12Н10О2. (М.м. 170,20). 4-Фенилфенол.
Кристаллический порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде.
Температура плавления. От 164 до 167 °С с разложением.
Бора фторид. BF3. (М.м. 67,81). Бора трифторид.
Бесцветный газ.
Бора фторид в метаноле 14 %. Раствор 140 г/л в метаноле.
Бора хлорид. ВС13. (М.м. 117,18). Бора трихлорид.
Бесцветный газ. Бурно реагирует с водой. Используют в виде растворов в
подходящих растворителях (2-хлорэтанол, метиленхлорид, гексан, гептан,
метанол).
Токсичен, вызывает коррозию.
Температура кипения. Около 12,6 °С.
По . Около 1,420.
Бора хлорида раствор в метаноле 12 %. Раствор 120 г/л в метаноле.
Хранят в защищенном от света месте при температуре -20 °С, преимущественно
в ампулах.
ЕШ

Борная кислота. Н3В03. (М.м. 61,83).
Бесцветные, блестящие, слегка жирные на ощупь чешуйки или мелкий кристаллический
порошок.
Легко растворима в горячей воде (100 °С), глицерине; растворима в спирте
96 %, очень мало растворима в ацетоне.
Борной кислоты раствор 4 %
4 г борной кислоты растворяют в воде при нагревании, охлаждают и доводят
водой до 100 мл.
Борной кислоты 0,6 М раствор
37,098 г борной кислоты растворяют при нагревании в 250-300 мл воды, разбавляют
водой до объема 1000,0 мл.
Борной кислоты 0,2 М раствор
12.366 г борной кислоты растворяют при нагревании в 100-150 мл воды, разбавляют
водой до объема 1000,0 мл.
Борнеол. С10Н18О. (М.м. 154,24). Эндо-1,7,7-Триметилбицикло[2.2.1]-гептан-
2-ол.
Бесцветные кристаллы. Легко сублимируется.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в спирте 96 %, эфире и пе-
тролейном эфире.
Температура плавления. Около 208 °С.
Хроматография. Определение проводят методом тонкослойной хроматографии,
используя в качестве тонкого слоя силикагель G. На линию старта хроматогра-
фической пластинки наносят 10 мкл 0,1 % раствора в толуоле. Хроматографи-
руют в хлороформе. Когда фронт растворителя пройдет 10 см от линии старта,
пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе и опрыскивают раствором
анисового альдегида, расходуя 10 мл на пластинку площадью 200 мм2, сушат
при температуре от 100 до 105 °С в течение 10 мин. На хроматограмме должно
обнаруживаться только одно основное пятно.
Борнилацетат. С12Н2о02. (М.м. 196,28). Эндо-1,7,7-Триметилбицикло[2.2.1]-
гепт-2-ил ацетат.
Бесцветные кристаллы или бесцветная жидкость.
Очень мало растворим в воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 28 °С.
Хроматография. Определение проводят методом тонкослойной хроматографии,
используя в качестве тонкого слоя силикагель G. На линию старта хроматогра-
фической пластинки наносят 10 мкл 0,2 % раствора в толуоле. Хроматографи-
руют в хлороформе. Когда фронт растворителя пройдет 10 см, пластику
вынимают из камеры, сушат на воздухе и опрыскивают раствором анисового
альдегида, расходуя 10 мл на пластинку площадью 200 мм2, сушат при температуре
от 100 до 105 °С в течение 10 мин. На хроматограмме должно обнаруживаться
только одно основное пятно.
Бриллиантовый синий. См. Кислотный синий 83.
Бром. Вг2. (М.м. 159,82).
Красно-бурая легко летучая жидкость с удушливым запахом.
Мало растворим в воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
tm

Обращаться с осторожностью.
Брома раствор
30 г брома и 30 г калия бромида растворяют в воде и доводят объем раствора тем
же растворителем до 100 мл.
Бромная вода
3 мл брома встряхивают со 100 мл воды до насыщения.
Хранят над избытком брома в банке оранжевого стекла с притертой пробкой, в
прохладном защищенном от света месте.
Брома раствор спиртовый
В коническую колбу емкостью 250 мл помещают 90 мл спирта 96 %, при перемешивании
и охлаждении колбы снаружи льдом осторожно, постепенно прибавляют
10 мл отмеренного цилиндром брома.
Хранят в банке оранжевого стекла, закрытой притертой пробкой, в темном, прохладном
месте.
5-Бром-2'-деоксиуридин. СрНцВг^С^. (М.м. 307,11). 5-Бром-1-(2-деокси-|3-
D-эритро-пентофуранозил)-1 Н,ЗН-пиримидин-2,4-дион.
Температура плавления. Около 194 °С.
Бромистоводородной кислоты 30 % раствор
30 % раствор бромистого водорода в уксусной кислоте ледяной.
Перед вскрытием содержимое осторожно дегазируют.
Бромистоводородная кислота разведенная
5,0 мл 30 % раствора бромистоводородной кислоты помещают во флаконы
из темного стекла, укупоривают в атмосфере аргона полиэтиленовыми пробками
и хранят в защищенном от света месте. Непосредственно перед использованием
прибавляют 5,0 мл уксусной кислоты ледяной и
перемешивают.
Хранят в темном месте.
Бромистоводородной кислоты 47 % раствор
Раствор 47 % (м/м) бромистого водорода в воде.
Бромистоводородная кислота разведенная 0,79 %. Содержит 7,9 г/л НВг.
16,81 г 47 % раствора бромистоводородной кислоты растворяют в воде и доводят
объем раствора тем же растворителем до 1000 мл.
Бромкрезоловый зеленый (синий). C2iH14Br405S. (М.м. 698).
3',3",5',5"-Тетрабром-ти-крезолсульфофталеин. 4,4'-(ЗН-2,1-Бензокса-тиол-3-
илиден)-бис[2,6-дибром-3-метилфенол]-8,8-диоксид.
Порошок белого с коричневатым оттенком цвета.
Мало растворим в воде, растворим в спирте 96 % и разведенных растворах ги-
дроксидов щелочных металлов.
Бромкрезолового зеленого раствор 0,05 %
50 мг бромкрезолового зеленого растворяют в 0,72 мл 0,1 М раствора натрия ги-
дроксида и 20 мл 96 % спирта, доводят объем раствора водой до 100 мл.
Испытание на чувствительность. К 100 мл воды, свободной от углерода диоксида,
прибавляют 0,2 мл раствора бромкрезолового зеленого; появляется синее
окрашивание, которое переходит в желтое при прибавлении не более 0,2 мл
0,02 М раствора хлористоводородной кислоты.
гта

Переход окраски от желтой до синей в интервале рН 3,6-5 2
Бромкрезолового зеленого (синего) раствор 0,04 %
0,1 г индикатора растворяют в 7,15 мл 0,02 М раствора натра
водят объем раствора свежепрокипяченной и охлажл ДКОГо и До-
до250мл. Денной ВОдой
Переход окраски раствора от желтой к синей в интервале рН 3 8-5 4
Бромкрезолового зеленого (синего) раствор 0,1 %
0,1 г индикатора растворяют в 50 мл спирта 96 % и доводят объем п
водой до 100 мл. Ра
Переход окраски раствора от желтой к синей в интервале рН 3,8-5 4
Бромкрезолового зеленого и метилового красного раствор
0,15 г бромкрезолового зеленого и 0,1 г метилового красного растворяют
180 мл этанола и доводят объем раствора водой до 200 мл.
Бромкрезоловый зеленый (синий) водорастворимый. C21H17Br4NO S
(М.м. 715,0). Аммонийная соль 3',3",5',5"-тетрабром-л*-крезолсульфофталеина
Порошок черного цвета. Легко растворим в воде.
Переход окраски раствора от желтой к синей в интервале рН 3,8-5,4.
Раствор индикатора. 0,04 % раствор.
Бромкрезоловый пурпурный. C21H16Br205S. (М.м. 540,2) 3,3"-Дибром-
о-крезолсульфофталеин. 4,4'-(ЗН-2,1-Бензоксатиол-3-илиден)-бис-(2-бром-6-
метилфенол)-8,8-диоксид.
Порошок розоватого цвета.
Практически нерастворим в воде, растворим в спирте 96 % и разведенных растворах
гидроксидов щелочных металлов.
Бромкрезолового пурпурного раствор 0,05 %
50 г бромкрезолового пурпурного растворяют в 0,92 мл 0,1 М раствора натрия
гидроксида и 20 мл спирта 96 %, доводят объем раствора водой до 100 мл.
Испытание на чувствительность. К 100 мл воды, свободной от углерода диоксида,
прибавляют 0,2 мл раствора бромкрезолового пурпурного и 0,05 мл 0,02 М
раствора натрия гидроксида; появляется синевато-фиолетовое окрашивание, которое
переходит в желтое при прибавлении не более 0,2 мл
0,02 М раствора хлористоводородной кислоты.
Переход окраски от желтой до синевато-фиолетовой в интервале рН 5,2-6,8.
Бромкрезоловый пурпурный раствор 0,1 %
0,1 г индикатора растворяют в 50 мл спирта 96 % при нагревании на водяной
бане и после охлаждения доводят объем раствора водой до 100 мл.
Переход окраски раствора от желтой к пурпурной в интервале рН 5,2-6,8.
Бромкрезоловый пурпурный 0,04 %
0,1 г индикатора растворяют в 9,25 мл 0,02 М раствора натра едкого и доводят
объем раствора свежепрокипяченной и охлажденной водой до 250 мл.
Переход окраски раствора от желтой к пурпурной в интервале рН 5,2-6,8.
Бромкрезоловый пурпурный водорастворимый. C2iH19Br2N05S. (М.м.
557,3). Аммонийная соль 5',5"-дибром-о-крезолсульфофталеина.
Мелкокристаллический порошок темно-красного или темно-коричневого цвета.
Легко растворим в воде.
ЕДЯТ

Переход окраски раствора от желтой к пурпурной в интервале рН 5,2-6,8.
Раствор индикатора. 0,04 % раствор.
Бромтимоловый синий. C27H28Br205S (М.м. 624,4). 3',3"-Дибромтимол-
сульфофталеин. 4,4'-(ЗН-2,1 -Бензоксатиол-3-илиден)-бис-(2-бром-6-изоприл-
3-метилфенол)-8,8-диоксид.
Порошок от красновато-розового до коричневатого цвета.
Практически нерастворим в воде, растворим в спирте 96 % и разведенных растворах
гидроксидов щелочных металлов.
Бромтимолового синего раствор 0,04 %
0,1 г бромтимолового синего растворяют в 8 мл 0,02 М раствора натрия ги-
дроксида и доводят объем раствора водой до 250 мл.
Переход окраски раствора от желтой к синей в интервале рН 6,0-7,6.
Бромтимолового синего раствор 0,05 %
50 мг бромтимолового синего растворяют в смеси 4 мл 0,02 М раствора натрия
гидроксида и 20 мл спирта 96 %, доводят объем раствора водой
до 100 мл.
Испытание на чувствительность. К 100 мл воды, свободной от углерода диоксида,
прибавляют 0,3 мл раствора бромтимолового синего; появляется желтое
окрашивание, которое переходит в синее при прибавлении не более 0,1 мл
0,02 М раствора натрия гидроксида.
Переход окраски от желтой к синей в интервале рН 5,8-7,4.
Бромтимолового синего раствор 1 % в диметилформамиде. Раствор 10 г/л в
диметилформамиде.
Бромтимолового синего раствор 0,04 % спиртовый
К 0,1 г бромтимолового синего прибавляют 3,2 мл 0,05 М раствора натрия гидроксида
и 5 мл спирта 90 %, нагревают до растворения, полученный раствор охлаждают
и доводят спиртом 90 % до объема 250 мл.
Бромтимоловый синий раствор 0,1 % спиртовый
0,1 г индикатора растворяют в 50 мл спирта 96 % при нагревании на водяной
бане и после охлаждения доводят водой до объема 100 мл.
Переход окраски от желтой к синей в интервале рН 6,0-7,6.
Бромтимоловый синий водорастворимый. C27H3iBr2N05S. (М.м. 641,4). Аммонийная
соль 3',3"-дибромтимолсульфофталеина.
Мелкокристаллический порошок от темно-коричневого до черного цвета. Растворим
в воде.
Переход окраски раствора от желтой к синей в интервале рН 6,0-7,6.
Раствор индикатора. 0,04 % раствор.
BRP-индикатора раствор
0,1 г бромтимолового синего, 20 мг метилового красного и 0,2 г фенолфталеина
растворяют в 96 % спирте, доводят объем раствора тем же растворителем до
100 мл и фильтруют.
Бромфеноловый синий. C19H10Br4O5S. (М.м. 670,0). 3',3",5',5"-Тетрабром-
фенолсульфофталеин. 4,4'-(ЗН-2,1-Бензоксатиол-3-илиден)-бис-(2,6-дибром-
фенол)-8,8-диоксид.
Порошок светлого оранжево-желтого цвета.
- __ _ g.|

Очень мало растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %, легко растворим
в растворах гидроксидов щелочных металлов.
Бромфенолового синего раствор 0,1 %
0,1 г бромфенолового синего растворяют в смеси 1,5 мл 0,1 М раствора натрия
гидроксида и 20 мл 96 % спирта, доводят объем раствора водой
до 100 мл.
Испытание на чувствительность. К 20 мл воды, свободной от углерода
диоксида, прибавляют 0,05 мл раствора бромфенолового синего и 0,05 мл
0,1 М раствора хлористоводородной кислоты; появляется желтое окрашивание,
которое переходит в синевато-фиолетовое при прибавлении не более
0,1 М раствора натрия гидроксида.
Переход окраски от желтой до синевато-фиолетовой в интервале рН 2,8-4,4.
Бромфенилового синего раствор 0,05 %
50 мг бромфенилового синего растворяют при осторожном нагревании в 3,73 мл
0,02 М раствора натрия гидроксида и доводят водой до объема 100 мл.
Бромфенолового синего раствор 0,2 % спиртовый
0,2 г бромфенолового синего растворяют при нагревании в 3 мл 0,1 М раствора
натрия гидроксида и 10 мл спирта 96 %, полученный раствор охлаждают и доводят
спиртом 96 % до объема 100 мл.
Бромфеноловый синий водорастворимый. C19H13Br4N05S (М.м. 687,0). Аммонийная
соль 3,3',3",5',5"-тетрабромфенолсульфофталеина.
Мелкокристаллический порошок черного цвета.
Легко растворим в воде.
Переход окраски раствора от желтой к синей в интервале рН 3,0-4,6.
Раствор индикатора. 0,04 % раствор.
Бруцин. C23H26N204 • 2Н20. (М.м. 430,5). 10,11-Диметоксистрихнин.
Бесцветные кристаллы.
Мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 178 °С.
Бура. См. Натрия тетраборат.
Буры раствор. См. Натрия тетрабората раствор.
Бутановая кислота. См. Масляная кислота.
Бутанол. СН3СН2СН2СН2ОН. (М.м. 74,12). н-Бутанол. 1-Бутанол.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Растворим в воде, смешивается со спиртом 96 %, эфиром.
d*> . Около 0,81.
Температура кипения. От 116 до 119 °С.
2-Бутанол. СН3СН2СН(ОН)СН3. (М.м. 74,12). emop-Бутиловый спирт.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Легко растворим в воде, смешивается со спиртом 96 % и эфиром.
dZ .Около 0,81.
Температурные пределы перегонки. От 99 до 100 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
2-Бутанон. См. Метилэтилкетон.
ED

Бутиламин. C4HUN. (М.м. 73,14). 1-Бутанамин.
Бесцветная жидкость. Смешивается с водой, спиртом и 96 % эфиром.
По .Около 1,401.
Температура кипения. Около 78 °С.
Перегоняют и используют в течение 1 мес.
/яретя-Бутиламин. См. 1,1-диметилэтиламин.
Бутилацетат (1). С6Н]202. (М.м. 116,16).
Прозрачная, бесцветная, воспламеняющаяся жидкость.
Мало растворим в воде, смешивается со спиртом 96 % и эфиром.
dl . Около 0,88.
20
nD . Около 1,395.
Температурные пределы перегонки. От 123 до 126 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
Бутилацетат (2)
Прозрачная, бесцветная, воспламеняющаяся жидкость.
Мало растворим в воде, смешивается с 96 % спиртом и эфиром.
dm . Около 0,883.
20
п., . Около 1,395.
Бутанол. Не более 0,2 %. Определение проводят методом газовой хроматографии.
н-Бутилформиат. Не более 0,1 %. Определение проводят методом газовой хроматографии.
н-Бутилпропионат. Не более 0,1 %. Определение проводят методом газовой хроматографии.
Вода. Не более 0,1 %.
Количественное определение. Не менее 99,5 % С6Н1202. Определение проводят
методом газовой хроматографии.
Бутилборная кислота. С4НпВ02. (М.м. 101,94).
Содержит не менее 98 % С4НпВ02.
Температура плавления. От 90 до 92 °С.
/яре/я-Бутилгидроксипероксид. С4Н10О2. (М.м. 90,12).
1,1 -Диметилэтилгидроксипероксид.
Воспламеняющаяся жидкость.
Растворим в органических растворителях.
dl . Около 0,898.
По- Около 1,401.
Температура кипения. 35 °С.
Бутилгидрокситолуол. С15Н240. (М.м. 220,34). я-Бутилгидрокситолуол.
Белый или желтовато-белый кристаллический порошок.
Практически нерастворим в воде, очень легко растворим в ацетоне и эфире,
легко растворим в спирте 96 % и растительных маслах.
Ифе/и-Бутилметиловый эфир. См. 1,1-Диметилэтилметиловый эфир.
ЕЕ

Бутилпарагидроксибензоат. С6Н4ОНСООС4Н9. (М.м. 152,14). Бутил-w-
гидроксибензоат. Бутиловый эфир парагидроксибензойной кислоты.
Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.
Очень мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. От 68 до 71 °С.
тре/и-Бутиловый спирт. См. 2-Метил-2-пропанол.
Бутиролактон. С4Н602. (М.м. 86,09). Дигидро-2(ЗН)-фуранон. х-Бутиролактон.
Маслянистая жидкость.
Смешивается с водой, растворим в метаноле, эфире, ацетоне, бензоле и четы-
реххлористом углероде.
По . Около 1,435.
Температура кипения. Около 204 °С.
Буферные рабочие и образцовые растворы для электрофореза. См. Натрия
додецилсульфат.
Вазелин
Полужидкая смесь углеводородов, полученная из нефти и обесцвеченная. Практически
нерастворим в воде и спирте 96 %, растворим в эфире и петролейном
эфире; раствор иногда обнаруживает слабую опалесценцию.
Вазелиновое масло
Бесцветная, прозрачная, маслянистая жидкость, без флуоресценции при дневном
освещении.
Практически нерастворимо в воде, умеренно растворимо в спирте 96 %, смешивается
с углеводородами.
Валериановая кислота. С5Н10О2. (М.м. 102,13). Пентановая кислота.
Бесцветная жидкость.
Растворима в воде, легко растворима в спирте 96 % и эфире.
7 20
(Л 20 . Около 0,94.
20
По .Около 1,409.
Температура кипения. Около 186 °С.
Ванадия(У) оксид. V205. (М.м. 181,88).
Ванадиевый ангидрид. Диванадия пентоксид.
Содержит не менее 98,5 % V205.
Порошок от желто-коричневого до оранжевато-коричневого цвета.
Мало растворим в воде, растворим в концентрированных минеральных кислотах
и растворах гидроксидов щелочных металлов с образованием солей.
Ванилин. С6Н3(ОН)(ОСН3)СНО. (М.м. 152,15).
Белые или слабо-желтоватые иглы с запахом ванили, темнеющие на воздухе.
Очень мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 %, эфире и хлороформе.
Температура плавления. От 81 до 83 °С.
Ванилина реактив
К 100 мл 1 % раствора ванилина в спирте 96 % осторожно по каплям прибавляют
2 мл серной кислоты концентрированной.
Срок годности - 2 сут.
шг

Ванилина раствор в фосфорной кислоте
1,0 г ванилина растворяют в 25 мл спирта 96 %, прибавляют 25 мл воды и
35 мл фосфорной кислоты концентрированной.
Ванилина раствор в серной кислоте
0,1 г ванилина растворяют в 10 мл серной кислоты концентрированной.
Раствор применяют свежеприготовленным.
Ванилина раствор в хлористоводородной кислоте
0,2 г ванилина растворяют в 10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной.
Раствор применяют свежеприготовленным.
Винилацетат. С4Н602. (М.м. 86,09).
Бесцветная жидкость.
Умеренно растворима в воде: смешивается с этанолом и эфиром.
dl . Около 0,930.
Температура кипения. Около 72 °С.
2-Винилпиридин. C7H7N. (М.м. 105,14).
Жидкость желтого цвета. Смешивается с водой.
И 20 . Около 0,97.
20
nD .Около 1,549.
1-Винилпирролидин-2-он. C6H9NO. (М.м. 111,14).
Содержит не менее 99,0 % C6H9NO.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Вода. Не более 0,1 % (полумикрометод).
Определение проводят из 2,5 г, используя в качестве растворителя смесь
50 мл метанола безводного и 10 мл бутиролактона.
Количественное определение. Проводят методом газовой хроматографии.
Хроматографирование проводят на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным
детектором в следующих условиях:
- колонка кварцевая капиллярная размером 30 м х 0,5 мм, покрытая слоем макрогола
20 000 толщиной 1,0 мкм;
- газ-носитель гелий для хроматографии;
- температура блока ввода пробы 190 °С;
- температуру колонки программируют следующим образом: выдерживают температуру
80 °С в течение 1 мин, затем повышают до 190 °С со скоростью 10 °С
в мин и выдерживают температуру 190 °С в течение 15 мин.
Хроматографируют 0,3 мкл испытуемого вещества, регулируя скорость потока
газа-носителя таким образом, чтобы время удерживания пика, соответствующего
1-винилпирролидин-2-ону, составляло около 17 мин. Содержание C6H9NO
определяют методом внутренней нормализации.
Винилполимер октадецилсилильный для хроматографии
Сферические частицы (5 мкм) сополимера винилового спирта, связанного окта-
децилсиланом.
Содержит 17 % углерода.
ЕШ

Винилхлорнд. С2Н3С1. (М.м. 62,50).
Бесцветный газ.
Мало растворим в органических растворителях.
Винная кислота. С4Н606. (М.м. 150,09). Виннокаменная кислота.
Бесцветные кристаллы.
Легко растворима в воде, спирте 96 %, растворима в ацетоне, мало растворима
в эфире.
Винной кислоты раствор 20 %
2 г винной кислоты растворяют в 10 мл воды. Раствор применяют свежеприготовленным.
Висмута нитрат. Bi(N03)3 ' 5H20. (М.м. 485,1). Висмут(Ш) азотнокислый
5-водный.
Прозрачные, бесцветные кристаллы в массе белого цвета. Реагирует с водой.
Легко растворим в азотной кислоте.
Висмута нитрат основной. [4BiN03(OH)2BiO(OH)]. (М.м. 1462).
Содержит не менее 71,5 % и не более 74,0 % висмута; не менее 14,5 % и не более
16,5 % нитрата, в пересчете на азота(У) оксид (N2Os).
Порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде.
Висмута нитрата основного раствор
5 г висмута нитрата основного растворяют в смеси 8,4 мл азотной кислоты концентрированной
и 50 мл воды, доводят объем раствора водой до 250 мл и, если
необходимо, фильтруют.
Кислотность. К 10 мл висмута нитрата основного раствора прибавляют
0,05 мл 0,1 спиртового раствора метилового оранжевого; окраска раствора
должна измениться при прибавлении от 5,0 мл до 6,25 мл 1 М раствора натрия
гидроксида.
Вода. См. ФС Вода очищенная.
Вода, свободная от аммиака
К 100 мл воды прибавляют 0,1 мл серной кислоты концентрированной, перегоняют,
используя прибор для определения температурных пределов перегонки,
отбрасывают первые 10 мл и собирают следующие 50 мл.
Вода, свободная от нитратов
К 100 мл воды прибавляют несколько миллиграммов калия перманганата и
бария гидроксида; перегоняют, используя прибор для определения температурных
пределов перегонки, отбрасывают первые 10 мл и собирают следующие
50 мл.
Вода, свободная от углерода диоксида
Воду кипятят в течение нескольких минут, охлаждают.
Хранят, защищая от атмосферного воздействия.
Вода, свободная от частиц
Воду фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм.
Вода дистиллированная
Вода, полученная путем перегонки.
Вода для инъекций. См. ФС Вода для инъекций.
ш

Вода для хроматографии
Деионизированная вода, имеющая сопротивление не менее 0,18 МОм • м.
Водород для хроматографии. Н2. (М.м. 2,016).
Содержит не менее 99,95 % (об/об) Н2.
Водорода пероксид. Н202. (М.м. 34.01). Пергидроль. Водорода пероксида раствор
концентрированный.
Содержание перекиси водорода в реактиве «х.ч.» - не менее 30 и не более
35 %; «ч.д.а.» - не менее 29 и не более 32 %; «ч.» - не менее 29 %.
Бесцветная, прозрачная жидкость без запаха или со слабым своеобразным запахом,
слабокислой реакции, легко разлагающаяся с выделением кислорода.
Водорода пероксида раствор разведенный. Раствор перекиси водорода.
10 г пергидроля растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят
объем раствора водой до метки.
Восстанавливающая смесь
Для получения однородной смеси последовательно смешивают предварительно
измельченные реактивы: 20 мг калия бромида, 0,5 г гидразина сульфата и 5 г натрия
хлорида.
Галактоза. С6Н1206. (М.м. 180,16). Б-(+)-Галактоза.
Кристаллический порошок белого цвета. Легко растворима в воде.
iah . От +79° до +81° (10 % раствор в воде, содержащей около 0,05 % NH3).
Галловая кислота. С7Н605 • Н20. (М.м. 188,13). 3,4,5-Тригидроксибензойная
кислота, моногидрат.
Кристаллический порошок или длинные игольчатые кристаллы, бесцветные или
слегка желтоватого цвета.
Растворима в воде, легко растворима в горячей воде, спирте 96 % и глицерине,
мало растворима в эфире.
Галловая кислота теряет кристаллизационную воду при температуре 120 °С и
плавится при температуре около 260 °С с разложением.
Гарпагозид. С24НзоОп. (М.м. 494,5).
Кристаллический порошок белого цвета, очень гигроскопичен.
Растворим в воде и спирте 96 %.
Температура плавления. От 117 до 121 °С.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Гвайазулен. С15Н18. (М.м. 198,29). 1,4-Диметил-7-изопропилазулен.
Кристаллы темно-синего цвета или жидкость синего цвета.
Очень мало растворим в воде, смешивается с жирными и эфирными маслами и
вазелиновым маслом, умеренно растворим в спирте 96 %, растворим в 50 % растворе
серной кислоты и 80 % (м/м) фосфорной кислоте с образованием бесцветного
раствора.
Температура плавления. Около 30 °С.
Хранят в защищенном от света и воздуха месте.
Гваяковая смола
Смола, полученная из сердцевины дерева Guaiacum officinale L. и Guaiacum
sanctum L.
Твердые, гладкие фрагменты красновато-коричневого цвета или зеленовато-

коричневого цвета, блестят на изломе. При нагревании размягчается.
Нерастворим в воде.
Гексадиметрина бромид. (C13H3oBr2N2)n. 1,5-Диметил-1,5-диазаундека-
метилен полиметобромид. Поли( 1,1,5,5-тетраметил-1,5-азония-ундекаметилен
дибромид).
Аморфный порошок белого цвета, гигроскопичен.
Растворим в воде.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Гексакозан. С26Н54. (М.м. 366,70).
Бесцветные или белого цвета хлопья.
Практически нерастворим в воде, растворим в этаноле и эфире.
Температура плавления. Около 57 °С.
Гексаметилдисилазан. C6H]9NSi2. (М.м. 161,40).
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Около 0,78.
20
По . Около 1,408.
Температура кипения. Около 125 °С.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Гексаметилентетрамин. C6H12N4. (М.м. 140,20). Гексамин. 1,3,5,7-Тетра-
азатрицикло[3.3.1.13,7]декан.
Бесцветный кристаллический порошок.
Очень легко растворим в воде.
Гексан. С6Н14. (М.м. 86,18).
Бесцветная, воспламеняющаяся жидкость.
Практически нерастворим в воде, смешивается с этанолом и эфиром.
dl . От 0,659 до 0,663.
20
По .От 1,375 до 1,376.
Температурные пределы перегонки. От 67 до 69 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
Гексан, используемый в спектрофотометрии, должен выдерживать следующее
дополнительное испытание.
Минимальное пропускание: 97 %. Определение проводят в области длин волн от
260 до 420 нм, используя в качестве раствора сравнения воду.
Гексиламин. C6H15N. (М.м. 101,19). Гексанамин.
Бесцветная жидкость.
Мало растворим в воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
,20
иго . Около 0,766.
20
Пи .Около 1,418.
Температура кипения. От 127 до 131 °С.
Гелий для хроматографии. Не. (А.м. 4,003).
Содержит не менее 99,995 % (об/об) Не.
Гептан. С7Н16. (М.м. 100,20).
Бесцветная, воспламеняющаяся жидкость.
Ш1

Растворим в хлороформе, практически нерастворим в воде, смешивается с этанолом
и эфиром.
dl . От 0,683 до 0,686.
По .От 1,387 до 1,388.
Температурные пределы перегонки. От 97 до 98 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
Гераниола ацетат. С12Н2о02. (М.м. 196,28). (Е)-3,7-Диметилокта-2,6-диен-1-ил
ацетат.
Бесцветная или слабо-желтого цвета жидкость, со слабым запахом розы и лаванды.
Очень мало растворим в воде, легко растворим в этаноле; смешивается с эфиром.
dl ¦ От 0,896 до 0,913.
Пп . Около 1,463.
Температура кипения. Около 138 °С.
Хроматографическая чистота гераниола ацетата, используемого в газовой хроматографии,
должна быть не менее 99,0 %.
Гидразина гидрохлорид. NH2NH2 • 2НС1. (М.м. 104,96). Гидразин солянокислый.
Белый кристаллический порошок.
Очень легко растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %. Ядовит.
Гидразина сульфат. NH2 NH2 • H2S04. (М.м. 130,12). Гидразин сернокислый.
Бесцветные кристаллы.
Умеренно растворим в холодной воде, растворим в горячей воде (50 °С) и
легко растворим в кипящей воде, практически нерастворим в спирте 96 %.
4-Гидроксибензойная кислота. С6Н4(ОН)СООН. (М.м. 138,13). Парагидрок-
сибензойная кислота. и-Гидроксибензойная кислота.
Кристаллический порошок.
Очень мало растворима в воде, очень легко растворима в спирте 96 %, растворима
в ацетоне и эфире.
Температура плавления. От 214 до 215 °С.
4-Гидроксиизофталевая кислота. НОС6Н3 (СООН)2. (М.м. 182,14). 4-Гидрок-
сибензол-1,3-дикарбоновая кислота.
Игольчатые или в виде пластинок кристаллы.
Очень мало растворима в воде, легко растворима в спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 314 °С с разложением.
Гидроксиламина гидрохлорид. NH4C10. (М.м. 69,49).
Кристаллический порошок белого цвета.
Очень легко растворим в воде, растворим в спирте 96 %.
Гидроксиламина гидрохлорида раствор (1 М)
6,95 г гидроксиламина гидрохлорида растворяют в 50 мл воды в мерной колбе
вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки.
Гидроксиламина гидрохлорида раствор спиртовый (0,5 М)
3,48 г гидроксиламина гидрохлорида растворяют в 95 мл спирта 60 % (об/об),
прибавляют 0,5 мл 0,2 % раствора метилового оранжевого в спирте 60 % (об/об)

и достаточное количество 0,5 М раствора калия гидроксида в спирте 60 % (об/об)
до получения четкого желтого окрашивания, доводят спиртом 60 % (об/об) до
объема 100 мл.
Гидроксиламина щелочной раствор 7 %
Непосредственно перед использованием смешивают равные объемы 14 %
раствора гидроксиламина гидрохлорида и 15 % раствора натрия гидроксида.
Гидроксиламина щелочной раствор 5 %. 10 % раствор гидроксиламина гидрохлорида
смешивают с 10 % раствором натрия гидроксида в соотношении 1:2
(по объему).
Гидроксиламина раствор щелочной в метаноле
Раствор А. 12,5 г гидроксиламина гидрохлорида растворяют в метаноле и доводят
объем раствора тем же растворителем до 100 мл.
Раствор Б. 12,5 г натрия гидроксида растворяют в метаноле и доводят объем раствора
тем же растворителем до 100 мл.
Непосредственно перед использованием смешивают равные объемы растворов
А и Б.
Гидроксиламина гидрохлорида раствор 5 %
2,5 г гидроксиламина гидрохлорида растворяют в 4,5 мл горячей воды, прибавляют
40 мл спирта 96 %, 0,4 мл 0,2 % раствора бромфенолового синего
и достаточное количество 0,5 М раствора калия гидроксида спиртового до
зеленовато-желтого окрашивания, доводят объем раствора спиртом 96 % до
50,0 мл.
Гидроксиламина сульфат. Гидроксиламин сернокислый. (NH2OH)2 Н280ф
(М.м. 164,14).
Бесцветные кристаллы.
Легко растворим в воде, растворим в эфире, нерастворим в спирте 96 %.
Гидроксиметилфурфурол. С6Н6Оэ. (М.м. 126,11). 5-Гидроксиметилфурфурол.
Игольчатые кристаллы.
Легко растворим в воде, ацетоне и спирте 96 %, растворим в эфире.
Температура плавления. Около 32 °С.
Гидроксинафтолового синего натриевая соль. C2oH11N2Na301jS3. (М.м.
620,5). Тринатрия 2,2'-дигидрокси-1,1 '-азонафталин-3',4,6'-трисульфонат.
12-Гидроксистеариновая кислота. С18Н3603. (М.м. 300,47). 12-Гидрокси-
октадекановая кислота.
Порошок белого цвета.
Практически нерастворима в воде, растворима в этаноле, хлороформе и эфире.
Температура плавления. От 71 до 74 °С.
5-Гидроксиурацил. C4H4N203. (М.м. 128,09). Изобарбитуровая кислота. Пири-
мидин-2,4,5-триол.
Кристаллический порошок белого цвета.
Температура плавления. Около 310 °С с разложением.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Гидроксихинолин. C9H7NO. (М.м. 145,16). 8-Гидроксихинолин. Хинолин-8-ол.
Ш

Кристаллический порошок белого или желтоватого цвета.
Мало растворим в воде, легко растворим в ацетоне, спирте 96 % и разведенных
минеральных кислотах.
Температура плавления. Около 75 °С.
Сульфатная зола. Не более 0,05 %.
Гидрохинон. С6Н4(ОН)2. (М.м. 110,11). Бензол-1,4-диол.
Бесцветные или белого цвета, игольчатые, мелкие кристаллы, темнеющие под
действием воздуха и света.
Растворим в воде, спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 173 °С.
Хранят в защищенном от света и воздуха месте.
Гиперозид. C2iH2o012. (М.м. 464,4). 2-(3,4-Дигидроксифенил)-3-(3-Б-галакто-
пиранозилокси-5,7-дигидроксихромен-4-он.
Игольчатые кристаллы светло-желтого цвета.
Растворим в метаноле.
-.20
[a\d. -8,3 ° (0,2 % раствор в пиридине).
Температура плавления. Около 240 °С с разложением.
Гипоксантин. C5H4N40. (М.м. 136,12). 1Н-Пурин-6-он.
Кристаллический порошок белого цвета.
Очень мало растворим в воде, умеренно растворим в кипящей воде, растворим
в разведенных кислотах и разведенных растворах гидроксидов щелочных металлов.
Разлагается, не плавясь, при температуре около 150 °С.
Гипофосфита реактив (реактив Тиле).
10 г натрия гипофосфита растворяют при слабом нагревании в 20 мл воды
и доводят объем раствора хлористоводородной кислотой концентрированной
до 100 мл, отстаивают и декантируют или фильтруют через стекловату.
Гипс. См. Кальция сульфат.
Гистидина гидрохлорид моногидрат. C6H10ClN3O2 • Н20. (М.м. 209,64). (RS)-
2-Амино-3-(имидазол-4-ил)пропионовой кислоты гидрохлорид, моногидрат.
Бесцветные кристаллы или кристаллический порошок.
Растворим в воде.
Температура плавления. Около 250 °С с разложением.
Гликокол. См. Аминоуксусная кислота.
Гликолевая кислота. С2Н403. (М.м. 76,05). 2-Гидроксиуксусная кислота.
Бесцветные кристаллы.
Растворима в воде, ацетоне, спирте 96 %, эфире и метаноле.
Температура плавления. Около 80 °С.
Глиоксальгидроксианил. C14H12N202. (М.м. 240,26). Глиоксальбис(2-гидро-
ксианил).
Кристаллы белого цвета.
Растворим в горячем спирте 96 %.
Температура плавления. Около 200 °С.
17.3ак.2768
ша

Глиоксаля раствор 40 %. Содержит около 40 % (м/м) глиоксаля.
Количественное определение. 1,000 г раствора глиоксаля помещают в колбу с
притертой стеклянной пробкой, прибавляют 20 мл 7 % раствора гидроксил-
амина гидрохлорида и 50 мл воды, выдерживают в течение 30 мин и титруют
1 М раствором натрия гидроксида до перехода окраски от красной к зеленой, используя
в качестве индикатора 1 мл смешанного раствора метилового красного.
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 1 М раствора натрия гидроксида соответствует 29,02 мг глиоксаля (С2Н202).
Глицерин. СН2ОНСНОНСН2ОН (М.м. 92,10).
Содержит не менее 98,0 % и не более 101,0 % пропан-1,2,3-триола в расчете на
безводную субстанцию.
Бесцветная, прозрачная, густая жидкость; гигроскопична.
Смешивается с водой, спиртом 96 %, мало растворим в ацетоне, нерастворим в
эфире.
Глицерин 85 %. Водный раствор, содержащий не менее 83,5 % (в/в) и не более
88,5 % (в/в) пропан-1,2,3-триола.
Сиропообразная жидкость, бесцветная или почти бесцветная, прозрачная, очень
гигроскопичная.
Смешивается с водой и спиртом 96 %, мало растворим в ацетоне, практически
нерастворим в эфире, жирных и эфирных маслах.
Глицин. См. Аминоуксусная кислота.
Глицирретиновая кислота. С30Н46О4. (М.м. 470,7). 12,13-Дидегидро-Зр-
гидрокси-11-оксоолеан-30-овая кислота.
Смесь а- и Р-глицирретиновых кислот, в которой преобладает Р-изомер.
Порошок от белого до желтовато-коричневатого цвета.
Практически нерастворима в воде, растворима в этаноле и уксусной кислоте ледяной.
[а. ¦ От +145 до +155 ° (1 % раствор в этаноле).
Хроматография. Определение проводят методом тонкослойной хроматографии,
используя в качестве тонкого слоя силикагель GF254, суспензию которого
готовят, используя раствор 0,25 % (об/об) фосфорной кислоты. На
хроматографическую пластинку наносят 5 мкл 0,5 % раствора глицирретино-
вой кислоты в смеси равных объемов хлороформа и метанола. Хроматогра-
фируют в смеси растворителей метанол - хлороформ (5:95). Когда фронт
растворителей пройдет 10 см, хроматограмму просматривают в УФ-свете при
длине волны 254 нм. На хроматограмме должно обнаруживаться темное пятно
(Rf около 0,3), соответствующее Р-глицирретиновой кислоте, и меньшее пятно
(Rf около 0,5), соответствующее а-глицирретиновой кислоте. Пластинку
опрыскивают раствором анисового альдегида и нагревают при температуре
от 100 до 105 °С в течение 10 мин. Оба пятна должны быть окрашены в синевато-
фиолетовый цвет; между ними допускается наличие меньшего пятна
синевато-фиолетового цвета.
Глутаминовая кислота. C5H9N04. (М.м. 147,13).
Содержит от 98,5 до 100,5 % С5Н9 N04 в пересчете на сухое вещество.
шз

Белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.
Легко растворима в кипящей воде, мало растворима в холодной воде; практически
нерастворима в спирте 96 %, эфире и ацетоне.
Глутаровый альдегид. С5Н802. (М.м. 100,11).
Маслянистая жидкость. Растворим в воде.
По . Около 1,434.
Температура кипения. Около 188 °С.
Глюкоза безводная. С6Н1206. (М.м. 180,16). В-(+)-глюкопираноза.
Белый кристаллический порошок сладкого вкуса.
Легко растворима в воде, умеренно растворима в спирте 96 %.
Глюкоза. С6Н1206 • Н20. (М.м. 198,17). Б-(+)-Глюкопираноза, моногидрат.
Белый кристаллический порошок со сладким вкусом.
Легко растворима в воде, умеренно растворима в спирте 96 %.
Глюкозамина гидрохлорид. C6H14C1N05. (М.м. 215,62). D-Глюкозамина гидрохлорид.
Кристаллы.
Растворим в воде, практически нерастворим в эфире.
[af ¦ +Ю0 °, снижающееся до +47,5 ° через 30 мин (10 % раствор).
D-Глюкуроновая кислота. С6Н10О7. (М.м. 194,1).
Содержит не менее 96,0 % С6Н10О7 , в пересчете на сухое вещество, высушенное
в вакууме.
Растворима в воде и спирте 96 %.
Обнаруживаетмутаротацию: [а]° +11,7° —> +36,3°.
Количественное определение. 0,150 г D-глюкуроновой кислоты растворяют при
перемешивании в метаноле безводном и титруют 0,1 М раствором тетрабути-
ламмония гидроксида потенциометрически, защищая раствор от воздействия
углерода диоксида воздуха во время растворения и титрования.
1 мл 0,1 М раствора тетрабутиламмония гидроксида соответствует 19,41 мг
С6Н10°7 •
Гольмия(Ш) оксид. Но203. (М.м. 377,86). Дигольмия триоксид.
Порошок желтоватого цвета.
Практически нерастворим в воде.
Гольмия перхлората раствор 4 %. Раствор 40 г/л гольмия(Ш) оксида в 14,1 %
растворе (НСЮ4) хлорной кислоты.
Гуанидина гидрохлорид. CH5N3 HC1. (М.м. 95,5).
Кристаллический порошок.
Легко растворим в воде и спирте 96 %.
Гуанин. C5H5N50. (М.м. 151,14). 2-Амино-1,7-дигидро-6Н-пурин-6-он.
Аморфный порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте 96 %, растворим в растворах
аммиака и разведенных растворах гидроксидов щелочных металлов.
Дантрон. С14Н804. (М.м. 240,20). 1,8-Дигидроксиантрахин-9(10Н)-он.
Кристаллический порошок оранжевого цвета.
Мало растворим в воде, растворим в этаноле, хлороформе и эфире.
Температура плавления. Около 195 °С.
ЕШ

Дейтерия оксид. 2Н20. (М.м. 20,03). Вода дейтерированная.
Степень дейтерирования - не менее 99,7 %.
U 20 . Около 1,11.
20
По . Около 1,328.
Температура кипения. Около 101 °С.
Дейтерированная уксусная кислота. С2
2Н402. (М.м. 64,08).
Тетрадейтероуксусная кислота. Уксусная-с1з кислота-d.
Степень дейтерирования - не менее 99,7 %.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Легко смешивается с водой, спиртом 96 % и эфиром.
, 20
W20 . Около 1,12.
20
По .Около 1,368.
Температура кипения. Около 115 °С.
Температура плавления. Около 16 °С.
Дейтерированный ацетон. С3
2Н60. (М.м. 64,13). Ацетон-(16. (2Н6)-Ацетон.
Степень дейтерирования не менее 99,5 %.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Смешивается с водой, диметилформамидом, этанолом, эфиром и метанолом.
«20 . Около 0,87.
20
По .Около 1,357.
Температура кипения. Около 55 °С.
Вода и дейтерия оксид. Не более 0,1 %.
Дейтерированный диметилсульфоксид. C2
2H6OS. (М.м. 84,18).
(2Н6)-Диметилсульфоксид. Диметилсульфоксид-с16.
Степень дейтерирования - не менее 99,8 %.
Вязкая, практически бесцветная, сильно гигроскопичная жидкость.
Растворим в воде, ацетоне, этаноле и эфире.
.20
а20 . Около 1,18.
Температура плавления. Около 20 °С.
Вода и дейтерия оксид. Не более 0,1 %.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Дейтерированный метанол. С2Н40. (М.м. 36,07). (2Н4)-Метанол. Метанол-о^.
Степень дейтерирования - не менее 99,8 %.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Смешивается с водой, спиртом 96 % и метиленхлоридом.
dl . Около 0,888.
20
По .Около 1,326.
Температура кипения: 65,4 °С.
Дейтерированный хлороформ. С2НС13. (М.м. 120,39). (2Н)-Хлороформ. Хло-
роформ-d.
Степень дейтерирования - не менее 99,7 %.
Прозрачная, бесцветная жидкость.
ЕШ

Практически нерастворим в воде, смешивается с ацетоном, спиртом
96 % и эфиром.
Может быть стабилизирован серебряной фольгой.
cfv, . Около 1,51.
20
По . Около 1,445.
Температура кипения. Около 60 °С.
Вода и дейтерия оксид. Не более 0,05 %.
Декан. С10Н22. (М.м. 142,3).
Бесцветная жидкость. Практически нерастворим в воде.
20
ш . Около 1,411.
Температура кипения. Около 174 °С.
Деканол. С10Н22О. (М.м. 158,3). н-Дециловый спирт.
Вязкая жидкость, затвердевающая при температуре 6 °С.
Практически нерастворим в воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
nD . Около 1,436.
Температура кипения. Около 230 °С.
Декстран 2000 синий
Готовят из декстрана, имеющего среднюю молекулярную массу 2 х 106, введением
полициклического хромофора, окрашивающего вещество в синий цвет.
Степень замещения - 0,017. Высушивают при замораживании.
Быстро и полностью растворяется в воде и водных солевых растворах.
0,1 % раствор в фосфатном буферном растворе рН 7 имеет максимум поглощения
при длине волны 280 нм.
Декстран поперечно-сшитый для хроматографии (1)
Гранулы шарообразной формы, пригодны для разделения пептидов и белков
с молекулярными массами от 15 х 102 до 30 х 103. Сухие гранулы имеют диаметр
от 20 до 80 мкм.
Декстран поперечно-сшитый для хроматографии (3)
Гранулы шарообразной формы пригодны для разделения пептидов и белков
с молекулярными массами от 4 х Ю3 до 15 х Ю4. Сухие гранулы имеют диаметр
от 40 до 120 мкм.
Декстроза. См. Глюкоза.
2'-Деоксиуридин. C9H12N205. (М.м. 228,21). 1-(2-Деокси-р-0-эритро-
пентофуранозил)-1Н,ЗН-пиримидин-2,4-дион.
Температура плавления. Около 165 °С.
Диазореактив
5 мл раствора сульфаниловой кислоты (4,5 г сульфаниловой кислоты и 45 мл
хлористоводородной кислоты концентрированной в 500 мл воды) вносят в колбу,
поставленную на лед, прибавляют 2,5 мл 10 % раствора натрия нитрита. Смесь
оставляют на льду в течение 5 мин, затем прибавляют еще 10 мл 10 % раствора
натрия нитрита, взбалтывают, оставляют на льду в течение 5 мин и доводят
объем раствора водой до 100 мл.
Хранят на льду. Применяют свежеприготовленным, сохраняя на льду.
Диазотированный сульфацил. 7 г сульфацил-натрия растворяют в 50 мл воды,
прибавляют 9 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят
ЕЯ

объем раствора водой до 100 мл. 1 мл полученного раствора помещают в колбу,
поставленную на лед, прибавляют 50 мл воды, 0,2 мл 10 % раствора натрия нитрита,
перемешивают и доводят объем раствора водой до 100 мл.
Раствор применяют свежеприготовленным.
3,3'-Диаминобензидинатетрагидрохлорид. C12H18C14N4 2H20. (М.м. 396,16).
3,3 ',4,4'-Дифенилтетрамин.
Порошок почти белого или слегка розового цвета.
Растворим в воде.
Температура плавления. Около 280 °С с разложением.
Диатомит
Мелкий гранулированный порошок белого или почти белого цвета, полученный
из кремнистых оболочек окаменевших диатомовых водорослей или их осколков.
Практически нерастворим в воде, спирте 96 % и эфире.
Идентифицируют с помощью микроскопа при увеличении х500.
Диатомит для газовой хроматографии
Мелкий гранулированный порошок белого или почти белого цвета, полученный
из кремнистых оболочек окаменевших диатомовых водорослей или их осколков.
Практически нерастворим в воде, спирте 96 % и эфире.
Идентифицируют с помощью микроскопа при увеличении х500; очищают обработкой
хлористоводородной кислотой концентрированной и промыванием
водой.
Размер частиц. Не более 5 % должно оставаться на сите № 180 и не более
10 % должно проходить через сито № 125.
Диатомит для газовой хроматографии (1)
Мелкий гранулированный порошок белого или почти белого цвета, полученный
из кремнистых оболочек окаменевших диатомовых водорослей или их осколков.
Практически нерастворим в воде, спирте 96 % и эфире.
Идентифицируют с помощью микроскопа при увеличении х500; очищают обработкой
хлористоводородной кислотой концентрированной и промыванием
водой.
Размер частиц. Не более 5 % должно оставаться на сите № 250 и не более
10 % должно проходить через сито № 180.
Диатомит для газовой хроматографии (2)
Мелкий гранулированный порошок белого или почти белого цвета,
с удельной площадью поверхности около 0,5 м2/г, полученный из кремнистых
оболочек окаменевших диатомовых водорослей или их осколков.
Практически нерастворим в воде, спирте 96 % и эфире.
Идентифицируют с помощью микроскопа при увеличении х500; очищают обработкой
хлористоводородной кислотой концентрированной и промыванием
водой.
Размер частиц. Не более 5 % должно оставаться на сите № 180. Не более
10 % должно проходить через сито № 125.
Диатомит силанизированный для газовой хроматографии
Диатомит для газовой хроматографии, силанизированный диметилдихлорсила-
ном или другими подходящими силанизирующими реагентами.
Ш

Диатомит силанизированный для газовой хроматографии (1)
Получают из измельченного красного огнеупорного кирпича и силанизируют
диметилдихлорсиланом или другими подходящими силанизирующими реагентами.
Очищают обработкой хлористоводородной кислотой концентрированной
и промыванием водой.
Дибензил. С14Н14- (М.м. 182,25). 1,2-Дифенилэтан.
Кристаллический порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде, очень легко растворим в метиленхлориде,
легко растворим в ацетоне, растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. От 50 до 53 °С.
Дибутиловый эфир. С8Н180. (М.м. 130,22).
Бесцветная, воспламеняющаяся жидкость.
Практически нерастворим в воде, смешивается с этанолом и эфиром.
U 20 . Около 0,77.
20
По .Около 1,399.
Не перегоняют, если дибутиловый эфир не выдерживает испытания на пе-
роксиды.
Пероксиды. 8 мл раствора крахмала с калия йодидом помещают в цилиндр с притертой
стеклянной пробкой, вместимостью 12 мл и диаметром около
1,5 см, полностью заполняют испытуемым эфиром, закрывают пробкой и перемешивают.
Выдерживают в темном месте в течение 30 мин; не должно появляться
окрашивание.
Название и концентрация любого добавленного стабилизатора должны быть указаны
на этикетке.
Дибутилфталат. С6Н2204. (М.м. 278,34). Дибутилбензол-1,2-дикарбоксилат.
Прозрачная, бесцветная или слабо окрашенная маслянистая жидкость.
Очень мало растворим в воде, смешивается с ацетоном, спиртом 96 % и эфиром.
dl .От 1,043 до 1,048.
По- От 1,490 до 1,495.
10,11-Дигидрокарбамазепин. C15H14N20. (М.м. 238,28). 10,11-Дигидро-5Н-
дибензо[6/|азепин-5-карбоксамид.
Температура плавления. От 205 до 210 °С.
1,3-Дигидроксинафталин. С10Н8О2. (М.м. 160,16). Дигидроксинафталин. Нафталин-
1,3-диол.
Кристаллический порошок коричневато-фиолетового цвета.
Легко растворим в воде и спирте 96 %.
Температура плавления. Около 125 °С.
2,7-Дигидроксинафталин. С10Н8О2. (М.м. 160,16). Нафталин-2,7-диол.
Игольчатые кристаллы.
Растворим в воде, спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 190 °С.
2,7-Дигидроксинафталина раствор
10 мг 2,7-дигидроксинафталина растворяют в 100 мл серной кислоты концентрированной
и выдерживают до обесцвечивания.
В Я

Срок годности - 2 сут.
Дигитонин. С56Н92029. (Мм- 1229). Зр-[0-Р-О-Глюкопиранозил-(1—>3)-0-р-
D-галактопиранозил-О—<-2)-(9-[р-В-ксилопиранозил-( 1—>З)] -O-P-D-
галактопиранозил-(1—>4)-0-Р-В-галактопиранозилокси]-(2511)-5а-
спиростан-2а, 15 р-диол.
Кристаллы или кристаллический порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде, умеренно растворим в этаноле, мало растворим
в спирте 96 %, практически нерастворим в эфире.
Дидодецил-3,3'-тиодипропионат. C3oH5804S. (М.м. 514,8).
Кристаллический порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в ацетоне и петролеином
эфире, мало растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. Около 39 °С.
Диизобутилкетон. С9Н180. (М.м. 141,23).
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Мало растворим в воде, смешивается с большинством органических растворителей.
20
По . Около 1,414.
Температура кипения. Около 168 °С.
Диизопропиловый эфир. С6Н140. (М.м. 102,17).
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Очень мало растворим в воде, смешивается со спиртом 96 % и эфиром.
dl . От 0,723 до 0,728.
Температура кипения. От 67 до 69 °С .
Не перегоняют, если диизопропиловый эфир не выдерживает испытания на пе-
роксиды.
Пероксиды. 8 мл раствора крахмала с калия йодидом помещают в цилиндр с притертой
стеклянной пробкой вместимостью 12 мл и диаметром около 1,5 см, полностью
заполняют испытуемым эфиром, закрывают пробкой и перемешивают.
Выдерживают в темном месте в течение 30 мин. Не должно появляться окрашивание.
Название и концентрация любого добавленного стабилизатора должны быть указаны
на этикетке.
Хранят в защищенном от света месте.
Дикалия гидрофосфат. К2НР04. (М.м. 174,18).
Кристаллический порошок белого цвета, гигроскопичен.
Очень легко растворим в воде, мало растворим в спирте 96 %.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Дикарбоксидина гидрохлорид. C2oH26ClN206. (М.м. 461,3). 4,4'-[4,4'-Диами-
нодифенил-3,3'-Диил)диокси]дибутановой кислоты дигидрохлорид.
Диметикон
Представляет собой поли-(диметилсилоксан), получаемый при гидролизе и поликонденсации
дихлордиметилсилана и хлортриметилсилана; степень полимеризации
(п = 20-400) обеспечивает кинематическую вязкость от 20 mm2 * s"1.
Прозрачная, бесцветная жидкость с различной вязкостью.
ЕЭ

Практически нерастворим в воде, очень мало растворим до практически нерастворим
в этаноле; смешивается с этилацетатом, метилэтилкетоном, толуолом.
Диметиламинобензальдегид. C9HHNO. (М.м. 149,19). 4-Диметиламино-
бензальдегид. «-Диметиламинобензальдегид.
Кристаллы белого или желтовато-белого цвета.
Растворим в спирте 96 % и разведенных кислотах.
Температура плавления. Около 74 °С.
Диметиламинобензальдегида спиртовый раствор
0,2 г диметиламинобензальдегида растворяют в 20 мл спирта 96 %, прибавляют
0,5 мл 25 % хлористоводородной кислоты, полученный раствор
встряхивают с углем активированным и фильтруют. Окраска раствора не
должна быть интенсивнее окраски 0,00025 М раствора йода.
Готовят непосредственно перед использованием.
Диметиламинобензальдегида раствор 2 %
0,2 г диметиламинобензальдегида растворяют без нагревания в смеси 4,5 мл
воды и 5,5 мл хлористоводородной кислоты концентрированной.
Готовят непосредственно перед использованием.
Диметиламинобензальдегида раствор (реактив Олпорта)
0,125 г диметиламинобензальдегида растворяют в охлажденной смеси 35 мл
воды и 65 мл серной кислоты концентрированной, прибавляют 0,1 мл раствора
железа(Ш) хлорида.
Перед использованием выдерживают 24 ч в защищенном от света месте.
Хранят при комнатной температуре 7 сут.; в холодильнике - в течение нескольких
месяцев.
Диметиламинобензальдегида спиртовый раствор в хлористоводородной
кислоте
1,0 г диметиламинобензальдегида растворяют в 50 мл 25 % хлористоводородной
кислоты и прибавляют 50 мл спирта 96 %.
Хранят в защищенном от света месте. Срок годности - 1 мес.
Диметиламинобензальдегида раствор в смеси фосфорной и уксусной кислот
0,25 г диметиламинобензальдегида растворяют в смеси 5 г 85 % фосфорной кислоты,
45 г воды и 50 г уксусной кислоты безводной.
Готовят непосредственно перед использованием.
«-Диметиламинобензальдегида раствор в концентрированной серной кислоте.
1 г диметиламинобензальдегида смачивают 4 каплями воды и прибавляют
3 мл серной кислоты концентрированной.
4-Диметиламинокоричный альдегид. CnH13NO. (М.м. 175,22).
3-(4-Диметиламинофенил)проп-2-еналь. 4-Диметиламиноциннамальдегид.
Кристаллы или порошок от оранжевого до оранжево-коричневого цвета. Чувствителен
к свету.
Очень мало растворим в воде, мало растворим в этаноле и эфире.
Температура плавления. Около 138 °С.
4-Диметиламинокоричного альдегида раствор
2 г 4-диметиламинокоричного альдегида растворяют в смеси 100 мл 25 %
ИЗ

хлористоводородной кислоты и 100 мл этанола. Хранят в прохладном месте.
Непосредственно перед использованием раствор разводят этанолом в
4 раза. Хранят в прохладном месте.
Диметиламинонафталинсульфонилхлорид. C^H^CINC^S. (М.м. 269,74).
5-Диметиламино-1 -нафталинсульфонилхлорид.
Кристаллический порошок желтого цвета.
Мало растворим в воде, растворим в метаноле.
Температура плавления. Около 70 °С.
Хранят в прохладном месте.
Диметиланилин. C6H5N(CH3)2. (М.м. 121,19). г^-Диметиланилин.
Прозрачная, маслянистая жидкость. Свежеперегнанный - почти бесцветный,
при хранении темнеет до красновато-коричневого цвета.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в спирте 96 % и эфире.
По .Около 1,558.
Температурные пределы перегонки. От 192 до 194 °С; должно перегоняться не
менее 95 %.
2,6-Диметиланилин. C6H5N(CH3)2. (М.м. 121,19). 2,6-Ксилидин.
Бесцветная жидкость.
Умеренно растворим в воде, растворим в спирте 96 %.
d20 . Около 0,98.
2,3-Диметиланилин. C6H5N(CH3)2. (М.м. 121,19). 2,3-Ксилидин.
Жидкость желтоватого цвета.
Умеренно растворим в воде, растворим в спирте 96 %.
dl . От 0,993 до 0,995.
20
По . Около 1,569.
Температура кипения. Около 224 °С.
Диметилацетамид. C4H9NO. (М.м. 87,12). ]чГ,К-Диметилацетамид.
Содержит не менее 99,5 % C4H9NO.
Бесцветная жидкость.
Смешивается с водой и большинством органических растворителей.
,20
иго . Около 0,94.
20
По .Около 1,437.
Температура кипения. Около 165 °С
Диметилглиоксим. (H3CC=NOH)2. (М.м. 116,12). 2,3-Бутандиондиоксим.
Кристаллический порошок белого цвета или бесцветные кристаллы.
Практически нерастворим в холодной воде, очень мало растворим в кипящей
воде, растворим в спирте 96 % и эфире.
Температура плавления. Около 240 °С с разложением.
Сульфатная зола: Не более 0,05 %.
Диметилглиоксима раствор. 1 г диметилглиоксима растворяют в 100 мл 5 %
раствора натрия гидроксида.
Диметилдециламин. C12H27N. (М.м. 185,35). К,М-Диметилдециламин.
Содержит не менее 98,0 % (м/м) C12H27N.
Температура кипения. Около 234 °С.
Ш

Диметилкарбонат. С3Н603 (М.м. 90,08). Диметиловый эфир угольной кислоты.
Бесцветная жидкость. Нерастворим в воде, смешивается со спиртом 96 %.
cti . Около 1,065.
Па . ОКОЛО 1,368.
Температура кипения. Около 90 °С.
Диметиловый желтый. Cj4H15N3. (М.м. 225,29). 4-Диметиламинобензол. Метиловый
желтый.
Мелкие кристаллы желтого цвета или хлопья желтого или оранжевого
цвета. Практически нерастворим в воде, очень мало растворим в спирте
96 %.
Хроматография. Определение проводят методом тонкослойной хроматографии,
используя в качестве тонкого слоя силикагель G. На хроматографическую пластинку
наносят 10 мкл 0,01 % раствора диметилового желтого в метиленхло-
риде и хроматографируют в этом же растворителе, фронт растворителя должен
пройти не менее 10 см; на хроматограмме должно обнаруживаться только одно
основное пятно.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Диметилового желтого и орацетового синего раствор
10 мг диметилового желтого и 10 мг орацетового синего В растворяют в 300 мл
метиленхлорида.
Диметилового желтого раствор
1. 0,1 % раствор в спирте 96 %.
2. 0,1 % раствор в бензоле.
Переход окраски раствора от красной к желтой в интервале рН 3,0-4,0.
1Ч,1Ч-Диметилоктиламин. C10H23N. (М.м. 157,29). Октилдиметиламин.
Бесцветная жидкость.
Очень мало растворим в воде, растворим в этаноле и эфире.
d2o . Около 0,765.
20
и» . Около 1,424.
Температура кипения. Около 195 °С.
1,3-Диметил-2-имидозолидинон. C5H10N2O. (М.м. 114,15). Ы,К'-Диметил-
этиленмочевина.
20
По . Около 1,4720.
Температура кипения. Около 224 °С.
Диметилпиперазин. C6H14N2. (М.м. 114,19). 1,4-Диметилпиперазин.
Бесцветная жидкость. Смешивается с водой и спиртом 96 %.
dl . Около 0,85.
20
w« . Около 1,446.
Температура кипения. Около 131 °С.
Диметилстериламид. C2oH4iNO. (М.м. 311,54). ]Ч[,К-Диметилстеариламид.
Твердая масса белого или почти белого цвета.
Растворим в большинстве органических растворителей, включая ацетон.
Температура плавления. Около 51 °С.
ЕЭ

Диметилсульфоксид. CH3S(0)CH3. (М.м.78,14).
Прозрачная, бесцветная, маслянистая, гигроскопичная жидкость.
Смешивается с водой и спиртом 96 %.
изо • Около 1,10.
Температура кипения. Около 189 °С.
Вода. Не более 10 г/л.
Диметилсульфоксид, используемый в спектрофотометрии, должен выдерживать
требования для диметилсульфоксида, но с другим содержанием
воды, приведенным ниже, и, кроме того, должен выдерживать следующие
дополнительные испытания.
Минимальное пропускание. 10 % при длине волны 262 нм; 35 % при длине
волны 270 нм; 70 % при длине волны 290 нм; 98 % при длине волны 340 нм
и более.
Определение проводят, используя в качестве раствора сравнения воду.
Вода. Не более 0,2 % (м/м).
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Диметилсульфон. C2H602S. (М.м. 94,13).
Кристаллический порошок белого цвета.
Легко растворим в воде, растворим в ацетоне и спирте 96 %.
Температура плавления. От 108 до ПО °С.
Диметилтетрадециламин. C16H35N. (М.м. 241,45). Т^К-Диметилтетрадецил-
амин.
Содержит не менее 98,0 % (м/м) и не более 101,0 % (м/м) C16H35N.
Прозрачная или почти прозрачная, бесцветная или желтоватого цвета жидкость.
Практически нерастворим в воде, смешивается с ацетоном, спиртом 96 % и метанолом.
,20
«20 . Около 0,80.
Температура кипения. Около 260 °С.
Вода. Не более 0,3 % (м/м).
Количественное определение. 0,200 г растворяют в 10 мл спирта 96 % и титруют
0,1 М раствором хлористоводородной кислоты до красного окрашивания,
используя в качестве индикатора 0,1 мл 0,05 % раствора метилового
красного.
1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 24,15 мг
Ci6H35N.
2,6-Диметилфенол. С6Н3ОН(СН3)2. (М.м. 122,16).
Бесцветные игольчатые кристаллы.
Мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 % и эфире.
Температура кипения. Около 203 °С.
Температура плавления. От 46 до 48 °С.
3,4-Диметилфенол. С6Н3ОН(СН3)2. (М.м. 122,16).
Кристаллы белого или почти белого цвета.
Мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 %.
Температура кипения. Около 226 °С.
Температура плавления. От 25 до 27 °С.

Диметилформамид. HCON(CH3 )2> (М.м. 73,10).
Прозрачная, бесцветная жидкость.
Смешивается с водой и спиртом 96 %.
dl . От 0,949 до 0,952.
Температура кипения. Около 153 °С.
Вода. Не более 0,1 %.
Диметилформамида диэтилацеталь. C7H17N02. (М.м. 147,22). N,N^HMe-
тилформамида диацеталь.
По . Около 1,40.
Температура кипения. От 128 до 130 °С.
1,1-Диметилэтиламин. (CH3)3CNH2. (М.м. 73,14). 2-Амино-2-метилпропан,
тя/7ет-Бутиламин.
Жидкость.
Смешивается со спиртом 96 %.
dl . Около 0,694.
20
nD .Около 1,378.
Температура кипения. Около 46 °С.
1,1-Диметилэтилметиловый эфир. (СН3)2СНСН2ОСН3. (М.м. 88,15).
mpem-Бутилметиловый эфир.
Бесцветная, прозрачная, воспламеняющаяся жидкость.
Очень мало растворим в воде, смешивается с этанолом и эфиром.
20
По . Около 1,376.
Минимальное пропускание. Не менее 50 % при длине волны 240 нм; не менее
80 % при длине волны 255 нм; не менее 98 % при длине волны 280 нм.
Определение проводят, используя в качестве раствора сравнения воду.
Диметоксипропан. С5Н1202. (М.м. 104,15). 2,2-Диметоксипропан.
Бесцветная жидкость. Разлагается под действием влажного воздуха или
воды.
Растворим в этаноле и эфире.
, 20
fl2o . Около 0,847.
20
По . Около 1,378.
Температура кипения. Около 83 °С.
Димидия бромид. C20H18BrN3. (М.м. 380,28). 3,8-Диамино-5-метил-6-фенил-
фенантридиния бромид.
Кристаллы темно-красного цвета.
Мало растворим в воде при температуре 20 °С, умеренно растворим в воде при
температуре 60 °С и спирте 66 %, практически нерастворим в эфире.
Димидия бромида и сульфанового синего смешанный раствор
Отдельно растворяют 0,5 г димидия бромида и 0,25 г сульфанового синего в
30 мл горячей смеси растворителей этанол - вода (1:9) и перемешивают. Оба раствора
смешивают и доводят объем раствора той же смесью растворителей до
250 мл. 20 мл полученного раствора смешивают с 20 мл раствора 14,0 % (об/об)
серной кислоты, предварительно разведенной примерно 250 мл воды, доводят
водой до объема 500 мл.
тчзз

Хранят в защищенном от света месте.
Динатрия арсенат. Na2HAs04 • 7Н20. (М.м. 312,0). Динатрия гидроарсенат, геп-
тагидрат.
Кристаллы, выветривающиеся на воздухе.
Легко растворим в воде, растворим в глицерине, мало растворим в спирте
96 %. Водный раствор имеет щелочную реакцию по лакмусу.
dlo ¦ Около 1,87.
Температура плавления. Около 57 °С (при быстром нагревании).
Динатрия гидрофосфат. Na2HP04 • 12Н20. (М.м. 358,17). Натрий фосфорнокислый
двузамещенный 12-водный. Натрия фосфат двузамещенный.
Прозрачные, бесцветные кристаллы. Выветриваются на воздухе.
Легко растворим в воде, очень мало растворим в спирте 96 %.
Динатрия гидрофосфата раствор 9 %. Раствор 90 г/л.
Динатрия гидрофосфата раствор 0,2 М
35,598 г динатрия гидрофосфата дигидрата растворяют в достаточном количестве
воды и разбавляют объем раствора водой до 1000,0 мл.
Динатрия гидрофосфат безводный. Na2HP04. (М.м. 141,96).
Белый кристаллический порошок, гигроскопичный.
Умеренно растворим в воде, очень легко растворим в горячей воде, очень мало
растворим в спирте 96 %.
Динатрия гидрофосфат, дигидрат. Na2HP04 2H20. (М.м. 177,99).
Бесцветные кристаллы, выветриваются на воздухе.
Растворим в воде, очень легко растворим в горячей воде.
Динатрия гидроцитрат. C6H6Na207 • 1,5 Н20. (М.м. 263,11). Натрия цитрат
кислый. Динатрия 2-гидроксипропан-1,2,3-трикарбоксилат кислый, сескви-
гидрат.
Порошок белого цвета.
Растворим менее чем в 2 частях воды, практически нерастворим в спирте 96 %.
Динатрия сульфид нонагидрат. См. Натрия сульфид.
Динатрия тетраборат. Бура. См. Натрия тетраборат.
Динатрия тетрабората раствор. См. Натрия тетрабората раствор.
Динитробензоилхлорид. (N02)2C6H3C0C1. (М.м. 230,56). 3,5-Динитробен-
зоилхлорид.
Кристаллический порошок светло-желтого цвета или желтоватые кристаллы в
виде игл.
Растворим в эфире; в воде и спирте 96 % разлагается.
Температура плавления. Около 68 °С.
Динитробензойная кислота. (N02)2C6H3COOH. (М.м. 212,12). 3,5-Динитро-
бензойная кислота.
Кристаллы почти бесцветные.
Мало растворима в воде, очень легко растворима в спирте 96 %.
Температура плавления. Около 206 °С.
Динитробензойной кислоты раствор 2 %. Раствор 20 г/л в спирте 96 %.
Динитробензол. C6H4(N02)2. (М.м. 168,11). 1,3-Динитробензол. л*-Динитро-
бензол.
шз

Кристаллический порошок или кристаллы желтоватого цвета.
Практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. Около 90 °С.
Динитробензола раствор. Раствор 10 г/л в спирте 96 %.
Динитрофенилгидразин. ( N C ^ C ^ N H N ^ . (М.м. 198,15). 2,4-Динитро-
фенилгидразин.
Кристаллы красновато-оранжевого цвета.
Очень мало растворим в воде, мало растворим в спирте 96 % и эфире; растворим
в этил ацетате.
Температура плавления. Около 203 °С с разложением.
Динитрофенилгидразина уксусно-хлористоводородный раствор
0,2 г динитрофенилгидразина растворяют в 20 мл метанола, прибавляют
80 мл смеси равных объемов уксусной кислоты разведенной 30 % и хлористоводородной
кислоты 25 % и перемешивают.
Готовят непосредственно перед использованием.
Динитрофенилгидразина хлористоводородный раствор
0,50 г динитрофенилгидразина растворяют при нагревании в хлористоводородной
кислоте разведенной 8 %, доводят объем раствора тем же растворителем до
100 мл, охлаждают и фильтруют.
Готовят непосредственно перед использованием.
2,4-Динитрофенилгидразина спиртовый раствор
0,5 г 2,4-динитрофенилгидразина смешивают с 6 мл хлористоводородной кислоты
концентрированной и перемешивают до исчезновения красно-оранжевого
окрашивания осадка. Прибавляют 20 мл этанола, нагревают смесь на водяной
бане до получения прозрачного раствора, охлаждают и доводят этанолом до
100 мл.
Полученный раствор хранят в холодном месте. Срок годности - 3 мес.
2,4-Динитрохлорбензол. C1C6H3(N02)2- (М.м. 202,55). 1-Хлор-2,4-динитро-
бензол.
Бледно-желтоватые кристаллы. При быстром нагревании до высокой температуры
может взрываться.
Практически нерастворим в воде, растворим в этаноле и эфире.
Динонилфталат. С2^^л- (М.м. 418,6).
Бесцветная или светло-желтого цвета вязкая жидкость.
dl . От 0,97 до 0,98.
20
По .От 1,482 до 1,489.
Вода. Не более 0,1 %.
Диоксан. С4Н802. (М.м. 88,11). 1,4-Диоксан.
Прозрачная, бесцветная жидкость, со слабым приятным запахом.
Смешивается с водой и большинством органических растворителей.
Около 1,03.
Температура затвердевания. От 9 до 11 °С.
Вода. Не более 0,5 %.
Не перегоняют, если диоксан не выдерживает испытания на пероксиды.
Пероксиды. 8 мл раствора крахмала с калия йодидом помещают в
ED

цилиндр с притертой стеклянной пробкой емкостью 12 мл и диаметром
около 1,5 см, заполняют полностью диоксаном и перемешивают. Выдерживают
в темном месте в течение 30 мин. Не должно обнаруживаться
окрашивания.
Диоксан, используемый для жидкостной сцинтилляции, должен быть соответствующей
степени чистоты.
Диоксана исходный раствор 0,1 %
1,00 г диоксана растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем
до 100,00 мл. 5,0 мл полученного раствора доводят водой до объема
50,0 мл (1,0мг/мл).
Диоксана раствор 0,05 %
50,0 мл исходного раствора диоксана доводят водой до объема 100,0 мл
(0,5 мг/мл диоксана).
Диоксана раствор 0,01 %
10,0 мл 0,05 % раствора диоксана доводят водой до объема 50,0 мл (0,1 мг/мл
диоксана).
Ди(октадецил)-3,3'-тиодипропионат. C42H8204S. (Мм. 683,1).
Кристаллический порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в метиленхлориде, умеренно
растворим в ацетоне, спирте 96 % и петролейном эфире.
Температура плавления. От 58 до 67 °С.
2,2'-Ди(октадецилокси)-5,5'-спироби(1,3,2-диоксафосфаринан). C4iH8206P2.
(М.м. 733,0).
Твердое, воскообразное вещество белого цвета.
Практически нерастворим в воде, растворим в растворах гидрокарбонатов.
Температура плавления. От 40 до 70 °С.
Диоктадецилдисульфид. C36H74S2. (М.м. 571,1).
Порошок белого цвета. Практически нерастворим в воде.
Температура плавления. От 53 до 58 °С.
Дисульфин синий. См. Сульфановый синий.
Дитизон. C13H12N4S. (М.м. 256,33). 1,5-Дифенилтиокарбазон.
Порошок синевато-черного или коричневато-черного, или черного цвета. Практически
нерастворим в воде, растворим в спирте 96 %.
Хранят в защищенном от света месте.
Дитизона раствор 0,05 %. Раствор 0,5 г/л в хлороформе.
Готовят непосредственно перед использованием.
Дитизона раствор 0,0012 %
40,0 мг дитизона растворяют в хлороформе и доводят объем раствора тем же растворителем
до 1000,0 мл. 30,0 мл полученного раствора доводят хлороформом
до объема 100,0 мл.
Установка титра. Количество ртути(И) хлорида, эквивалентное 0,1354 г
HgCl2, растворяют в смеси равных объемов серной кислоты разведенной
9,8 % и воды и доводят объем раствора той же смесью растворителей
до 100,0 мл. 2,0 мл полученного раствора доводят смесью равных объемов
серной кислоты разведенной 9,8 % и воды до объема 100,0 мл (раствор со-
ПЗ

держит 20 ppm Hg). 1,0 мл полученного раствора помещают в делительную
воронку, прибавляют 50 мл серной кислоты разведенной 9,8 %, 140 мл воды
и 10 мл раствора 200 г/л гидроксиламина гидрохлорида. Титруют приготовленным
раствором дитизона; после каждого прибавления титранта смесь
встряхивают двадцать раз, к концу титрования смесь оставляют для разделения
слоев, затем отбрасывают хлороформный слой и продолжают титровать
до синевато-зеленого окрашивания.
Количество ртути (Э) в миллиграммах, эквивалентное содержанию дитизона
в одном миллилитре раствора, вычисляют по формуле: Э = 20/V,
где V - объем раствора дитизона, израсходованный на титрование, в миллилитрах.
5,5'-Дитиобис(2-нитробензойная кислота). C14H8N208S2. (М.м. 256,34).
З-Карбокси-4-нитрофенилдисульфид. Реактив Эльмана. DTNB.
Порошок желтого цвета.
Умеренно растворима в спирте 96 %.
Температура плавления. Около 242 °С.
Дитиол. C7H8S2. (М.м. 156,25). Толуол-3,4-дитиол. 4-Метилбензол-1,2-
дитиол.
Кристаллы белого цвета, гигроскопичны.
Растворим в метаноле и растворах гидроксидов щелочных металлов.
Температура плавления. Около 30 °С.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Дитиола реактив
1 г дитиола растворяют в 2 мл кислоты тиогликолевой и доводят объем раствора
2 % раствором натрия гидроксида до 250 мл.
Готовят непосредственно перед использованием.
Дитиотреитол. C4H10O2S2. (М.м. 154,24). трео-1,4-Димеркаптобутан-2,3-диол.
Игольчатые слабо гигроскопичные кристаллы.
Легко растворим в воде, ацетоне и этаноле.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Дифениламин. NH2C6H4C6H5. (М.м. 169,23).
Кристаллы белого цвета.
Мало растворим в воде, растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. Около 55 °С.
Хранят в защищенном от света месте.
Дифениламина раствор
0,05 г дифениламина растворяют в смеси 10 мл серной кислоты концентрированной
и 2 мл воды.
Дифениламина раствор ОД %
Раствор 1 г/л в серной кислоте концентрированной.
Хранят в защищенном от света месте.
Дифениламина раствор 1 %
Раствор 10 г/л в серной кислоте концентрированной. Раствор должен быть бесцветным.

Дифениламина уксуснокислый раствор
1 г дифениламина растворяют в 100 мл уксусной кислоты ледяной и прибавляют
2,75 мл кислоты серной концентрированной.
Готовят непосредственно перед использованием.
Дифенилантрацен. С26Н18. (М.м. 330,40). 9,10-Дифенилантрацен.
Кристаллический порошок от желтоватого до желтого цвета.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в эфире.
Температура плавления. Около 248 °С.
Дифенилбензидин. C24H20N2. (М.м. 336,42). Ы,Н'-Дифенилбензидин.
М,№-Дифенилбифенил-4,4'- диамин.
Кристаллический порошок белого или белого с сероватым оттенком цвета. Практически
нерастворим в воде, мало растворим в ацетоне и спирте 96 %.
Температура плавления. Около 248 °С.
Хранят в защищенном от света месте.
Дифенилборной кислоты аминоэтиловый эфир. C14H16BNO. (М.м. 225,09).
Кристаллический порошок белого или слегка желтоватого цвета. Практически
нерастворим в воде, растворим в спирте 96 %.
Температура плавления. Около 193 °С.
]\,]Ч'-Дифенилгуанидин. C13H13N3. (М.м. 211,27).
Мелкокристаллический порошок белого или светло-желтого цвета.
Очень мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 %, мало растворим
в эфире, умеренно растворим в хлороформе.
Дифенилкарбазид. (C6H5NHNH)2CO. (М.м. 242,28). 1,5-Дифенилкарбон-
дигидразид.
Кристаллический порошок белого цвета, постепенно розовеет на воздухе. Очень
мало растворим в воде, растворим в ацетоне, спирте 96 % и уксусной кислоте ледяной.
Температура плавления. Около 170 °С.
Сульфатная зола. Не более 0,1 %.
Хранят в защищенном от света месте, в сосудах оранжевого стекла.
Дифенилкарбазида раствор
0,2 г дифенилкарбазида растворяют в 10 мл уксусной кислоты ледяной и доводят
объем раствора спиртом 96 % до 100 мл.
Готовят непосредственно перед использованием.
Дифенилкарбазон. C13H12N40. (М.м. 240,27). 1,5-Дифенилкарбазон.
Кристаллический порошок оранжево-желтого цвета.
Практически нерастворим в воде, очень легко растворим в спирте 96 %, хлороформе
и бензоле.
Температура плавления. Около 157 °С с разложением.
Раствор индикатора: 1 % раствор в спирте 96 %. Растворение проводят при нагревании
на водяной бане. Хранят во флаконах оранжевого стекла. Срок годности-
15 сут.
Дифенилкарбазон-ртутный реактив
Раствор I. 0,1 г дифенилкарбазона растворяют в спирте 96 % и доводят объем
раствора тем же растворителем до 50 мл.
ЕЕНГ

Раствор П. 1 г ртути(П) хлорида растворяют в спирте 96 % и доводят объем раствора
тем же растворителем до 50 мл.
Смешивают равные объемы растворов I и П.
Дифенилоксазол. C15HnNO. (М.м. 221,25). 2,5-Дифенилоксазол.
Порошок белого цвета.
Практически нерастворим в воде, растворим в метаноле, умеренно растворим в
диоксане и кислоте ледяной уксусной.
Температура плавления. Около 70 °С с разложением.
Л\см . Около 1260. Определение проводят при длине волны 305 нм, используя в
качестве растворителя метанол.
Дифенилоксазол, используемый для жидкостной сцинтилляции, должен быть
соответствующей степени чистоты.
Дифенилфениленоксида полимер. Полимер 2,6-дифенил-и-фениленоксида.
Пористые гранулы шарообразной формы белого или почти белого цвета. Размер
гранул указывают в испытаниях, в которых они используются.
Дихлорбензол. С6Н4С12. (М.м. 146,99). 1,2-Дихлорбензол.
Бесцветная, маслянистая жидкость.
Практически нерастворим в воде, растворим в этаноле и эфире.
,20
U 20 . Около 1,31.
Температура кипения. Около 180 °С.
Дихлорметан. См. Метиленхлорид.
Дихлорофос. C4H7CI2O4P. (М.м. 221,0). 2,2-Дихлорвинилдиметилфосфат.
Жидкость от бесцветного до коричневато-желтого цвета.
Растворим в воде, смешивается с большинством органических растворителей.
По .Около 1,452.
Дихлоруксусная кислота. СНС12 СООН. (М.м. 128,94).
Бесцветная жидкость. Смешивается с водой, спиртом 96 % и эфиром.
,20
«20 . Около 1,566.
20
По .Около 1,466.
Температура кипения. Около 193 °С.
Дихлоруксусной кислоты раствор
67 мл дихлоруксусной кислоты доводят водой до объема 300 мл и нейтрализуют
раствором аммиака концентрированным по синей лакмусовой бумаге. Охлаждают,
прибавляют 33 мл дихлоруксусной кислоты и доводят водой до объема
600 мл.
Дихлорфенолиндофенола натриевая соль. C12H6Cl2NNa02 2H20. (М.м.
326,1). Натрия 2,6-дихлор-М-(4-гидроксифенил)-1,4-бензохинонмоноимин, ди-
гидрат. 2,6-Дихлорфенолиндофенолят натрия.
Порошок темно-зеленого цвета.
Легко растворима в воде и спирте 96 %.
Водный раствор имеет темно-синюю окраску, которая при подкислении раствора
переходит в розовую.
2,6-Дихлорфенолиндофенолят натрия. См. Дихлорфенолиндофенола натриевая
соль.
ЕЭ

Дихлорфенолиндофенола титрованный раствор
50,0 мг дихлорфенолиндофенола натриевой соли растворяют в 100,0 мл воды и
фильтруют.
Установка титра. 20,0 мг аскорбиновой кислоты растворяют в 10 мл свежеприготовленного
20 % раствора (200 г/л) метафосфорной кислоты и доводят
объем раствора водой до 250,0 мл. 5,0 мл полученного раствора быстро титруют
приготовленным раствором дихлорфенолиндолфенола из микробюретки с ценой
деления 0,01 мл до розового окрашивания, не исчезающего в течение 10 с, время
титрования должно быть не более 2 мин. Раствор дихлорфенолиндолфенола разводят
водой до получения раствора, 1 мл которого соответствует 0,1 мг аскорбиновой
кислоты (С6Н806).
Срок годности - 3 сут. Титр устанавливают непосредственно перед использованием.
2,6-Дихлорфенолиндофенолята натрия раствор 0,001 М. См. Дихлорфенолиндофенола
титрованный раствор.
Дихлорфлуоресцеин. С2оН10С1205. (М.м. 401,2). 2,7-Дихлорфлуоресцеин.
2-(2,7-Дихлор-6-гидрокси-3-оксо-ЗН-ксантен-9-ил)бензойная кислота.
Порошок от желтовато-коричневого до желто-оранжевого цвета.
Мало растворим в воде, легко растворим в спирте 96 % и разведенных растворах
гидроксидов щелочных металлов с образованием раствора с желтовато-
зеленой флуоресценцией, практически нерастворим в эфире.
2,6-Дихлорхинонхлоримид. C6H2Cl3NO. (М.м. 210,45). 2,6-Дихлорхинон-4-
хлоримид. 2,6-Дихлор-Ы-хлор-1,4-бензохинонмоноимин.
Кристаллический порошок от светло-желтого до зеленовато-желтого цвета.
Практически нерастворим в воде, растворим в спирте 96 % и разведенных растворах
гидроксидов щелочных металлов.
Температура плавления. Около 66 °С.
2,6-Дихлорхинонхлоримида раствор. 0,02 г перекристаллизованного из ацетона
2,6-дихлорхинонхлоримида растворяют в 50 мл свежеперегнанного бутилового
или изопропилового спирта.
Хранят на холоде в банке оранжевого стекла.
При появлении розового окрашивания раствор к применению не пригоден.
Дихлорэтан. 1,2-Дихлорэтан. Этилен хлористый. См. Этиленхлорид.
Дихлорэтан, насыщенный водой
Смешивают дихлорэтан с водой в соотношении 1:2, энергично встряхивают 15-
20 мин и оставляют до разделения слоев. Отбирают дихлорэтановый слой.
Готовят непосредственно перед использованием.
Дициклогексиламин. Ci2H23N. (М.м. 181,31). ИЛ-Дициклогексиламин.
Бесцветная жидкость.
Умеренно растворим в воде, смешивается с обычными органическими растворителями.
nl . Около 1,484.
Температура кипения. Около 256 °С.
Температура затвердевания. 0-1 °С.
Дициклогексилмочевина. C13H24N20. (М.м. 224,34). 1,3-Дициклогексил-
мочевина.

Кристаллический порошок белого цвета.
Температура плавления. Около 232 °С.
Диэтаноламин. (C2H5)2NH. (М.м. 105,14). 2,2'-Иминобисэтанол.
Прозрачная, вязкая жидкость слегка желтоватого цвета или кристаллы, расплывающиеся
на воздухе, плавятся при температуре около 28 °С.
Смешивается с водой и спиртом 96 %, легко растворим в ацетоне и эфире.
ctl . Около 1,09.
рН. От 10,0 до 11,5 (5 % раствор).
Диэтиламин. (C2H5)2NH. (М.м. 73,14).
Прозрачная, бесцветная, воспламеняющаяся жидкость. Имеет сильнощелочную
реакцию.
Смешивается с водой и спиртом 96 %. Обращаться с осторожностью.
Около 0,71.
Температура кипения. Около 55 °С.
Диэтиламиноэтилдекстран
Анионообменная смола в форме гидрохлорида.
Порошок, образующий с водой гель.
1Ч,]Ч-Диэти л анилин. C6H5N(C2H5)2. (М.м. 149,24). N-Фенилдиэтиламин.
Прозрачная, бесцветная или слегка желтоватая воспламеняющаяся жидкость,
имеет сильную щелочную реакцию.
Практически нерастворим в воде, легко растворим в спирте 96 % и эфире.
dl . Около 0,938.
Температура кипения. Около 217 °С.
Температура плавления. Около -38 °С.
Ди(2-этилгексил)фталат. С24Н380. (М.м. 390,54). Ди-(2-этилгексил)бензол-
1,2-дикарбоксилат.
Прозрачная, маслянистая жидкость.
Практически нерастворим в воде, растворим в органических растворителях.
d* . Около 0,98.
20
По . Около 1,486.
Вязкость. Около 80Пас.
Диэтиленгликоль. С4Н10О3. (М.м. 106,12). 2,2'-Оксидиэтанол.
Содержит не менее 99,5 % (м/м) С4Н10О3.
Прозрачная, бесцветная, гигроскопичная жидкость.
Смешивается с водой, ацетоном и спиртом 96 %.
dl .Около 1,118.
20
"о .Около 1,447.
Температура кипения. От 244 до 246 °С.
Хранят в воздухонепроницаемом контейнере.
Диэтилфенилендиамина сульфат. C10H18N2O4S. (М.м. 262,32). КЫ'-Диэтил-
я-фенилендиамина сульфат. Ы,К'-Диэтилбензол-1,4-диамина сульфат.
Порошок белого или слегка желтоватого цвета. Растворим в воде.
Температура плавления. Около 185 °С, с разложением.
Хранят в защищенном от света месте.
T7F1